水稻根系活力測定

1、一、水稻根系活力測定     1. 水稻根系流液的測定    （1） 測定意義 水稻根傷流液的多少與根系活力有密切的關系，在一定時間內(nèi)測定傷流液的重量，是衡量根系活力的一個較為簡便的方法。    （2） 測定方法 選用一端封閉，一端開口的很薄的塑料套管，管內(nèi)放進少時脫脂棉（在天平上稱得重W2），兩次重的差數(shù)，代表一定時間內(nèi)（t）的傷流量，并按下式計算：    傷流量（g/小時）=（W1-W2）/t   &#

2、160;（3） 注意事項     如果沒有合適的塑料套管，可以自己制作，直徑大小出切口直徑稍大一點，使能自由套昆為度。水稻傷流量較少，套管的長度一般2-3cm即可。用塑料薄膜根據(jù)所需大小栽成小片，在需要合縫的地方折迭起來上面緊貼上玻璃紙，而后將燒燃的烙鐵在紙上前后左右移動，檢查套管不漏氣即可使用。     收集傷流液在一天當中的最適時間隨植物種類和環(huán)境條件而異，一般最好在上午進行。     套管理與地上部切口套管理接之處，一般不須密封。一則可省去手續(xù)上的麻煩，二是水分從套接的

3、地方蒸發(fā)的機會微不足道，不影響測定結果。    2. 水稻根系氧化的測定（a-萘胺法）    （1） 測定意義：水稻根系的氧化力除了葉部吸收的氧轉(zhuǎn)入根部外，根部還有一條乙醇酸氧化途徑，這條途徑可產(chǎn)生過氧化驗氫，以后在過氧化酶的作用下產(chǎn)生氧，是水稻根產(chǎn)生氧化力的一條特殊代謝途徑，由于水稻根有氧化力，可氧化土壤中有害的還原物質(zhì)，從而保證了根的正常代謝。據(jù)試驗報道，當根氧化力增大時，根的有氧呼吸較旺盛，吸收養(yǎng)料也較多。根的a蔡胺氧化力可作為水稻根系活力的一個重要指標。    （2）

4、 原理與方法 a-蔡胺吸附在水稻根表面時，能被根系氧化，生成紅色羥基蔡胺，故可從根表面染爭的深淺，粗略地估計根的氧化力。定時測定則是對a-蔡胺氧化前后濃度的變化進行測量。一般用對氨基苯磺酸和硝酸作顯色劑，使與a-蔡胺起顯爭反應，生成對一碘酸-a蔡胺偶氮苯。其化學肥應如下：    （3） 試劑配制     100g/ml a蔡胺標準濃液。精確稱了取分析純a-蔡胺1. 0000g，溶于1000ml蒸餾水中。充分溶解后從中吸取100ml稀釋至1000ml即成100g/ml a-蔡胺溶液，保存在棕我瓶中，置于低溫黑暗處。使

5、用前稀釋至40g/ml。     1%對氨基苯硫酸溶液。稱1g對氨基苯磺酸，深于100ml30%的乙醇溶液中。     100ppm亞硝酸鈉溶液。稱0.1g亞硝酸鈉于1L蒸餾水中。     0.1M磷酸鹽緩沖液。同0.1M磷酸二氫 鉀、0.1M氫氧化鈉溶液按6. 32:3. 77的窖混合而成。此緩沖液的ph應為7. 0。     標準曲線的繪制：用吸管分別注入40g/ml a-蔡溶液于6只25ml的容量瓶中，使含量分別為0（空白）、12

6、. 20、30、40、50、60g。加入等量的磷酸緩沖液，顯色。并分別測定各溶液的光密度，繪制曲線。    （4）測定方法 取具有代表性水稻植株若干，盡量避免傷根，洗去根部泥土后，再用蒸餾水淋洗，最后用吸水紙將根部水分吸干。將距根尖2cm長的一段取下，混合均交，稱1g重（或沿根的基部將根部切下取混合根1g），置于100ml三角瓶中，加40g/ml a-蔡胺所引起的。把此時作為零值。為了測定這一濃度值，在根系浸入a-蔡10分鐘后，立即從此平衡液中準確地吸取2ml入入25ml容量瓶中，這是第一次取樣。緊接著塞好瓶塞，置于振蕩器上，于25振蕩3-6小時。再次從

7、平衡液中準確地吸取2ml，放入另一25ml容量瓶中，這為第二次取樣。無論哪一次取樣；如溶液混濁，均須過濾。由于a-蔡胺在空氣中振蕩時會自動氧化，故須作空白試驗。    在兩次取樣的容量瓶中，各加入蒸餾10ml，1%對氨 基苯磺溶液和100g/ml亞硝酸鈉溶液各1ml。充分搖動5分鐘，使之顯色，然后加蒸餾水定容，搖勻。在20-60分鐘內(nèi)用1cm比色杯于510nm波長或50號濾光片分別測定前后兩次樣品中a-蔡含量。并求得根的凈a-蔡胺氧化值。一般用鮮根1g，振蕩3小時，二室溫下進行，但須注明溫度，以便比較。    （5

8、） 結果計算 以1g鮮根，振蕩3小時為例，第一次取樣是根上吸附的氧化鐵氧化a-萘受濃度（A）。它是酶促反應前a-萘胺的起始濃度。    第二次取樣是在根的酶促反應3小時后剩余的a-萘胺濃度（B）。所以（A-B）則是根的氧化量和自動氧化量之和。    空白試驗是a-萘胺在振蕩3小時的自身氧化量（C）。    溶液是等體積的40g/mla-萘胺溶液和磷酸緩沖共50ml，所以每毫升a-萘胺含量為20g/ml。X為稀釋倍數(shù)。因為取樣為2ml，酶促反應是在48ml的a-萘胺溶液中進行的

9、，所以X為24。             Y=a-萘胺氧化量（微克/克鮮根/小時）    3. 用根系總吸收面積和活踽吸收面積來測定根系活力    （1） 原理沙比寧理論，認為植物對溶質(zhì)的最初吸收具 只附的特性，并假定這時要根系表面均勻的覆蓋了一層吸附物質(zhì)的單分子層。因些能根據(jù)根生活費對某種物質(zhì)的吸附量來測定根的吸收面積。常用甲稀蘭作為被吸附物質(zhì)，它的被吸附量可以根據(jù)供試液濃度的變化用比色法準確的

10、測出。已知1mg甲烯蘭單分子層占用1. 1M2的面積，據(jù)此即可求出根系的總吸收面積。當根系在甲烯蘭在甲烯蘭溶液中已達到吸附飽和而仍留在溶液中時，根系的活踽部分能把原來吸附的物質(zhì)吸收到細胞中去，因而繼續(xù)吸附甲烯蘭。從后一吸附時法語出活踽吸收面積，可作為根系活力的指標。    （2）材料與設備    1. 250毫升量杯或量筒 2. 小瓷杯或燒杯 3. 吸水紙 4. 甲烯蘭 5. 移液管（2毫升） 6. 小試管    （3）實驗步驟    

11、 取待測植物根系用排水法在量杯或量筒中測定根系體積     把0.0002N甲烯蘭溶液（每毫升溶液中含有 0.064mg甲烯蘭）分別在三個編號的小瓷杯里，每杯中溶液量約10倍于根的體積。準確記下每杯的溶液用量。     取出根系，吸水紙小心吸干根上的水分（切勿傷根），然后依次浸入盛有甲烯蘭溶液的瓷杯里，在每杯中浸1分鐘，迅整取出。注意每次了出根系時務必要杯沿停一下，使甲烯蘭溶液從根上流回到原瓷杯中。     從三個瓷杯中名取1毫升溶液加入試管，分別稀釋至10倍，再與每毫升含甲

12、烯蘭0.01,0.02,0.03,0.004,0.005,0.006mg的標準比色管進行比色，記錄比色所得濃度?；蛟诜止夤舛扔嬒?50nm處比色，讀出光密度。然后在標準曲線上查得第毫升溶液中甲烯蘭的毫克數(shù)。據(jù)些求得每杯浸入根系后溶液中剩下的甲烯蘭mg數(shù)。     把結果記入下表，并依下式求出根的吸收面積：    總吸收面積（M2）=（C1C1）×V1+(Ca-Ca)×Va×1. 1    活踽吸收面積（M2）=（Ca-Ca）×Va×1. 1