環(huán)境監(jiān)測管理規(guī)程要點

1、內(nèi)容：1 起草依據(jù)1.1 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法（GB/T16292-2010）。1.2 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法（GB/T16293-2010）。1.3 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法（GB/T16294-2010）。1.4藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂） 1.5 藥品GMP指南無菌藥品2術(shù)語和定義2.1沉降菌：用GB/T162942010標(biāo)準(zhǔn)提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。2.2沉降菌菌落數(shù)：規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣

2、中沉降菌的數(shù)目，以個/皿表示。2.3潔凈室（區(qū)）：對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)，裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。其他相關(guān)參數(shù)諸如：溫度、濕度、壓力也有必要控制。2.4局部空氣凈化：僅使室內(nèi)工作區(qū)域或特定的局部空間的空氣中懸浮粒子濃度達到規(guī)定的空氣潔凈度級別的方式。2.5單向流：沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風(fēng)速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流，與水平面平行的叫水平單向流。2.6非單向流：具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的氣流。2.7懸浮粒子：用于空氣潔凈度分級的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1µm1

3、000µm的固體和液體粒子。對于懸浮粒子計數(shù)測量儀，一個微粒球的面積或體積產(chǎn)生一個響應(yīng)值，不同的響應(yīng)值等價于不同的微粒直徑。2.8潔凈度：潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒子的統(tǒng)計數(shù)量來區(qū)分的潔凈程度。2.9置信上限：從正態(tài)分布抽樣得到的實際均值按給定的置信度（此處為95%）計算得到的估計上限將大于此實際均值，則稱計算得到的這一均值估計上限為置信上限。2.10空態(tài)：潔凈區(qū)（室）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產(chǎn)設(shè)備、原材料或人員的狀態(tài)。2.11靜態(tài)靜態(tài)a:潔凈區(qū)（室）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，生產(chǎn)工藝設(shè)備已安裝、潔凈區(qū)（室）內(nèi)沒

4、有生產(chǎn)人員怕狀態(tài)。靜態(tài)b：潔凈區(qū)（室）在生產(chǎn)操作全部結(jié)束，生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后。2.12動態(tài)：潔凈區(qū)（室）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)，設(shè)備在指定的方式下進行，并且有指定的人員按照規(guī)范操作。2.13潔凈工作臺：一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區(qū)。其特點是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，按氣流形式分為垂直單向流工作臺、水平單向流工作臺等。3監(jiān)測項目3.1潔凈室的壓差測定 監(jiān)測儀器：壓差計3.1.2監(jiān)測人員：質(zhì)量管理部監(jiān)控員3.1.3 監(jiān)測要求 （1）潔凈度級別要求高的潔凈室（區(qū)）對相鄰的空氣潔凈度級別低的潔凈室（區(qū)）一般要求是相對正壓。（2）潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同等級潔

5、凈區(qū)之間的正壓差大于10Pa；（3）相同等級不同功能的操作間之間應(yīng)保持適當(dāng)壓差梯度，以防止污染和交叉污染。（4）產(chǎn)生粉塵的操作間與相鄰房間之間保持相對負壓，壓差大于5Pa。3.1.4 監(jiān)測頻次：在生產(chǎn)過程中每日監(jiān)控二次，填寫“壓差檢查記錄”（SMP·SC-WS-001-02）。3.2 潔凈室內(nèi)溫濕度的測定3.2.1. 監(jiān)測儀器：溫濕度計3.2.2 監(jiān)測人員：質(zhì)量管理部監(jiān)控員。3.2.3 監(jiān)測要求：潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝相適應(yīng)，除有特殊規(guī)定外，溫度控制在1826，相對濕度控制在45%65%之間為宜。 監(jiān)測頻次：在生產(chǎn)過程中每日監(jiān)控二次，填寫“溫度、濕度檢查記錄”（

6、SMP·SC-WS-001-01）。3.3 懸浮粒子監(jiān)控 監(jiān)測儀器：塵埃粒子計數(shù)器 監(jiān)測人員：化驗室化驗員、設(shè)備動力部管理員 測試條件：在測試之前，要對潔凈區(qū)（室）相關(guān)參數(shù)進行預(yù)先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環(huán)境條件，例如：這種預(yù)先測試或可包括：.1溫度和濕度的測試。潔凈區(qū)（室）的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無特殊要求時，溫度在1826，相對濕度在45%65%為宜），同時應(yīng)滿足測試儀器的使用范圍。.2室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測試，或壓差的測試。.3高效過濾器的泄漏測試。3.3.4 測試狀態(tài).1空態(tài)、靜態(tài)和動態(tài)三種狀態(tài)均可進行測試。.2 空態(tài)或靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不

7、得多于2人。3.3.4.3 測試報告中應(yīng)標(biāo)明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)的測試人員數(shù)。3.3.5 測試時間3.3.5.1 在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區(qū)），測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始。在靜態(tài)b時測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始。.2在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始時間以及測試時間。 懸浮粒子計數(shù).1采樣點數(shù)目及其布置 在空態(tài)或靜態(tài)測試

8、時，懸浮粒子采樣點數(shù)目及其布置應(yīng)力求均勻，并不得少于最少采樣點數(shù)目，采樣點布置規(guī)則如下圖：· · · ·  注：·為采樣點在動態(tài)測試時，懸浮粒子采樣點數(shù)目及其布置應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)設(shè)置。.1.1最少采樣點數(shù)目方法一測試采樣點數(shù)目： NL= A式中: NL-最少采樣點（四舍五入為整數(shù)）; A-潔凈室或被控潔凈區(qū)的面積,單位為平方米(m2)A級區(qū)動態(tài)測試按風(fēng)險分析確定關(guān)鍵監(jiān)測點。.1.2采樣點的位置采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置，采樣點多于5點時，也可以在離地面0.81.5m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，

9、但每層不少于5點。3.3.6.2 采樣點的限定對任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點的數(shù)目不得少于2個，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個采樣點的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數(shù)可以不同。3.3.6.3 每次采樣量：每個采樣點每次采集的空氣量，保證最大粒徑的粒子能檢測出至少20個粒子。每個采樣點的每次采樣量VS用下式確定： 20 VS ×100 Cn·m 式中： VS每個采樣點每次最少采樣量，用升表示。 Cn·m為相關(guān)等級規(guī)定的最大被考慮粒徑之等級限值 20當(dāng)粒子濃度處于該等級限值時，可被檢測到的粒子數(shù)。 確認(rèn)A/B級時，每個采樣點的采樣量不少于1立

10、方米，C、D級每個采樣點的采樣量至少為2升。 3.3.7 具體方法見“塵埃粒子測試操作規(guī)程”（SOP·QC-JT-005）3.3.8 監(jiān)控要求：含塵量見表1各級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動態(tài)0.5m5.0m0.5m5.0mA352020352020B352029352 0002 900 C352 0002 9003 520 00029 000 D3 520 00029 000不作規(guī)定不作規(guī)定表1：各級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定采樣注意事項.1對于單項流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口宜

11、向上。.2布置采樣點時，應(yīng)盡量避開回風(fēng)口。.3采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動。.4采樣完畢后，宜對塵埃粒子計數(shù)器進行自凈。.5應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染。 監(jiān)測頻次：a)A、C級潔凈室（區(qū)）每生產(chǎn)周期前進行靜態(tài)監(jiān)測，生產(chǎn)時，A級區(qū)在線監(jiān)測動態(tài)，C級潔凈室（區(qū)）灌封間、稀配間、稱量間每周1次進行動態(tài)監(jiān)測，其它C級潔凈室（區(qū)）每月進行1次動態(tài)監(jiān)測；并填寫“懸浮粒子監(jiān)測檢驗記錄”(SOP·QC-JT-005-01)和“懸浮粒子監(jiān)測檢驗報告單”(SOP·QC-JT-005-02)。b)生產(chǎn)操作全部結(jié)束，操作人員撤出生產(chǎn)現(xiàn)場并經(jīng)1520分鐘自凈后，潔凈區(qū)的懸浮

12、粒子應(yīng)達到“靜態(tài)”標(biāo)準(zhǔn)。c)D級潔凈室（區(qū)）每月靜態(tài)監(jiān)測一次，并填寫“懸浮粒子監(jiān)測檢驗記錄”(SOP·QC-JT-005-01)和“懸浮粒子監(jiān)測檢驗報告單”(SOP·QC-JT-005-02)。 結(jié)果評定a) 每個采樣點的平均粒子濃度必須不大于規(guī)定的級別界限。b) 全部采樣點的粒子濃度平均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級別界限。3.4 沉降菌監(jiān)測本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。 監(jiān)測

13、儀器設(shè)備：高壓消毒鍋、電熱恒溫干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基。.1培養(yǎng)皿：一般采用ø90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿。.2培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊酯培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）.3恒溫培養(yǎng)箱、高壓消毒鍋、電熱恒溫干燥箱：必須定期進行校驗。 監(jiān)測人員：化驗室化驗員、車間監(jiān)控員 測試條件：在測試之前，要對潔凈區(qū)（室）相關(guān)參數(shù)進行預(yù)先測試，這類測試將會提供測試沉降菌的環(huán)境條件，例如：這種預(yù)先測試或可包括：.1溫度和濕度的測試。潔凈區(qū)（室）的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無特殊要求時，溫度在1826，相對濕度在45%65%為宜），同時應(yīng)滿足測試儀器的使用范圍。.

14、2室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測試，或壓差的測試。.3高效過濾器的泄漏測試。3.4.4 測試狀態(tài).1靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進行測試。3.4.4.2 靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。3.4.4.3 沉降菌測試前，被測潔凈室（區(qū)）由使用決定是否需要預(yù)先消毒。3.4.4.4 測試報告中應(yīng)標(biāo)明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)的測試人員數(shù)。 測試時間.1 在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區(qū)），測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始。在靜態(tài)b時測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常

15、運行時間不少于10min后開始。對非單項流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始。.2在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始時間以及測試時間。 3.4.6 采樣點數(shù)目及其布置：采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。3.4.7最少培養(yǎng)皿數(shù) 在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2 表2：最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級別最少培養(yǎng)皿數(shù)（ø90mm）A14B14C2D23.4.8采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣一次。采樣注意事項.1對于單項流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區(qū)），粒子計數(shù)器的采樣管口宜向上。.2布置采樣點時，應(yīng)盡量避開回

16、風(fēng)口。.3采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動。.4應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。.5培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬運過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需要暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿（TSA或SDA）一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。3.4.10 采樣方法將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點的布置要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，可使用多個培養(yǎng)皿連續(xù)進行監(jiān)測，使培養(yǎng)基表面暴露4h(灌裝時間不足4h，應(yīng)與灌裝時間一致)，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。3.4.11 培養(yǎng)a) 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中

17、培養(yǎng)。 b) 采用大豆酪蛋白瓊酯培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。（非最終滅菌產(chǎn)品培養(yǎng)時間不少于72h。若長菌，需進行種屬鑒定。）采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5天。c) 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。具體方法見“沉降菌測試檢驗操作規(guī)程”（SOP·QC-JT-006）3.4.12 菌落計數(shù)：具體方法見“沉降菌測試檢驗操作規(guī)程”（SOP·QC-JT-006） a) 用肉眼直接計數(shù)，標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，

18、有否遺漏。b) 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。具體方法見“沉降菌測試檢驗操作規(guī)程”（SOP·QC-JT-006）3.4.13 注意事項3.4.13.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。3.4.13.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。3.4.13.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。3.4.13.4 由于細菌種類繁多，差別大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。3.4.13.5 采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如

19、發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。3.4.14沉降菌監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)表3 潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)（最大允許數(shù)）級別浮游菌cfu/m3沉降菌（f90mm）表面微生物（動態(tài)）接觸碟（f55mm）cfu /碟5指手套cfu /手套動態(tài)靜態(tài)動態(tài)cfu /4h靜態(tài)cfu /0.5hA級<1<1<1<1<1<1B級10-5155C級10010050325-D級2002001001050-3.4.15結(jié)果評定度 a) 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的每皿菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。b) 若某潔凈室（區(qū)）的任何一皿菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。3

20、.4.16 監(jiān)測頻次：.1沉降菌A級區(qū)每批次監(jiān)測，C級潔凈室（區(qū)）（灌封間、稀配間、稱量間）每周1次動態(tài)監(jiān)測，其它C級潔凈室（區(qū)）及D級潔凈室（區(qū)）每月1次動態(tài)監(jiān)測。并填寫“沉降菌監(jiān)測檢驗記錄”（SOP·QC-JT-006-01）和“沉降菌監(jiān)測檢驗報告單”（SOP·QC-JT-006-02）。3.5 浮游菌監(jiān)測本方法采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時間和適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以判定該潔凈室的微生物濃度。 監(jiān)測儀器設(shè)備： 浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱。.1 浮

21、游菌采樣器宜采用撞擊法機理的采樣器。.2 測試要點 a) 校驗：必須按照測試儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定。使用校驗合格，且在使用有效期內(nèi)的儀器。 b) 測試儀器在未進入被測區(qū)域時，先清潔表面。c) 使用測試儀器時應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。 儀器開機，預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按儀器說明書的規(guī)定對儀器進行校正，同時檢查采樣量流量，并根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。 采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。 采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。.3 培養(yǎng)皿 a) 狹縫式采樣器一般采用90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿?？筛鶕?jù)所選用的采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。b

22、) 離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。.4培養(yǎng)基 大豆酪蛋白瓊酯培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或其他用戶認(rèn)可并經(jīng)驗證了的培養(yǎng)基。.5 恒溫培養(yǎng)箱 必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。 監(jiān)測人員：化驗室化驗員、車間監(jiān)控員3.5.3 測試步驟.1 測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。a) 采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于A級潔凈室的采樣器宜預(yù)先放在被測房間內(nèi)。b) 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。c) 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。d) 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進行消

23、毒時，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。e) 采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。.2 狹縫式采樣器的采樣程序 a) 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。 b) 關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。 c) 置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。.3 培養(yǎng) a) 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 b) 采用大豆酪蛋白瓊酯培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于 2d。采用沙氏培養(yǎng)基

24、配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在2025培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于 5d。 c) 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。 d) 菌落計數(shù)：用肉眼直接計數(shù)、標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，有否遺漏；若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。.4 注意事項 a) 使用前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。 b) 采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。 c) 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。 d) 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正

25、面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。3.5.4測試狀態(tài) a) 浮游菌測試前，被測試潔凈室（或潔凈區(qū)）的溫、濕度必須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。b) 浮游菌測試前，被測試潔凈室（潔凈區(qū)）已經(jīng)過消毒。c) 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并應(yīng)在報告中注明測試狀態(tài)。 測試人員 a) 測試共員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。 b) 靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。 測試時間 a) 在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10

26、min后開始，對非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始。在靜態(tài)b測試時，對單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始，對非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始，b) 在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。 浮游菌采樣點數(shù)量及其布置 a) 最少采樣點數(shù)目表4 浮游菌最少采樣點數(shù)目面積m2潔凈度級別A、BCD10102020404010010020020040040010001000200020002348164080160400800 2224102040100200222

27、236133263注：對于A、B級單向流潔凈室（區(qū)），包括A、B級潔凈工作臺，面積指的是送風(fēng)口表面積；對于C級以上的非單向流潔凈室（區(qū)），指的是房間面積。2)日常監(jiān)測的采樣點數(shù)目由生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵操作點來確定。 b) 采樣點的位置 采樣點位置同懸浮粒子測試點。 工作區(qū)測點位置離地0.8m1.5m左右（略高于工作面）。 送風(fēng)口測點位置離開送風(fēng)面30cm左右。 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。3.5.8最小采樣量 采樣量根據(jù)日常檢測及環(huán)境驗證定，每次最小采樣量見表6。表5 浮游菌最小采樣量潔凈度級別采樣量L/次A、B1000C500D100 采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣一次。 采樣注意事項

28、a) 對于單向流或送風(fēng)口 ，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。 b) 布置采樣點時，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。 c) 采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動。 d）應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。 e）培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。 結(jié)果計算.1 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。.2 每個測點的浮游菌平均濃度的計算，見下式： 菌落數(shù)平均濃度（個/m3）

29、= 采樣量 結(jié)果評定 用浮游菌平均濃度判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。a)每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于細菌濃度的界限。b) 若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果必須合格。3.5.13 監(jiān)測頻次：A級區(qū)每批次監(jiān)測，C級潔凈室（區(qū)）（灌封間、稀配間、稱量間）每周1次動態(tài)監(jiān)測，其它C級潔凈室（區(qū)）及D級潔凈室（區(qū)）每月1次動態(tài)監(jiān)測。并填寫“浮游菌監(jiān)測檢驗記錄”（SOP·QC-JT-007-01）和“浮游菌監(jiān)測檢驗報告單”（SOP·QC-JT-007-02）。3.6表面微生物基本監(jiān)測方法包括接觸碟、擦拭法及表面沖洗法。.1接觸碟法適用于對平整的規(guī)則性表面進行取樣監(jiān)測。通常碟子是50mm直徑的，取樣面積一般約252。.1.1取樣：取樣時打開碟蓋，無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣點表面均勻充分接觸，接觸約5秒鐘，再蓋上碟蓋。.1.2取樣后，應(yīng)立即用75%酒精噴灑被取樣表面，以除去殘留瓊脂。.1.3培養(yǎng)：收好的營養(yǎng)瓊脂接觸碟在3035培養(yǎng)3天。.2擦拭法用于對不規(guī)則表面（尤其是設(shè)備表面）進行取樣。拭