ELISA試驗方法的基本原理

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay, ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。  ELISA的原理  ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。  進行檢測時，樣品中的受檢物質(zhì)（抗原或抗體）與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過洗板除去非結(jié)合物，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗

2、體，此時，能固定下來的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過加入與酶反應(yīng)的底物后顯色，根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進行定性或定量的分析。  由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的靈敏度。  ELISA的基本類型  ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。這種測定方法中有3種必要的試劑：1.  固相的抗原或抗體；2.  酶標(biāo)記的抗原或抗體；3.  酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。  1.  雙抗體夾心法測抗原

3、60; 針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。2.  競爭法測抗原  首 先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物 降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可，對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。優(yōu)點是快，缺點是需要較 多量的酶標(biāo)記抗原。3.  免疫抑制法測抗原   被檢標(biāo)本對底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比，二者之差即為預(yù)測抗原的量。4.  間接法測抗體是檢測抗體最常用的方法，原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體。   本法只要更換不同的固相抗