胰島素樣生長因子-Ⅰ及其受體在腦膜瘤細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)中的作用

1、    胰島素樣生長因子-及其受體在腦膜瘤細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)中的作用        我們采用放射自顯影方法檢測腦膜瘤組織中胰島素樣生長因子-I(IGF-I)受體的表達(dá)和分布，并觀察IGF-I對早期傳代人腦膜瘤細(xì)胞增殖和DNA合成的影響。 一、材料與方法1. IGF-I受體自顯影：IGF-I(Sigma公司)用氯胺-T法進(jìn)行碘化標(biāo)記1。10 m厚腦膜瘤或腦膜冰凍切片在適當(dāng)條件下與125 I-IGF-I進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，洗脫，干燥，放射自顯影。2. 細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)：1×105個細(xì)胞

2、/瓶植入25 cm2培養(yǎng)瓶中，無血清培養(yǎng)24 h后，實(shí)驗(yàn)組分別加入1×10-111×10-7 mol/L的IGF-I，對照組加入0.1%牛血清白蛋白(BSA)，5 d后收集細(xì)胞計數(shù)。3. 氚標(biāo)胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)摻合實(shí)驗(yàn)：3×104個細(xì)胞/孔植入24孔培養(yǎng)板，無血清培養(yǎng)24 h后，實(shí)驗(yàn)組分別加入1×10-121×10-7 mol/L IGF-I，對照組加入0.1%BSA或20%小牛血清的DMEM。共同培養(yǎng)22 h后每孔加入37 kBq 3H-TdR,繼續(xù)培養(yǎng)6 h，收集樣品用液體閃爍儀測定每孔每分鐘的放射性活度計數(shù)值。二、結(jié)果1. IG

3、F-I受體的表達(dá)：所用7例腦膜瘤(內(nèi)皮型3例、惡性2例、血管母細(xì)胞型1例、過渡型1例)組織中均可以見到IGF-I受體表達(dá)的銀顆粒，分布于腫瘤細(xì)胞膜上，對照的腦膜中未見受體表達(dá)。2. IGF-I對腦膜瘤細(xì)胞增殖的作用：如表1所示，IGF-I以濃度依賴形式刺激腦膜瘤細(xì)胞的增殖，在1×10-9 mol/L時達(dá)最大值，與對照組相比差異有非常顯著性(P0.01)。3. IGF-I對腦膜瘤細(xì)胞DNA合成的作用：如表2所示，5例腦膜瘤細(xì)胞在IGF-I作用下，3 H-TdR攝取率呈現(xiàn)劑量依賴形式上升，在1×10-9 mol/L或1×10-8 mol/L時達(dá)到最大值，為對照組的30

4、1%384%(P0.01)，EC50=(2.25±0.80)×10-11 mol/L。表1不同濃度IGF-I對腦膜瘤細(xì)胞數(shù)的影響(×105病例編號對照組(含0.1%BSA)實(shí)驗(yàn)組IGF-I濃度(mol/L)對照組(含20%血清)×10-11×10-10×10-9×10-8×10-711.26±0.171.27±0.191.61±0.242.58±0.281.99±0.241.53±0.185.56±0.3821.27±0.151.43&

5、#177;0.121.68±0.152.13±0.151.60±0.171.53±0.064.37±0.4231.08±0.131.36±0.241.80±0.252.31±0.231.96±0.321.76±0.254.02±0.36     注： 與對照組(含0.1%BSA)比較， P0.05， P0.01 表2IGF-I對腦膜瘤細(xì)胞3病例編號對照組(含0.1%BSA)IGF-I濃度(mol/L)對照組(含20%血清)×1

6、0-12×10-11×10-10×10-9×10-8×10-711 954±3622 783±4833 552±9164 985±312*6 928±451*6 447±451*6 369±540*9 483±55422 766±4124 738±6754 932±1 2037 791±1 210*10 639±1 551*6 561±9075 669±77512 552±1 28332

7、 613±3262 787±5814 303±6366 502±436*7 875±396*7 604±161*6 843±949*10 147±87042 096±4763 457±8724 049±9556 059±1 067*6 541±570*6 691±1 071*6 377±1 5818 386±1 02152 489±5313 366±6574 043±4837 188±391*8

8、371±501*7 255±1 9547 464±1 90810 064±1 084     注： 與對照組(含0.1%BSA)比較，P0.05，*P0.01     三、討論生長因子可能以自分泌或旁分泌的形式參與腦膜瘤的增殖和分化2。本實(shí)驗(yàn)中7例腦膜瘤組織均有IGF-I受體的表達(dá)，而對照組的腦膜中沒有表達(dá)，說明IGF-I受體在腦膜瘤組織中表達(dá)的特異性。在無血清培養(yǎng)條件下，IGF-I能有效地刺激腦膜瘤細(xì)胞的增殖和DNA合成，進(jìn)一步說明腦膜瘤組織中存在IGF-I的功能性受體。而

9、且，培養(yǎng)的人腦膜瘤細(xì)胞能產(chǎn)生IGF-I，這些證據(jù)顯示，由IGF-I組成的自分泌或旁分泌環(huán)路可能參與腦膜瘤細(xì)胞的增殖和分化3。作者單位：李東海（330006南昌，江西醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腦外科）朱賢立（同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院腦外科）參考文獻(xiàn)1王浩丹，周申，主編. 生物醫(yī)學(xué)標(biāo)記示蹤技術(shù). 北京： 人民衛(wèi)生出版社，1995.9-11.2Todo T, Adams EF, Fahlbusch R, et al. Autocrine growth stimulation of human meningioma cells by platelet-derived growth factor. J Neurosurg, 1996,84:852-859.3Glick RP, Unterman TG, Vander WM, et al. Insulin and insulin-