第九章_細(xì)菌類疫苗2013

1、1第九章 細(xì)菌類疫苗2細(xì)菌類疫苗細(xì)菌類疫苗o 定義：用細(xì)菌、支原體、螺旋體或其衍生物制成，進(jìn)入人體后使機(jī)體產(chǎn)生抵抗相應(yīng)細(xì)菌能力的生物制品細(xì)菌類疫苗o 種類：（1）減毒活疫苗（2）滅活疫苗（3）亞單位疫苗或成分疫苗第一節(jié) 概述3（3）亞單位疫苗或成分疫苗主要指在細(xì)菌培養(yǎng)液中提取，用化學(xué)方法脫毒的類毒素，如破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素。成分疫苗：主要指從莢膜細(xì)菌純化的細(xì)菌多糖疫苗，其誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗體可抵抗莢膜菌的感染。4附表：目前用于人群的細(xì)菌性疫苗o 卡介苗o 百日咳疫苗o 腦膜炎球菌疫苗o 傷寒疫苗o 精制破傷風(fēng)疫苗（類毒素）o 霍亂弧菌疫苗o 痢疾疫苗用法：i.d., s.c., d.s.,

2、i.m., p.o.5基本流程菌液菌液佐劑佐劑+ +乳乳 化化分裝和保存分裝和保存原料配置滅活菌液滅活菌液滅活第二節(jié) 細(xì)菌滅活疫苗6o 滅活疫苗的生產(chǎn)工藝與檢定o 菌種檢定與制備1）菌種檢定：包括 培養(yǎng)特性、血清學(xué)特性、毒力試驗(yàn)、抗原性試驗(yàn)、免疫力試驗(yàn)o制苗用菌種多數(shù)為制苗用菌種多數(shù)為毒力強(qiáng)、免疫原性優(yōu)良毒力強(qiáng)、免疫原性優(yōu)良的菌株，通常使用的菌株，通常使用1-3個(gè)個(gè)品系，均由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、品系，均由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、凍干保存和供應(yīng)。凍干保存和供應(yīng)。1. 各種用于制造菌苗的菌種應(yīng)按規(guī)定各種用于制造菌苗的菌種應(yīng)按規(guī)定定期復(fù)壯定期復(fù)

3、壯，并進(jìn)行形態(tài)、培，并進(jìn)行形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌型、抗原性和免疫原性鑒定，養(yǎng)特性、菌型、抗原性和免疫原性鑒定，合格菌種準(zhǔn)許用于制苗合格菌種準(zhǔn)許用于制苗。 7o 滅活疫苗的生產(chǎn)工藝與檢定o菌種檢定與制備2）菌種制備菌種啟開：接種于適宜的培養(yǎng)基上，371C一代培養(yǎng)；擴(kuò)量轉(zhuǎn)種：一代菌種的擴(kuò)量接種，于371C二代培養(yǎng)。o將經(jīng)鑒定符合標(biāo)準(zhǔn)的菌種接種于菌苗生產(chǎn)規(guī)程中所規(guī)定的培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查、活菌計(jì)數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)后即為種子液，用于菌苗生產(chǎn)。1. 種子液通常保存于2-8C冷暗處，不得超過規(guī)程規(guī)定的使用期限。82.生產(chǎn)方法（1）固體培養(yǎng)法：克氏瓶、茄形瓶克氏瓶、茄形瓶（2）液體靜置培養(yǎng)法、液體深層通氣培養(yǎng)

4、法3.細(xì)菌采集（1）固體培養(yǎng)法采集時(shí)逐瓶檢查，污染雜菌者廢棄。（2）液體培養(yǎng)法采集時(shí)應(yīng)做純菌試驗(yàn)，確定無雜菌生長。94. 殺菌、脫毒（滅活）殺菌、脫毒（滅活）殺菌劑對疫苗的質(zhì)量至關(guān)重要，殺菌劑對疫苗的質(zhì)量至關(guān)重要，通常根據(jù)細(xì)菌的特性加入最通常根據(jù)細(xì)菌的特性加入最有效的滅活劑，有效的滅活劑，我國多用甲醛，終濃度不超過我國多用甲醛，終濃度不超過1%。殺菌檢查：取樣接種于不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、瓊脂殺菌檢查：取樣接種于不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、瓊脂斜面及堿性瓊脂斜面各一支，斜面及堿性瓊脂斜面各一支，37培養(yǎng)培養(yǎng)5 d，應(yīng)無本菌生，應(yīng)無本菌生長。長。表表 幾種滅活菌苗的滅活方法幾種滅活菌苗的滅活

5、方法 105 5 濃濃 縮縮 為提高某些滅活菌苗的免疫力，在培養(yǎng)過程中采取提高菌數(shù)的基礎(chǔ)上，再通過濃縮方法達(dá)到目的。 常用的濃縮方法：氫氧化鋁膠吸附沉淀法常用的濃縮方法：氫氧化鋁膠吸附沉淀法 離心沉降法離心沉降法 羧甲基纖維沉淀法羧甲基纖維沉淀法 以上方法可使菌液濃縮一倍以上以上方法可使菌液濃縮一倍以上。 此外，有些細(xì)菌在生長過程中產(chǎn)生分子量小的可溶性抗原（如豬丹此外，有些細(xì)菌在生長過程中產(chǎn)生分子量小的可溶性抗原（如豬丹毒桿菌產(chǎn)生的糖蛋白）也可經(jīng)氫氧化鋁吸附濃縮；將破傷風(fēng)脫毒液按鹽毒桿菌產(chǎn)生的糖蛋白）也可經(jīng)氫氧化鋁吸附濃縮；將破傷風(fēng)脫毒液按鹽酸酸食鹽法處理，以作進(jìn)一步精制成提純破傷風(fēng)類毒素。食

6、鹽法處理，以作進(jìn)一步精制成提純破傷風(fēng)類毒素。 116. 原液檢定及保存：原液檢定及保存：濃度測定：按濃度測定：按“中國細(xì)菌濁度測定標(biāo)準(zhǔn)中國細(xì)菌濁度測定標(biāo)準(zhǔn)”測定濃度測定濃度鏡檢：涂片染色，至少觀察鏡檢：涂片染色，至少觀察10個(gè)視野，應(yīng)菌型典型，個(gè)視野，應(yīng)菌型典型，無雜菌無雜菌凝集試驗(yàn)：血清型定型凝集試驗(yàn)，應(yīng)呈陽性反應(yīng)凝集試驗(yàn)：血清型定型凝集試驗(yàn)，應(yīng)呈陽性反應(yīng)無菌試驗(yàn)無菌試驗(yàn): 需氧菌、厭氧菌及真菌試驗(yàn)應(yīng)陰性需氧菌、厭氧菌及真菌試驗(yàn)應(yīng)陰性免疫力試驗(yàn)：免疫力試驗(yàn)：原液保存：（原液保存：（2-8，3-43-4年有效年有效）127.配苗及分裝o 由于滅活菌苗所用的佐劑不同，所以配苗方法也不相同。o 氫

7、氧化鋁菌苗：可在加入甲醛滅活的同時(shí)，按比例加入氫氧化鋁膠配氫氧化鋁菌苗：可在加入甲醛滅活的同時(shí)，按比例加入氫氧化鋁膠配制；也可在菌液經(jīng)甲醛滅活后再按比例加入氫氧化鋁膠配苗。制；也可在菌液經(jīng)甲醛滅活后再按比例加入氫氧化鋁膠配苗。o 有的廠油佐劑菌苗的配制程序?yàn)椋河跍缇挠腿閯┯械膹S油佐劑菌苗的配制程序?yàn)椋河跍缇挠腿閯?35 m1 10135 m1 10號白油、號白油、 11.4m1 Span-8511.4m1 Span-85、3.6 ml Tween803.6 ml Tween80混合液中，在邊攪拌下加入等量甲醛混合液中，在邊攪拌下加入等量甲醛滅活菌液配制滅活菌液配制。o 配苗和分裝：應(yīng)充分混

8、勻，及時(shí)塞塞、貼簽或印字8.成品檢定 按規(guī)程進(jìn)行13o 常用滅活細(xì)菌疫苗1.霍亂疫苗（1）霍亂簡介由霍亂弧菌引起的烈性腸道傳染病，霍亂弧菌在小腸分泌霍亂毒素（cholera toxin），引起腹瀉及其他癥狀。（2）抗原 鞭毛抗原：不耐熱，無分型意義，有免疫保護(hù)作用。 菌體抗原：主要成分為脂多糖（LPS），耐熱，根據(jù)其抗 原決定基可分為 200多鐘血清型，O1和O139為流行血清型。14（3）目前最常用的霍亂疫苗口服霍亂滅活全菌體+重組霍亂毒素B亞單位重組霍亂毒素B亞單位（sBS）具有黏膜免疫佐劑特性，該疫苗安全有效且無明顯不良反應(yīng)，保護(hù)力持久。152.傷寒疫苗（1）概述由傷寒沙門桿菌引起的急性

9、全身感染，患者出現(xiàn)高熱，胃腸炎，敗血癥等。含有三類抗原:LPS，莢膜多糖(vi)，鞭毛抗原，耐藥性比較嚴(yán)重。（2）生產(chǎn)工藝與檢定全菌體死疫苗分三種，按殺菌劑不同可分為丙酮滅活苗，加溫加酚滅活苗，甲醛滅活苗。16菌株我國現(xiàn)用兩個(gè)菌株生產(chǎn)疫苗：國際通用Ty2株國內(nèi)代表株培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法采用馬丁瓊脂、肉湯瓊脂或其他經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基，主要采用固體培養(yǎng)法，也可進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)接種后3537培養(yǎng)1824h。17成品檢定鑒別試驗(yàn)、外觀、化學(xué)檢定、無菌試驗(yàn)、異常毒性試驗(yàn)、菌形及純度檢查疫苗規(guī)格及有效期每安瓿瓶5ml，每人用劑量含傷寒菌61073108，28避光保存和運(yùn)輸，有效期1.5年。18（3 3）傷寒）傷寒Vi

10、Vi多糖疫苗多糖疫苗早期乙酸處理早期乙酸處理ViVi多糖，抗原性明顯降低，經(jīng)溴化多糖，抗原性明顯降低，經(jīng)溴化-16-16-烷基烷基-3-3-甲甲基氨處理基氨處理ViVi多糖，得到的非變性多糖可顯示較好的免疫原性，多糖，得到的非變性多糖可顯示較好的免疫原性，但是對但是對2 2歲以下兒童無效，且多糖是歲以下兒童無效，且多糖是T T淋巴細(xì)胞非依賴性抗原，淋巴細(xì)胞非依賴性抗原，不具有加強(qiáng)免疫記憶的作用，蛋白質(zhì)不具有加強(qiáng)免疫記憶的作用，蛋白質(zhì)-Vi-Vi多糖結(jié)合疫苗正在多糖結(jié)合疫苗正在研制當(dāng)中。研制當(dāng)中。莢膜（莢膜（ViVi）抗原）抗原: :即莢膜多糖（即莢膜多糖（CPSCPS）, ,是傷寒桿菌細(xì)胞外壁

11、的一是傷寒桿菌細(xì)胞外壁的一種莢膜抗原種莢膜抗原, Vi, Vi抗原與其致病性有關(guān)抗原與其致病性有關(guān)ViVi來源于毒力的縮寫。來源于毒力的縮寫。19（4）傷寒Ty21a口服減毒活疫苗德國學(xué)者將野生型菌株Ty2經(jīng)化學(xué)突變劑亞硝基胍處理而獲得的突變株，在提供較高免疫保力的同時(shí)具有很高的安全性。203.百日咳疫苗1）概述由百日咳桿菌引起的急性呼吸道傳染病，主要侵犯嬰幼兒，全病程較長，可持續(xù)幾個(gè)月，故名百日咳。百日咳菌可分四種相變：相菌毒力最強(qiáng)，有免疫原性；相毒力消失，無免疫原性；、相菌介于、 之間。222）百日咳死疫苗的生產(chǎn)工藝與檢定菌種生產(chǎn)用菌種采用百日咳相含1型、2型、和3型凝集原的菌株。培養(yǎng)方法

12、固體培養(yǎng)采用半綜合碳瓊脂培養(yǎng)基，也可發(fā)酵生產(chǎn)。23原液檢定濃度測定、鏡檢、血清學(xué)試驗(yàn)、無菌試驗(yàn)、特異性毒性試驗(yàn)、效價(jià)測定。原液保存28，有效期3年配合稀釋及分裝按原液中具有1、2和3型菌株的配比混合，也可制成百白破三聯(lián)疫苗（百日咳、白喉、破傷風(fēng)）24弱毒菌種多系凍干品弱毒菌種多系凍干品，由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳，由中國藥品生物制品檢定所或中國獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、保存與分發(fā)，少數(shù)由國家指定單位鑒定、保存與供給。代、鑒定、保存與分發(fā)，少數(shù)由國家指定單位鑒定、保存與供給。菌種使用前應(yīng)按菌種使用前應(yīng)按規(guī)程規(guī)定規(guī)程規(guī)定進(jìn)行復(fù)壯、挑選，并作形態(tài)、特性、抗原性和進(jìn)行復(fù)壯、挑選，并作形態(tài)、

13、特性、抗原性和免疫原性鑒定，免疫原性鑒定，符合標(biāo)準(zhǔn)后方可用于制苗符合標(biāo)準(zhǔn)后方可用于制苗。將檢定合格的菌種接種子于將檢定合格的菌種接種子于規(guī)定規(guī)定的培養(yǎng)基，按規(guī)定的條件增殖培養(yǎng)，經(jīng)的培養(yǎng)基，按規(guī)定的條件增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查及有關(guān)的純粹檢查及有關(guān)的檢查合格者檢查合格者即可作為種子液。即可作為種子液。種子液通常在種子液通常在0 04 4 C C可保存可保存2 2個(gè)月，在保存期內(nèi)可作為菌苗生產(chǎn)的批量個(gè)月，在保存期內(nèi)可作為菌苗生產(chǎn)的批量種子使用。種子使用。 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌減毒活疫苗細(xì)菌減毒活疫苗 一、生產(chǎn)工藝與檢定一、生產(chǎn)工藝與檢定（一）菌種與種子（一）菌種與種子25按1%3%量將種子液接種于培養(yǎng)基

14、，然后依不同菌苗要求進(jìn)行培養(yǎng)。如豬丹毒弱毒菌須在在深層通氣培養(yǎng)中加入適當(dāng)植物油作消泡劑，通入過濾除菌的熱空氣進(jìn)行培養(yǎng)制造菌液如人用炭疽活疫苗、卡介苗經(jīng)固體表面培養(yǎng)完成后須按規(guī)定要求將菌苔洗下制成菌液菌液于04C暗處保存，待抽樣經(jīng)純粹、活菌數(shù)等檢查合格后使用。（二）菌液培養(yǎng)二）菌液培養(yǎng)26 經(jīng)檢驗(yàn)經(jīng)檢驗(yàn)合格合格的菌液，按規(guī)定比例加入的菌液，按規(guī)定比例加入保護(hù)劑保護(hù)劑配苗，充分搖勻后隨即進(jìn)配苗，充分搖勻后隨即進(jìn)行分裝，行分裝，分裝量必須準(zhǔn)確分裝量必須準(zhǔn)確。 分裝好的菌苗迅速送入凍干柜進(jìn)行預(yù)凍、真空干燥，凍于完畢后立分裝好的菌苗迅速送入凍干柜進(jìn)行預(yù)凍、真空干燥，凍于完畢后立即加塞、抽空、封口，移入冷

15、庫保存，并由質(zhì)檢部門抽樣檢驗(yàn)。即加塞、抽空、封口，移入冷庫保存，并由質(zhì)檢部門抽樣檢驗(yàn)。 （四）配苗與凍干（四）配苗與凍干 為提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可進(jìn)行濃縮，為提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可進(jìn)行濃縮，以提高單位活菌數(shù)以提高單位活菌數(shù)，常，常用的依縮方法有吸附劑吸附沉降法、離心沉降法等，如于豬丹毒菌液內(nèi)加用的依縮方法有吸附劑吸附沉降法、離心沉降法等，如于豬丹毒菌液內(nèi)加入入0.2% 0.2% 0.25%0.25%羧甲基纖維素羧甲基纖維素(CMC)(CMC)進(jìn)行濃縮，也可用離心沉淀濃縮。濃縮進(jìn)行濃縮，也可用離心沉淀濃縮。濃縮菌液應(yīng)抽樣作純粹、活菌數(shù)等檢查。菌液應(yīng)抽樣作純粹、活菌數(shù)等檢查。（三）

16、濃縮（三）濃縮27流程圖流程圖1細(xì)菌疫苗制造工藝流程細(xì)菌疫苗制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基培養(yǎng)基細(xì)菌分離細(xì)菌分離菌菌 種種弱毒菌種弱毒菌種配置、滅菌鑒定減毒檢驗(yàn)配制滅菌檢驗(yàn)配制滅菌原原 料料佐佐 劑劑滅活菌液滅活菌液配苗、乳化配苗、乳化滅活疫苗滅活疫苗培培 養(yǎng)養(yǎng)菌苗原液菌苗原液配配 苗苗活疫苗活疫苗保護(hù)劑保護(hù)劑菌菌 液液分裝、凍干分裝、凍干分分 裝裝滅活原原 料料活化活化種子種子2829二、常用細(xì)菌減毒活疫苗炭疽疫苗結(jié)核疫苗鼠疫疫苗1、炭疽疫苗1）概述：定義：由炭疽桿菌引起的人畜共患的一種急性傳染病。特點(diǎn)：潛伏期3-5d。臨床表現(xiàn)為皮膚、肺部、腦膜和腸道等處的急性感

17、染。臨床分型： 體表感染型 消化道感染型 呼吸道感染型30 2）炭疽菌的病原學(xué)革蘭氏陽性，個(gè)體最大的桿菌之一，呈竹節(jié)狀，無鞭毛，在機(jī)體內(nèi)或特殊培養(yǎng)條件下能形成莢膜。營養(yǎng)要求不嚴(yán)，需氧，最適溫度3437炭疽桿菌的營養(yǎng)細(xì)胞抵抗力不強(qiáng)，芽孢抵抗力強(qiáng)，過氧乙酸、高錳酸鉀、和甲醛對芽孢的殺滅力較強(qiáng)。31抗原菌體抗原：多糖組分，耐熱性強(qiáng)。莢膜抗原：由質(zhì)粒決定，可以抵抗細(xì)胞的吞噬作用，引起感染，對動(dòng)物沒有免疫保護(hù)力，不能作為疫苗。毒素抗原：水腫因子（EF）；致死因子（LF）；保護(hù)性抗原（PA）；單獨(dú)組分無毒性，成對結(jié)合才能獲得毒素活性。323）炭疽疫苗（1）目前人用炭疽疫苗減毒活疫苗鋁膠培養(yǎng)上清液疫苗（2）

18、炭疽疫苗的生產(chǎn)工藝與檢定生產(chǎn)用菌株人、獸用的炭疽活疫苗生產(chǎn)均采用無莢膜具毒素（cap-tox+）菌株，我國采用的的A16R菌種均由藥品生物制品檢定所分發(fā)。33培養(yǎng)及收獲生產(chǎn)用培養(yǎng)基采用牛肉汁瓊脂或其他批準(zhǔn)培養(yǎng)基半成品配置及分裝用滅菌的50%甘油將原液稀釋成每ml含菌數(shù)4109成品檢定鑒別試驗(yàn)、外觀、純菌試驗(yàn)、特異性毒性試驗(yàn)活菌數(shù)測定、濃度測定、效力測定34疫苗規(guī)格及有效期安瓿瓶裝，10人份含菌2109， 28避光保存運(yùn)輸，有效期兩年。（3）目前人用炭疽疫苗的缺點(diǎn)毒力不穩(wěn)定采用劃痕接種，免疫效果不均一副反應(yīng)較大免疫保護(hù)力持續(xù)時(shí)間比較短352、結(jié)核疫苗病原菌為結(jié)核桿菌，能引起人畜共患結(jié)核?。?）流

19、行概況全世界約1/3人口感染；每年約1600萬人患病，其中300多萬人死于結(jié)核病。中國治療難題： 發(fā)現(xiàn)率低； 無法接受正規(guī)治療或沒錢治療； 耐藥性36（2）傳染與傳播方式主要由呼吸道傳染，少數(shù)由消化道和皮膚粘膜的損傷處侵入。傳播方式：飛沫傳染 痰液傳染 食物傳染 接觸傳染37（3）結(jié)核桿菌的潛伏和復(fù)燃結(jié)核桿菌類脂質(zhì)等成分能對抗溶酶體中酶的破壞作用，使細(xì)菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)繁殖，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞裂解死亡，病狀擴(kuò)散至鄰近淋巴結(jié)，形成原發(fā)感染灶，當(dāng)機(jī)體抗感染力較強(qiáng)時(shí)，淋巴結(jié)病灶逐漸纖維化和鈣化，此時(shí)病灶內(nèi)的結(jié)核桿菌處于休眠期，并潛伏下來，幾年或十幾年后，結(jié)合桿菌可以重新復(fù)燃，引起成年人肺結(jié)核。38（4）結(jié)合桿

20、菌抗藥性伴隨著結(jié)核病回升的另外一個(gè)問題是抗藥性的產(chǎn)生，多重抗藥性的發(fā)生率也越來越高，研制和開發(fā)有效的結(jié)合新疫苗勢在必行。392）結(jié)核桿菌的病原學(xué)革蘭氏陽性，含分枝酸，具有抗酸性，胞壁含大量脂質(zhì)，有較強(qiáng)的抵抗力滅菌方法具有免疫佐劑活性403）結(jié)核疫苗卡介苗的生產(chǎn)工藝與檢定卡介苗（BCG）是牛型結(jié)合桿菌經(jīng)培養(yǎng)后，收集菌體，加入穩(wěn)定劑凍干后制成的，用于預(yù)防結(jié)核病菌種卡介菌D2PB302菌株培養(yǎng)和收集生產(chǎn)用培養(yǎng)基采用蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基、膽汁馬鈴薯培樣基或液體蘇通培養(yǎng)基，搜集菌膜壓干，低溫研磨，加入穩(wěn)定劑，制成原液。41半成品配置及凍干用特定的保護(hù)劑稀釋成半成品，無菌分裝到安瓿瓶內(nèi)成品檢定鑒別試驗(yàn)、外觀、

21、溶解時(shí)間、水分、純菌試驗(yàn)、無有毒分枝桿菌試驗(yàn)、活菌計(jì)數(shù)、效力測定疫苗規(guī)格及有效期10人份含卡介菌0.40.6mg， 28避光保存運(yùn)輸，有效期一年。42（4）新型結(jié)核疫苗的研究方向以BCG為載體的基因工程結(jié)核疫苗營養(yǎng)缺陷型結(jié)核減毒活疫苗（牛型/人型） 結(jié)核亞單位疫苗結(jié)核DNA疫苗3、鼠疫疫苗（1）概述：鼠疫是由鼠疫桿菌引起的自然疫源性烈性傳染病。主要以“鼠蚤人”為主要傳播方式。43（2）鼠疫桿菌的病原學(xué)鼠疫桿菌屬腸桿菌科，耶爾森氏菌屬。革蘭染色陰性短小桿菌。有莢膜，無鞭毛，無芽胞?？乖兔庖咴?4（3）鼠疫疫苗的生產(chǎn)工藝與檢定菌種：采用鼠疫桿菌弱毒菌株EV株培養(yǎng)及收獲：培養(yǎng)基：厚金格爾瓊脂培養(yǎng)

22、基（pH6.87.2） 肉眼檢查及純菌試驗(yàn)合格方可收獲。半成品配制及凍干細(xì)菌比濁標(biāo)準(zhǔn)調(diào)整原液濃度，加凍干保護(hù)劑，分裝。成品檢定：鑒別試驗(yàn)、理化實(shí)驗(yàn)、純菌試驗(yàn)、特異性毒性試驗(yàn)、 活菌數(shù)測定、濃度測定、菌形檢查、效力測定疫苗規(guī)格及效期10人份含菌8109， 28避光保存運(yùn)輸，有效期一年。45第四節(jié) 類毒素疫苗一、概述類毒素是一種主動(dòng)免疫制劑，用于細(xì)菌毒素性疾病的預(yù)防。461.有關(guān)毒素的幾個(gè)概念細(xì)菌毒素：致病細(xì)菌產(chǎn)生的特異性毒性物質(zhì)外毒素：細(xì)菌在生長過程中產(chǎn)生，可擴(kuò)散或自溶后釋放到菌體外內(nèi)毒素：菌體細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，生存時(shí)不釋放，死亡后釋放至外界類毒素：外毒素經(jīng)處理后去除毒性但仍保留免疫原性472.

23、細(xì)菌外毒素的特性1）毒性強(qiáng)2）親組織性3）抗原性4）雙組分結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)483.類毒素的生產(chǎn)1）產(chǎn)毒人工培養(yǎng)產(chǎn)毒細(xì)菌獲得毒素菌種產(chǎn)毒力強(qiáng)、穩(wěn)定產(chǎn)毒培養(yǎng)基49培養(yǎng)基應(yīng)符合下面幾個(gè)方面的要求（1）能提供產(chǎn)毒必要的成分（2）能調(diào)節(jié)影響產(chǎn)毒諸因素的平衡（3）能緩解對產(chǎn)毒有害物質(zhì)的作用（4）能保護(hù)已經(jīng)產(chǎn)生的毒素（5）不能含有對人有害或引起過敏反應(yīng)的物質(zhì)50培養(yǎng)方法根據(jù)菌種的特性與具體的實(shí)驗(yàn)來決定2）脫毒影響因素：溫度、pH、甲醛濃度、毒素3）精制適用于規(guī)?；a(chǎn)，條件溫和，避免對抗原的損傷514.毒性逆轉(zhuǎn)及其相關(guān)因素毒素類毒化后仍有毒性逆轉(zhuǎn)的可能，與毒性逆轉(zhuǎn)有關(guān)的因素有：稀釋脫毒條件小分子物質(zhì)的影響52二、常用細(xì)菌類毒素疫苗1.白喉類毒素1）概述由白喉?xiàng)U菌引起的急性呼吸道傳染病，產(chǎn)生外毒素引起局部炎癥及組織壞死532）白喉?xiàng)U菌的病原學(xué)（1）形態(tài)及生活習(xí)性：革蘭氏陽性棒狀桿菌，需氧或兼性厭氧，抵抗力較弱（2）分型：重型、中間型、輕型，流行中的多為輕型，引起的癥狀最輕（3）白喉毒素（Diphtheria toxin ）的分子結(jié)構(gòu)及致病機(jī)制543）白喉類毒素的生產(chǎn)工藝與檢定（1）生產(chǎn)工藝菌株：PW8或由其篩選得到產(chǎn)毒培養(yǎng)基：氮源、能源、生