加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛的療效及其機(jī)制探討

1、麻醉學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛的療效及其機(jī)制探討關(guān)鍵詞：加巴噴丁 糖尿病 糖尿病性神經(jīng)痛 細(xì)胞因子 腫瘤壞死因子 鎮(zhèn)痛效果 神經(jīng)病理性疼痛摘要：神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic ne

2、uropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GB

3、P的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，

4、STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1

5、亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1

6、亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF

7、-表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

8、P0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴丁治療后對糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。正文內(nèi)容 神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diab

9、etes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全

10、明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁

11、對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛

12、效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義

13、(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓

14、2-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF-表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的V

15、AS評分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴

16、丁治療后對糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨

17、床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)

18、水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀

19、察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、

20、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后

21、3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF-表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分

22、(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對

23、照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴丁治療后對糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neur

24、opathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的

25、形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影

26、響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-tim

27、e PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘

28、缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁

29、對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF-表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴

30、丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴丁治療后對糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研

31、究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，

32、加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗

33、兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical thre

34、shold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射

35、后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)

36、。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF-表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病

37、無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。

38、 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴丁治療后對糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropa

39、thy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)

40、制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹

41、腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)

42、的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mR

43、NA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF-表達(dá)水平

44、的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05

45、)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴丁治療后對糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes melli

46、tus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，P

47、DN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠

48、的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：

49、STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透

50、視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位呈高表達(dá)

51、，加巴噴丁干預(yù)治療后2-1亞單位水平顯著降低，提示2-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對2-1亞單位的下調(diào)作用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對血漿TNF-表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。 方法 以視覺模擬評分(VAS)評定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24例為正常對照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評分變化及藥物的

52、副作用。比較治療前后VAS評分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對其表達(dá)水平的影響。 結(jié)果 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評分降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-的含量較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，加巴噴丁治療前后患者血漿TNF-含量變化與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁在臨床上治療糖尿病性神經(jīng)痛患者效果明確，副作用輕微。TNF-參與糖尿病性神經(jīng)痛的發(fā)病，加巴噴丁治療后對糖尿病性神

53、經(jīng)痛患者血漿TNF-水平無影響。神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropathy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛

54、藥物，其治療的滿意率小于30。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分

55、探討了加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對患者血漿TNF-表達(dá)水平的影響。通過上述動物實驗與臨床試驗兩個方面進(jìn)一步評估加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動物實驗)加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對脊髓鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響 目的 觀察加巴噴丁對糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對脊髓電壓門控鈣離子通道2-1亞單位表達(dá)水平的影響。 方法 行為學(xué)實驗：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey hairs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效

56、果時，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實驗：以Real-time PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對2-1亞單位表達(dá)的影響。 結(jié)果 行為學(xué)實驗：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對照組比較

57、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實驗100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實驗：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓2-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天2-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果