中藥血清藥理學(xué)研究方法應(yīng)用現(xiàn)狀及展望

1、中藥血清藥理學(xué)研究方法應(yīng)用現(xiàn)狀及展望    【摘要】  近年來中藥血清藥理學(xué)研究取得了可喜的成績，隨著中藥血清藥理學(xué)所存在的問題的逐步解決、方法更進(jìn)一步的成熟和完善，它將更廣泛地應(yīng)用于：（1）復(fù)方藥物的評價，具有直接的、快速的、敏感的、準(zhǔn)確的作用等特點(diǎn)；（2）復(fù)方藥物的機(jī)制研究，血清藥理學(xué)是復(fù)方藥物的機(jī)制研究主要研究方法之一，隨著化學(xué)分析手段的的完善，復(fù)方藥物中有效成分的逐步確認(rèn)，其藥理學(xué)機(jī)制也終將被揭開；（3）老年癡呆等慢性病及微生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)和生理學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科的研究。 【關(guān)鍵詞】  血清藥理學(xué)；研究方法；綜述中藥血

2、清藥理學(xué)是近年來逐漸發(fā)展起來的研究中藥藥效較為科學(xué)的一種方法。它是由日本學(xué)者田代真一于1988年首次提出的，該方法就是將動物灌服給予中藥或復(fù)方制劑后，在一定時間采集血液、分離血清進(jìn)行體外藥效實驗。1990年，姜廷良教授1將它引入我國，之后國內(nèi)許多學(xué)者和專家進(jìn)行了大量的研究工作，取得了可喜的成績，積累了一定的經(jīng)驗，為中藥作用機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)的深入研究奠定了基礎(chǔ)。我國已將它列入國家自然科學(xué)基金資助范圍2，現(xiàn)就其研究應(yīng)用現(xiàn)狀作一綜述。1  中藥血清藥理學(xué)方法在我國的應(yīng)用現(xiàn)狀1.1  對中藥解熱作用的研究  楊奎等34研究含黃芩、藿香、羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清對單核細(xì)胞

3、內(nèi)DNA合成、Ca2+內(nèi)流的影響，發(fā)現(xiàn)：含黃芩血清能明顯抑制單核細(xì)胞內(nèi)DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流，因而能阻止內(nèi)生致熱原的合成；而含藿香、羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清對單核細(xì)胞的合成的抑制作用依次增強(qiáng)，含香薷血清呈明顯量效遞增性抑制作用，含羌活勝濕湯和九味羌活湯的血清兩者在大劑量時卻呈促進(jìn)作用；對單核細(xì)胞內(nèi)流的影響，香薷的作用較九味羌活湯弱，但均呈量效遞增性抑制作用，而羌活勝濕湯則與此相反，在較大劑量時翻轉(zhuǎn)為促進(jìn)Ca2+內(nèi)流作用；時效關(guān)系表明，九味羌活丸對內(nèi)流的抑制作用在給藥后90min達(dá)高峰，對DNA合成的抑制作用在給藥后30min和90min間較明顯，對蛋白質(zhì)合成的影響在給藥后120min

4、內(nèi)呈輕微促進(jìn)作用。該實驗表明采用中藥血清藥理學(xué)方法進(jìn)行中藥時效關(guān)系研究，有較大的優(yōu)勢。1.2  對中藥抗腫瘤作用的研究  楊振江5等研究表明：含髓清丸中劑量組和高劑量組血清活細(xì)胞百分率均較對照組低，OD值明顯低于對照組，中劑量組和高劑量組細(xì)胞毒活性均大于20%，高劑量含藥血清組G1期DNA含量明顯低于對照組，中劑量組凋亡細(xì)胞百分率較高。髓清丸能抑制HEL細(xì)胞的增殖，并有一定的誘導(dǎo)HEL細(xì)胞分化、凋亡的作用。張建軍等6研究發(fā)現(xiàn)：富硒綠茶藥物血清對人肝癌細(xì)胞株能抑制生長，抑制克隆，減少AFP和GT的合成和分泌，促進(jìn)ALB的合成，且呈現(xiàn)一定的濃度、時間依賴關(guān)系，對人肝癌細(xì)胞株惡性

5、表型有逆轉(zhuǎn)作用，可誘導(dǎo)癌細(xì)胞向正常方向分化。王力倩7等應(yīng)用中藥血清藥理學(xué)方法觀察了含苦參、仙鶴草的血清及其煎劑對腫瘤細(xì)胞體外生長的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除含仙鶴草血清外，其余都可明顯抑制S180細(xì)胞的生長。初步證明苦參對腫瘤細(xì)胞體外生長確有細(xì)胞毒作用，而含仙鶴草血清與其煎劑出現(xiàn)了不同的實驗結(jié)果，可能與中藥粗顆粒制劑干擾因素或與動物體內(nèi)代謝過程及血清影響有關(guān)。1.3  對呼吸系統(tǒng)的作用的研究  小柴胡湯：研究發(fā)現(xiàn)，小柴胡湯濃縮液直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中有致有絲分裂作用，而用小柴胡湯的血清則無此作用。小柴胡湯的致有絲分裂作用，可能是由一些不能從胃腸道吸收的大分子物質(zhì)產(chǎn)生，或因有效成分經(jīng)

6、消化道或肝臟代謝失效所致。小青龍湯：黃堅8等法研究發(fā)現(xiàn)，服用小青龍湯煎劑的豚鼠血清，具有顯著抗組織胺引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮作用，且呈良好的量效關(guān)系，與用煎劑直接進(jìn)行的離體藥理實驗的藥理效應(yīng)相似。1.4  對心血管系統(tǒng)的作用研究  邱幸生等9通過實驗表明：益氣通絡(luò)方低、中、高劑量含藥血清處理組心肌細(xì)胞bcl2陽性表達(dá)比例均較單純?nèi)毖踉俳o氧組（HR組）有顯著增高，提示bcl2具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。隋因10等觀察灌胃給予紅花提取物的家兔的含藥血清對豚鼠離體的心臟的作用，發(fā)現(xiàn)灌胃給予紅花提取物5、10、20g-1后，含藥血清均能顯著增加豚鼠離體心臟冠脈流量，增強(qiáng)心搏幅度及減

7、慢心率。并在灌胃給予紅花提取物后60min所采血清的指紋譜中出現(xiàn)一些新的峰。陳長勛11等采用中藥血清藥理學(xué)方法觀察了附子對離體豚鼠左心房收縮力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，口服附子粗顆粒制劑后的     動物血清與未服藥的動物血清比較，具有明顯增強(qiáng)心肌收縮力和加快心肌收縮速度的作用，且于給藥后2h血清作用達(dá)到高峰，從而證明附子強(qiáng)心有效成分能經(jīng)胃腸道吸收入血，且不會一經(jīng)吸收而失活，說明附子口服有效。張群豪12等研究表明：血府逐瘀煎劑濃縮液和含藥血清對實驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈平滑肌細(xì)胞（SMC）增殖有抑制作用，并呈劑量依賴性，且煎劑濃縮液作用強(qiáng)于含藥血清，而空白血清

8、則無此作用，該實驗為血府逐瘀的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。1.5  對免疫功能的影響作用的研究  梁春敏13等研究發(fā)現(xiàn)：玉屏風(fēng)散試驗血清在灌胃后30min2h時對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、小鼠IL2產(chǎn)生均有明顯促進(jìn)作用，其中以1h時作用最強(qiáng)，1h時對小鼠免疫功能有顯著增強(qiáng)作用。曾南14等觀察了灌服雪蓮蟲草精大鼠的抗凝血對NK細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明給藥物抗凝血可明顯增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，給藥動物血清1.25g/kg劑量組能增強(qiáng)IL-2活性，但7.5g/kg劑量組作用不明顯，而3.75g/kg劑量組則出現(xiàn)抑制作用，這可能與血清的稀釋度與內(nèi)容物有關(guān)。1.6  對中藥抗菌作用的研究&

9、#160; 楊奎15等應(yīng)用中藥血清藥理學(xué)方法進(jìn)行了中藥體外抗菌實驗，發(fā)現(xiàn)含藿香正氣水、藿香正氣液及黃芩的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑菌率在70%以上。該研究發(fā)現(xiàn)：一些含中藥血清卻表現(xiàn)為促進(jìn)細(xì)菌繁殖作用；同時中藥復(fù)方、單味中藥均可出現(xiàn)多個抑菌高峰，提示中藥抗菌成分復(fù)雜，其吸收高峰時間不一致，有利于抑制細(xì)菌繁殖。這說明中藥血清藥理學(xué)可用于檢測或反映中藥不良反應(yīng)。1.7  對中藥抗炎的作用的研究  研究中藥赤芍、黃連、牡丹皮、生姜、黃精、黃芩對花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化的影響時發(fā)現(xiàn)，含黃連、赤芍的血清可抑制花生四烯酸的生物轉(zhuǎn)化，而其煎劑則無此作用。與此相反，生姜、牡丹皮、黃芩、黃精煎劑

10、有抑制作用，而其含藥血清則無效。1.8  對骨骼系統(tǒng)的作用的研究  韓立民16等以淫羊藿給大鼠灌胃和肌注連續(xù)7天，末次給藥90min后股動脈無菌取血滅活、進(jìn)行成骨細(xì)胞（OB）培養(yǎng)。研究表明：服淫羊藿后的大鼠血清堿性磷酸酶活性顯著增高，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量增高，成骨細(xì)胞的數(shù)量增多，培養(yǎng)基中鈣含量明顯降低，劑量與作用呈正相關(guān)性，表明該藥是抗骨疏松癥的理想藥物之一。任光友17等用血清藥理學(xué)方法，在新生大鼠頭骨成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中，分別加入不同濃度的老年大鼠含羊藍(lán)合劑（YLM）血清，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中、高劑量組含羊藍(lán)合劑（YLM）血清對成骨細(xì)胞增殖率、成骨細(xì)胞ALP活性、成骨細(xì)胞BGP分泌，均有明

11、顯增長作用，說明老年大鼠含YLM血清對成骨細(xì)胞的增殖和分化功能具有增強(qiáng)作用。1.9  對中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的研究  李翠屏等18用Daniel方法建立神經(jīng)元缺氧凋亡模型，加入益氣通絡(luò)方藥物血清，應(yīng)用碘化丙啶采染色法經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測神經(jīng)元凋亡率，分光光度法檢測MDA、NO濃度，免疫組化法檢測bcl2表達(dá)，研究表明：益氣通絡(luò)方能顯著抑制缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)元凋亡，并減少神經(jīng)元缺氧過程N(yùn)O、OFR的生成，上調(diào)bcl-2基因的表達(dá)。聶偉19等運(yùn)用血清藥理學(xué)方法觀察六味地黃湯（LW）及其活性組分（CA4、CA4-3）含藥血清對原代培養(yǎng)胚胎大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：LW及CA4、CA

12、4-3含藥血清均可不同程度地提高海馬神經(jīng)元的存活率，并且與穩(wěn)定線粒體膜電位與其神經(jīng)保護(hù)作用具有密切關(guān)系。其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。而老年癡呆患者與中樞能量缺乏、神經(jīng)元數(shù)目減少與其線粒體功能障礙密切相關(guān)，提示該方法可用于老年癡呆的研究。1.10  對消化系統(tǒng)的作用的研究  劉成海20等研究表明，含扶正化瘀方的血清能明顯抑制肝貯脂細(xì)胞增殖，與藥物劑量及血清濃度呈正相關(guān)性，而且對貯脂細(xì)胞內(nèi)外膠原也有一定的抑制作用。曹宜21等通過觀察CC14、DGaIN+LPS和BCG+LPS誘導(dǎo)小鼠肝損傷茵陳蒿湯醇提物的氯仿、乙酸乙酯萃取部位及剩余乙醇提取物降低ALT活性的作用，發(fā)現(xiàn)茵陳蒿湯

13、醇提物的氯仿再提取部位的小鼠血清對DGaIN誘導(dǎo)大鼠的原代肝細(xì)胞ALT活性水平表現(xiàn)出穩(wěn)定的降低作用。李平22等研究發(fā)現(xiàn)：軟肝沖劑藥物血清對傳代的HSC增殖有明顯抑制作用，能顯著抑制HSC分泌TGF1，其作用與秋水仙堿相仿，可能是通過抑制細(xì)胞DNA合成及其有絲分裂，或抑制PDF1的產(chǎn)生及其受體表達(dá)，阻斷其信號傳導(dǎo)，減少TGF1的分泌，下調(diào)I型膠原的基因登錄來實現(xiàn)抗肝纖維化的機(jī)制的。1.11  對生殖系統(tǒng)的作用的研究&nbs     p; 夏譽(yù)薇23等以50例不孕患者作受試對象（中藥組40例和西藥組10例），利用雞胚絨毛尿囊膜（CAM）模型

14、評價女貞孕育湯的血管生成活性和促進(jìn)血管生成的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在中藥組和西藥組治療前后卵泡期、排卵前、經(jīng)前期血清的比較，均有顯著性差異。王明軍24研究發(fā)現(xiàn)：用傅氏生化湯的水提濃縮液、水提醇沉物、揮發(fā)油、醇提濃縮液分別給小鼠灌胃，在一定時間內(nèi)取其血清經(jīng)過滅活后，以各給藥組滅活后的灌胃給藥血清供試液代替藥物供試液，結(jié)果表明，水提醇沉物具有促子宮收縮的作用，而且強(qiáng)于離體實驗的結(jié)果。2  中藥血清藥理學(xué)研究方法的優(yōu)勢和存在的問題2.1  中藥血清藥理學(xué)研究方法的優(yōu)勢  中藥血清藥理學(xué)是在以往體外實驗的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)而形成的，即以含藥血清代替中藥粗提物進(jìn)行實驗，因而它最大的優(yōu)

15、點(diǎn)是：條件可控性強(qiáng)、揭示藥物作用機(jī)制較為深入、重復(fù)性好、使用材料少、更接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥效的真實過程等。其主要優(yōu)勢具體如下：（1）采用含藥血清培養(yǎng)細(xì)胞可直接觀察中藥的藥物學(xué)效應(yīng)，便于應(yīng)用細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)手段，從基因、基因產(chǎn)物、藥物受體和酶活性等諸方面闡述藥理機(jī)制。（2）使現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)有了一個可行的切合點(diǎn)，有利于應(yīng)用現(xiàn)代生命科學(xué)的技術(shù)手段和理論揭示中藥復(fù)方配伍的實質(zhì)，從而推動中醫(yī)藥的科技進(jìn)步。（3）便于觀察和追蹤藥物吸收和代謝的過程，消除體外實驗各種干擾因素的影響，以便于較為清楚地認(rèn)識復(fù)方藥物中主要藥物的有效成分及活性部位，為進(jìn)一步開發(fā)藥物提供依據(jù)。論文出處(作者):2.2&

16、#160; 血清藥理學(xué)研究方法存在的問題  中藥血清藥理學(xué)本身是一門方法學(xué)，從它引進(jìn)到我國到現(xiàn)在只有短短的十多年的時間，因而存在不少有待進(jìn)一步改進(jìn)之處：（1）血清學(xué)本身是一門方法學(xué)，其自身組分的復(fù)雜性至今尚未完全清楚，血清本身復(fù)雜的成分會影響體外實驗的結(jié)果，而中藥復(fù)方組分也是一個未知體系，兩個未知體系的疊加使原本復(fù)雜的體系更加復(fù)雜；而就目前的技術(shù)手段，尚不能分析復(fù)方血清中所有的單一成分，即無法詳盡地比較分析每一單一元素在復(fù)方中所起的作用，這無形中限制了中藥血清藥理學(xué)在中藥復(fù)方中的應(yīng)用范圍。（2）藥物血清的制備中，規(guī)范動物給藥方案和采血時間，確立藥物的時效關(guān)系和量效關(guān)系一直是中藥藥理研

17、究的焦點(diǎn)。而且由于實驗動物種屬的不同或種屬相同年齡性別的不同，都能引起實驗動物對藥物敏感程度的差異以及對復(fù)方藥物中不同組分的吸收、轉(zhuǎn)化、作用靶點(diǎn)的相異，因此實驗動物的種屬和年齡性別的選擇有待規(guī)范。（3）在體外培養(yǎng)體系中，不可能添加100%濃度的血清，而且不是所有的中藥都通過血液起作用，有的是對消化道直接作用，有的是通過局部起作用，這是血清藥理學(xué)難以解決的。（4）辨證論治是中醫(yī)診斷疾病的方法和特點(diǎn)，盡管實驗醫(yī)學(xué)已經(jīng)有人將實驗與證型相結(jié)合，但在實驗學(xué)中卻往往忽視中醫(yī)內(nèi)涵，如何將辨病論治與辨證論治結(jié)合是血清藥理學(xué)需要解決的問題。3  對中藥血清藥理學(xué)的展望   

18、; 盡管中藥血清藥理學(xué)的應(yīng)用、方法存在不少問題，但作為一門新興方法學(xué)，它在復(fù)方藥理學(xué)研究中具有不可代替的作用。隨著中藥血清藥理學(xué)所存在的問題的逐步解決、方法更進(jìn)一步的成熟和完善，它將更廣泛地應(yīng)用于：（1）復(fù)方藥物的評價，具有直接的、快速的、敏感的、準(zhǔn)確的作用等特點(diǎn)；（2）復(fù)方藥物的機(jī)制研究，血清藥理學(xué)是復(fù)方藥物的機(jī)制研究主要研究方法之一，隨著化學(xué)分析手段的的完善，復(fù)方藥物中有效成分的逐步確認(rèn)，其藥理學(xué)機(jī)制也終將被揭開；（3）老年癡呆等慢性病及微生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)和生理學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科的研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】     轉(zhuǎn)作用的血清藥理學(xué)研究J.微量元素

19、與健康研究，2002，19（2）：35.7 王力倩.用血清藥理學(xué)方法研究中藥苦參、仙鶴草的抗腫瘤作用J.中國中醫(yī)藥科技，1995，2（5）：199.8 黃堅.用血清實驗法觀察小青龍湯對離體豚鼠氣管平滑肌的作用J.中藥藥理與臨床，1995，11（6）：12.9 邱幸生.益氣通絡(luò)方對缺氧再給氧心肌細(xì)胞bcl-2基因表達(dá)影響的血清藥理學(xué)研究J.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2001，7（3）：3840.10隋因.運(yùn)用血清藥理學(xué)方法研究紅花對豚鼠離體心臟的作用J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2003，20（5）：373376.11陳長勛.用血清藥理學(xué)實驗方法觀察附子的強(qiáng)心作用J.中國中醫(yī)藥科技，1996，3（3）：12.12張群豪.用藥物血清學(xué)方法觀察血俯逐瘀濃縮丸對實驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響J.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16（3）：156.13梁春敏.玉屏風(fēng)散對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的血清藥理學(xué)研究J.上海免疫學(xué)雜志，200