VEGF在兒童血管瘤與血管畸形中的表達(dá)及意義

1、VEGF在兒童血管瘤與血管畸形中的表達(dá)及意義【摘要】 目的：研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在兒童血管瘤與血管畸形中的表達(dá)，為臨床辨別血管瘤及血管畸形、指導(dǎo)血管瘤的治療及檢驗(yàn)治療效果提供客觀有效的指標(biāo)。方法：采用免疫組化SP法檢測(cè)VEGF在血管瘤不同分期、血管畸形、正常血管中的表達(dá)情況。結(jié)果：VEGF在血管瘤中有高表達(dá);在增殖期的表達(dá)率高于消退早期和消退晚期(P<0.05)。在血管畸形及正常血管中均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)論：VEGF在血管瘤中有高表達(dá)，且與其分期明顯有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 血管瘤;血管畸形;VEGF;免疫組織化學(xué)AbstractObjective：Tostudythedif

2、ferentexpressionofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inhemangiomaandvascularmalformationandprovideanefficaciousindexfordistinguishinghemangiomafromvascularmalformation，andforguidingthetreatmentorcheckingupthetreatmenteffectofhemangioma.Method：ImmunohistochemistrySPmethodwasusedtotesttheexpressiono

3、fVEGFateachstageofhemangioma，invascularmalformationandnormalbloodvessels.Results：AnintensiveexpressionofVEGFwasfoundinhemangiomawithahigherexpressiverateattheproliferativestagethanattheearlierorlaterparacmasticstage(P<0.05).NoexpressionofVEGFwasfoundinnormalbloodvesselsandvascularmalformation

4、.Conclusion：ThehigherexpressionofVEGFfoundinhemangiomahasobviouscorrelationwithdifferentstagesofthedisease.Keywordshemangioma;vascularmalformation;VEGF;immunohistochemistry血管瘤是一種血管增生性疾病，可導(dǎo)致多種嚴(yán)重的并發(fā)癥，甚至可以危及生命。1982年，Mulliken和Glowacki提出了新的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為傳統(tǒng)分類(lèi)的“血管瘤”實(shí)為“先天性血管病變”，而其又可分為血管瘤和血管畸形兩大類(lèi)1。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular

5、endothelialgrowthfactor，VEGF)作為血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性生長(zhǎng)因子，特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與血管瘤的發(fā)生和增殖，對(duì)于平滑肌細(xì)胞和其它類(lèi)型細(xì)胞則無(wú)作用2。為了研究VEGF在血管瘤中的作用，我們利用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定VEGF在血管瘤及血管畸形中的表達(dá)情況，進(jìn)而探討其在血管瘤增殖、退化過(guò)程中的作用及意義。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 研究對(duì)象 選取中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院和解放軍二二醫(yī)院2000至2005年共58例手術(shù)切除標(biāo)本，其中男31例，女27例，患兒年齡為1個(gè)月至13歲，平均5.5歲。按照Mulliken標(biāo)準(zhǔn)1，將標(biāo)本分為血管瘤及血管畸形，并將血管瘤標(biāo)本

6、分為增殖期、消退早期和消退晚期。血管瘤標(biāo)本共49例，其中增殖期31例，消退早期11例，消退晚期7例;血管畸形為9例，均取自皮膚。另取5例含有正常血管的皮膚標(biāo)本作為對(duì)照。全部標(biāo)本為10%甲醛固定，石蠟包埋。1.1.2 主要試劑 鼠抗人單克隆抗VEGF抗體、SP超敏免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒、EDTA均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)公司。1.2 實(shí)驗(yàn)方法 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)采用鏈霉菌素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶免疫組化法(即SP法)。4m厚度連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟入水，一抗為鼠抗人單克隆抗VEGF抗體(克隆號(hào)JH121)，所有操作按照SP試劑盒說(shuō)明進(jìn)行?？乖迯?fù)采用EDTA抗原修復(fù)液熱浴修復(fù)。D

7、AB染色，蘇木素復(fù)染。同時(shí)用已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。1.3 結(jié)果判定 每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。以血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。按著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)記分，小于20%為0分;20%50%為1分;大于50%為2分。按著色強(qiáng)度記分，無(wú)著色為0分;淺棕色為1分;深棕色為2分。將著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)記分與著色強(qiáng)度記分相乘，總記分0分為陰性(-);12分為弱陽(yáng)性(+);4分為強(qiáng)陽(yáng)性(+)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSSforwindows11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，對(duì)VEGF在血管瘤不同分期中及不同年齡組中的表達(dá)采用卡方檢驗(yàn)和

8、確切概率法。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果VEGF定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色顆粒。在31例增殖期血管瘤標(biāo)本中有30例VEGF表達(dá)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為96.77%;在11例消退早期血管瘤標(biāo)本中有7例VEGF表達(dá)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為63.64%;在7例消退晚期血管瘤標(biāo)本中有4例VEGF表達(dá)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為57.14%。在9例血管畸形標(biāo)本及5例正常血管標(biāo)本中均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。對(duì)VEGF的表達(dá)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在血管瘤的不同分期中其表達(dá)率存在顯著性差異(表1，P<0.05)。表1 VEGF在血管瘤不同時(shí)期中的表達(dá)3 討論Fam等3認(rèn)為血管形成包括細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白

9、分解，內(nèi)皮細(xì)胞移行和增生，細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，血管狀結(jié)構(gòu)的形成和管道再通。血管瘤是血管生成異常性疾病，血管生成不受控制是其增殖的主要原因4。VEGF可以對(duì)血管生成的各步驟產(chǎn)生影響，從而調(diào)節(jié)血管的生成。VEGF是存在于內(nèi)皮細(xì)胞的特異性生長(zhǎng)因子，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有極強(qiáng)的促有絲分裂作用，而對(duì)其它細(xì)胞無(wú)此作用5，6。在腫瘤、缺血缺氧等情況下，VEGF及其受體呈現(xiàn)高表達(dá)，而VEGF不足時(shí)會(huì)導(dǎo)致血管腔閉合、血管退化7。在對(duì)HE染色的血管瘤及血管畸形標(biāo)本進(jìn)行分類(lèi)時(shí)觀察到：在增生期的血管瘤標(biāo)本中可見(jiàn)血管叢的內(nèi)皮細(xì)胞增生活躍，細(xì)胞肥大，界限不清，常聚集成團(tuán)，管腔不規(guī)則，甚至閉塞。間質(zhì)內(nèi)纖維組織很少并有較多的肥大細(xì)胞。而

10、從消退早期到消退晚期，則血管內(nèi)皮細(xì)胞逐漸變扁平，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，管腔明顯可見(jiàn)。同時(shí)血管間距逐漸增大，血管間結(jié)締組織逐漸增多，并且出現(xiàn)較多脂肪細(xì)胞。在血管畸形的標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)血管密集，管腔擴(kuò)張明顯，且其內(nèi)皮細(xì)胞與正常的血管內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)差別，無(wú)異常增生現(xiàn)象。免疫組化結(jié)果顯示：VEGF在血管瘤增殖期、消退早期、消退晚期的表達(dá)陽(yáng)性率是依次遞減的，而在血管畸形標(biāo)本及正常血管標(biāo)本中均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。目前認(rèn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖受多種因素的調(diào)節(jié)，而VEGF正是其中之一。VEGF的作用機(jī)制包括：是內(nèi)皮細(xì)胞特異性有絲分裂原，在體外可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，體內(nèi)可誘導(dǎo)血管發(fā)生?？梢蕴岣哐芡ㄍ感浴？梢愿淖儼饣|(zhì)，使其更有

11、利于血管的生長(zhǎng)。許多生長(zhǎng)因子如轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子(TGF)刺激血管新生的作用是通過(guò)誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的8，9。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明了VEGF在促血管瘤發(fā)生中的重要作用。【參考文獻(xiàn)】 1MullikenJB，GlowackiJ.Hemangiomasandvascularmalformationsininfantsandchildren：AclassificationbasedonendothelialcharacteristicsJ.PlastReconstSurg，1982，69：412.2袁新初，周乾毅.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1在毛細(xì)血管瘤組織中的表達(dá)J.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2002，23(3)

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13、sandpoorprognosisincoloncancerJ.BrJCancer，1998，77(6)：998.6AlvarezArroyoMV，CarameloC，AngelesCastillaM，etal.RoleofvascularendothelialgrowthfactorintheresponsetovesselinjuryJ.KidneyIntSuppl，1998，54(68)：7.7易成剛，郭樹(shù)忠.血管新生的機(jī)制及在整形外科領(lǐng)域中的研究進(jìn)展J.實(shí)用美容整形外科雜志，2004，15：315-317.8NeufieldG，TesslerS，Gitay2GohenH，etal.Vascularendothelia