葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查

1、實(shí)驗(yàn)二 葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查一、目的要求1掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、操作方法及限量計(jì)算方法。2熟悉藥物中一般雜質(zhì)檢查的目的和意義。二、基本原理葡萄糖是用淀粉以無(wú)機(jī)酸水解或在酶催化下經(jīng)過(guò)水解得稀葡萄糖液，再經(jīng)脫色、濃縮結(jié)晶制得。1國(guó)內(nèi)生產(chǎn)方法有以下幾種：酸水解法：以無(wú)機(jī)酸將淀粉水解為葡萄糖。雙酶水解法：以生物酶為催化劑將淀粉水解為葡萄糖。酸酶水解法：以鹽酸為液化劑，糖化酶為催化劑，將淀粉水解為葡萄糖。根據(jù)葡萄糖生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行氯化物、重金屬、砷鹽等一般雜質(zhì)檢查，進(jìn)行蛋白質(zhì)、可溶性淀粉等特殊雜質(zhì)檢查。2各種雜質(zhì)檢查原理如下：氯化物檢查法 氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀白色渾濁液，

2、與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下處理生成的氯化銀渾濁相比較，測(cè)定供試品中氯化物的限量。C1- + Ag+ AgCl硫酸鹽檢查法 藥物中微量硫酸鹽與氯化鋇在酸性溶液中作用，生成硫酸鋇微粒而顯白色渾濁液，同一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與氯化鋇在同樣條件下，用同法處理生成的渾濁比較，判斷藥物中含硫酸鹽的限量。SO4 2- 十Ba2+ BaS04鐵鹽檢查法 三價(jià)鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性硫氰酸鐵絡(luò)離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色。Fe3+6SCN- Fe(SCN)63- 紅色進(jìn)行葡萄糖的鐵鹽檢查時(shí)，需在顯色前加硝酸3滴，煮沸5min，使Fe2+氧化為Fe3+。由于硝酸

3、中可能含有亞硝酸，亞硝酸也能與硫氰酸根離子反應(yīng)生成紅色的亞硝酰硫氰化物，影響比色，因此加入顯色劑之前加熱煮沸有助于除去氧化氮，以消除氧化氮生產(chǎn)的亞硝酸干擾。重金屬檢查法 重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下，能與S2-作用生成硫化物而顯色的金屬雜質(zhì)，如，銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、砷、銻、錫、鋅、鉆、鎳等。在藥品生產(chǎn)過(guò)程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛在體內(nèi)易積蓄中毒，故檢查時(shí)以鉛為代表。硫代乙酰胺(thioacetamide)在弱酸性(pH約3.5)溶液中水解，產(chǎn)生硫化氫，可與重金屬離子結(jié)合生成有色硫化物的均勻沉淀，可與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)液同法處理比較。本方法的適宜目視比色范圍為27mL溶液中含鉛1020mg，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液

4、12mL，檢查中根據(jù)規(guī)定含重金屬的限量確定供試品的取用量。CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2SPb2+H2S PbS+ 2H+砷鹽檢查法 中國(guó)藥典主要采用古蔡氏(Gutzeit)法檢查砷鹽。其原理是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽作用生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞(或氯化汞)試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，可判定藥物中含砷鹽的限量。其反應(yīng)如下：AsO3 3- + 3Zn + 9H+AsH3 + 3Zn2+ + 3H2OAsH3 + 2HgBr22HBr + AsH(HgBr)2(黃色)AsH3 + 3 HgBr23HBr + As

5、(HgBr)3(棕色)五價(jià)砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫的速度較三價(jià)砷慢，故在反應(yīng)液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，碘化鉀被氧化生成的碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。 AsO43- + 2I-+ 2H+AsO33- + I2 + H2OAsO43- + Sn2+ 2H+AsO33- + Sn4+ H2OI2 + Sn2+2I- + Sn4+溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。4I- + Zn2+ ZnI42-氯化亞錫與碘化鉀存在，可抑制銻化氫的生成，因銻化氫也能與溴化汞試紙作用生成銻斑，在實(shí)驗(yàn)條件下l00mg銻存在不

6、會(huì)干擾測(cè)定。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。干燥失重測(cè)定法 干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重量，根據(jù)所減失的重量和取樣量計(jì)算供試品干燥失重的百分率。干燥失重檢查法主要控制藥物中的水分，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如乙醇等。熾灼殘?jiān)鼨z查法 熾灼殘?jiān)抵赣袡C(jī)藥物經(jīng)加熱炭化后再被硫酸破壞，于高溫(700800)熾灼，有機(jī)物質(zhì)被破壞分解為揮發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)(多為金屬的氧化物或鹽類)成為硫酸鹽，稱為熾灼殘?jiān)?。如熾灼殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查，則控制熾灼溫度在500600。三、儀器與試劑電熱恒溫干燥箱，高溫電爐(馬福爐)，普通電爐，

7、水浴鍋，50mL比色管，量筒，50mL燒杯；葡萄糖，硝酸銀，硝酸，硫酸，氯化鋇，硫氰酸銨，硫代乙酰胺，甘油，氫氧化鈉，溴化鉀，碘化鉀，20目無(wú)砷鋅粒，氯化亞錫，醋酸鉛，溴化汞，磺基水楊酸。四、實(shí)驗(yàn)方法1. 酸度取本品2.0g，加水20mL溶解后，加酚酞指示液（取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解,即得。）3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）0.20mL，應(yīng)顯粉紅色。2溶液的澄清度與顏色取本品5.0g，加熱水溶解后，放冷，用水稀釋至10mL，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，與對(duì)照液（取比色用氯化鈷液3.0mL、比色用鉻酸鉀液3.0mL與比色用硫酸銅液6.0m

8、L，加水稀釋成50mL）1.0mL加水稀釋至10mL比較，不得更深。濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 稱取于105干燥至恒重的硫酸肼1.00g，置100mL量瓶中，加水適量使溶解，必要時(shí)可在40的水浴中溫?zé)崛芙?，并用水稀釋至刻度，搖勻，放置46h；取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于25避光靜置24h，即得。本液置冷處避光保存，可在兩個(gè)月內(nèi)使用，用前搖勻。濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備 取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液15.0mL，置1000mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取適量，置1cm吸收池中，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在550nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸光度應(yīng)在0.120.15范圍內(nèi)。本液應(yīng)在48h內(nèi)使用，用前搖勻。濁

9、度標(biāo)準(zhǔn)液的制備（1號(hào)） 取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液5.0mL加水95.0mL ，搖勻，即得。3. 乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加90%乙醇30mL，置水浴上加熱回流約10min，溶液應(yīng)澄清。4. 氯化物取本品0.60g，加水溶解使成25mL(如溶液呈堿性，可滴加硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng))，再加稀硝酸（取105mL硫酸加水稀釋至1000mL，即得。）10mL，溶液如不澄清，應(yīng)濾過(guò)；置50mL納氏比色管中，加水使成約40mL，搖勻，即得供試液。另取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液6.0mL置50mL納氏比色管中，加稀硝酸10mL，用水稀釋使成約40mL，搖勻，即得對(duì)照液。向供試液與對(duì)照液中分別加硝酸銀試液(0.1mol/

10、L)1.0mL，用水稀釋使成50mL，搖勻，暗處放置5min，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，如發(fā)生渾濁，樣品管不得比對(duì)照管更濃(0.01)。標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液的制備：稱取氯化鈉0.165g，置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量貯備液10mL，置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10g）5硫酸鹽取本品2.0g，加水溶解使成約40mL(如溶液顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng))；溶液如不澄清，應(yīng)濾過(guò)；置50mL納氏比色管中，加稀鹽酸（取234mL硫酸加水稀釋至1000mL，即得。）2mL，25氯化鋇溶液5mL，加水稀

11、釋使成50mL，搖勻，放置10min，如發(fā)生渾濁，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2.0mL同法制成的對(duì)照液比較，不得更濃(0.01)。標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液的制備：稱取硫酸鉀0.181g，置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于100g的SO4）6. 亞硫酸鹽與可溶性淀粉取本品1.0g，加水10mL溶解后，加碘試液(0.05mol/L)1滴，應(yīng)即顯黃色。7干燥失重取本品約1.0g，然后在105干燥至恒重，減失重量不得過(guò)9.5。8. 熾灼殘?jiān)”酒?.02.0g置已熾灼至恒重的瓷坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51mL潤(rùn)濕，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡，在70080

12、0熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷，精密稱定后，再在700800熾灼至恒重，所得熾灼殘?jiān)坏贸^(guò)0.1。9. 蛋白質(zhì) 取本品1.0g，加水10mL溶解后，加磺基水楊酸溶液（15）3mL，不得發(fā)生沉淀。10鐵鹽取本品2.0g，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5min，放冷，加水稀釋使成45mL，加硫氰酸銨溶液(30100)3mL，搖勻，如顯色，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液2.0mL用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深(0.001)。標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的制備：稱取硫酸鐵銨（FeNH4(SO4)2·12H2O）0.863g，置1000mL量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯

13、備液。臨用前，精密量取貯備液10mL，置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10g的Fe）11重金屬取本品4.0g置于25mL納氏比色管中，加23mL水溶解后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5) 2mL，加硫代乙酰胺試液2mL，放置2min后，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(10mg/mL Pb2+)2mL用同一方法制成的對(duì)照液同置白紙上自上向下比較，不得更深(百萬(wàn)分之五)。醋酸鹽緩沖液(pH3.5)：取醋酸銨25g,加水25mL溶解后,加7mol/L鹽酸溶液38mL,用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH至3.5(電位法指示),用水稀釋至100mL,即得。硫代乙酰胺試液配制：

14、取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100mL，置于冰箱中保存。臨用前取混合液由氫氧化鈉液(1mol/L)15mL，水5.0mL及甘油20mL組成5.0mL，加上述硫代乙酰胺溶液1.0mL，置水浴上加熱20s，冷卻，立即使用。標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備：稱取硝酸鉛0.160g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL與水50mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL，置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10g的Pb）。配制與貯存的玻璃容器均不得含鉛。12砷鹽取本品2.0g，置檢砷瓶中，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL與溴化鉀-溴試液（取溴30g，與溴化鉀3

15、0g，加水使溶解成100mL）0.5mL，置水浴上加熱約20min，使保持稍過(guò)量的溴存在，必要時(shí)，再補(bǔ)加溴化鉀溴試液適量，并隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)的水分，放冷，加鹽酸5mL與水適量使成28mL，加碘化鉀試液5mL及酸性氯化亞錫試液(取氯化亞錫1.5g，加水10mL與少量的鹽酸使溶解，即得。本液應(yīng)臨用新配)5滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g，迅速將瓶塞塞緊(瓶塞上已安放好裝有醋酸鉛棉及溴化汞試紙的導(dǎo)氣管)，保持反應(yīng)溫度在2540（視反應(yīng)快慢而定，但不應(yīng)超過(guò)40），反應(yīng)45min后，取出溴化汞試紙，將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液一定量制成的標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，顏色不得更深（0.0001%）。標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備：稱取

16、三氧化二砷0.132g，置1000mL量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5mL溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10mL，置1000mL量瓶中，加稀硫酸10mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于1g的As）。標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2mL置另一檢砷瓶中，加鹽酸5mL與水21mL，自“再加碘化鉀試液5mL及”起，依法操作即可。五、操作注意事項(xiàng)1納氏比色管的選擇與洗滌比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進(jìn)行，因此在選用比色管時(shí)，必須注意使樣品與標(biāo)準(zhǔn)管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶任何顏色，管上的刻度均勻，如有差

17、別，不得大于2mm。納氏比色管用后應(yīng)立即沖洗，比色管洗滌時(shí)避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁劃出條痕影響比色或比濁。2平行操作原則進(jìn)行比色、比濁、砷鹽檢查時(shí)，樣品液與對(duì)照液的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)盡可能一致，嚴(yán)格按照操作步驟平行操作，按規(guī)定順序加入試劑。比色、比濁前可利用手腕轉(zhuǎn)動(dòng)360º的旋搖使比色管內(nèi)試劑充分混勻。比色方法一般是將兩管同置于白色背景上，從側(cè)面觀察；比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下地觀察。3實(shí)驗(yàn)中應(yīng)準(zhǔn)確選用量具，雜質(zhì)檢查中允許的誤差為±10，量筒的絕對(duì)誤差為1mL，刻度吸管的絕對(duì)誤差為0.010.1mL，在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)樣品、標(biāo)準(zhǔn)液的取用量正確選用量器。例如，取標(biāo)準(zhǔn)液2mL應(yīng)選擇刻度吸管或移液管吸取標(biāo)準(zhǔn)液。取樣品2g，允許的誤差為0.2g，可選用稱量精度為0.1g的普通天平。4進(jìn)行鐵鹽檢查時(shí)，采用硝酸將Fe2+氧化為Fe3+，標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)與樣品液同法操作。樣品液加硝酸煮沸時(shí)，應(yīng)注意防止暴沸，必要時(shí)補(bǔ)充適量水。5砷鹽檢查時(shí)采用濕法破壞葡萄糖，在酸性溶液中用溴進(jìn)行有機(jī)破壞使砷游離。有機(jī)破壞可在檢砷瓶中進(jìn)行，20min內(nèi)要保持過(guò)量的溴存在，隨時(shí)補(bǔ)充消耗的溴化鉀溴試液和水分，使溶液呈黃色，20min后必須將多余的溴除盡，使溶液五色，否則