過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒說(shuō)明書

1、過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒說(shuō)明書1、 測(cè)定原理：過(guò)氧化氫酶(CAT)分解H2O2的反應(yīng)可通過(guò)加入鉬酸銨而迅速中止，剩余的H2O2與鉬酸銨作用產(chǎn)生一種淡黃色的絡(luò)合物，在405nm處測(cè)定其變化量，可計(jì)算出CAT的活力。試劑一(ml)2、 試劑組成與配制：試劑一：液體100 ml×1瓶，4保存6個(gè)月。試劑二：底物液體10 ml×1瓶，4保存6個(gè)月。試劑三：顯色粉劑×1瓶，4保存6個(gè)月。加雙蒸水至100 ml溶解，4保存1個(gè)月。（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影響測(cè)定結(jié)果）試劑四：液體10 ml×1瓶，4保存6個(gè)月。天冷時(shí)會(huì)凝固，臨用前37水浴至透明

2、方可使用。3、 組織樣本的檢測(cè)1、 組織勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)：體積(ml)=1：9的比例加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下，制備成10%的組織勻漿，2500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清，再用生理鹽水稀釋成最佳取樣濃度，待測(cè)(最佳取樣濃度摸索減附錄)。2、 操作表：對(duì)照管測(cè)定管組織勻漿(ml)0.05試劑一(37預(yù)溫)(ml)1.01.0試劑二(37預(yù)溫)(ml)0.10.1混勻，37準(zhǔn)確反映1分鐘（60秒）試劑三(ml)1.01.0試劑四(ml)0.10.1組織勻漿(ml)0.05混勻，波長(zhǎng)405nm，光徑0.5cm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。注：一般樣本沒(méi)有高脂等

3、導(dǎo)致顯著差異情況，對(duì)照管的樣本更換成雙蒸水，做1-2管對(duì)照即可。如需做樣本自身對(duì)照，則試劑盒所測(cè)定樣本數(shù)量減至48樣。3. 組織中CAT活力的計(jì)算：（1） 定義：每毫克組織蛋白每秒種分解1umol的H2O2的量為一個(gè)活力單位。（2） 計(jì)算公式：注：*271為斜率的倒數(shù)（3） 計(jì)算舉例：取10%水稻葉片勻漿0.05ml做CAT檢測(cè)，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.605，測(cè)定管吸光度為0.332，同時(shí)測(cè)得10%水稻葉片勻漿蛋白濃度為3.1303 mgprot/ml。則計(jì)算結(jié)果為：注：1.測(cè)定血清和血漿時(shí)，如果樣本不溶血，每批樣本只需要隨機(jī)挑2個(gè)樣本做對(duì)照或者用雙蒸水代替額樣本做對(duì)照；如果樣本溶血的話，必須每個(gè)樣本都要做對(duì)照。2.測(cè)定組織勻漿時(shí)，如果樣本不是高脂，每批樣本只需要隨機(jī)挑2個(gè)樣本做對(duì)照或者用雙