安捷倫科技針對(duì)速成雞中抗病毒藥物利巴韋林和金剛烷胺的整體解決

1、安捷倫科技針對(duì)”速成雞”中抗病毒藥物利巴韋林和金剛烷胺的整體解決方案李建中, 吳翠玲, 陸予菲, 于明武, 陳偉, 張之旭 （安捷倫科技(中國(guó) 有限公司, 北京,100102）近日, 央視曝光山東等地部分養(yǎng)殖戶在肉雞飼養(yǎng)過程中大量濫用抗生素, 激素和抗病毒類藥物, 違規(guī)喂食金剛烷胺、利巴韋林等抗病毒藥品的“速成雞”流入上海百盛旗下餐飲機(jī)構(gòu)一事，美國(guó)快餐業(yè)巨頭肯德基和麥當(dāng)勞在中國(guó)被卷入“速成雞”風(fēng)波，引發(fā)滬上人士和全國(guó)消費(fèi)者的廣泛關(guān)注和擔(dān)憂！農(nóng)業(yè)部對(duì)此事件高度重視，及時(shí)責(zé)成山東有關(guān)部門去調(diào)查處理這件事情，也派出了專家組奔赴山東?，F(xiàn)在已經(jīng)關(guān)閉了有關(guān)的養(yǎng)雞企業(yè)和加工企業(yè)，包括一些養(yǎng)雞戶，正在緊鑼密鼓

2、的查處之中。此次事件中首次被曝光的抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺目前國(guó)家尚無(wú)相應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和方法，這為相關(guān)政府執(zhí)法檢測(cè)部門，生產(chǎn)企業(yè)和第三方實(shí)驗(yàn)室迅速開展監(jiān)督檢查帶來(lái)了技術(shù)上的困難。安捷倫科技作為分析儀器業(yè)界知名品牌，多年來(lái)一直致力于為食品安全領(lǐng)域提供強(qiáng)有力的產(chǎn)品、技術(shù)解決方案。為應(yīng)對(duì)此次食品安全突發(fā)事件，安捷倫科技為廣大分析工作者提供了分析檢測(cè)雞肉中抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺的完整解決方案。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 儀器與試劑安捷倫科技有限公司6460 QQQ質(zhì)譜儀；安捷倫科技有限公司1290 Infinity UHPLC。 乙腈，甲醇，異丙醇，乙酸銨，氨水，甲酸，去離子水，三氯乙酸。 P

3、oroshell120 EC-C18 3.0x100 mm, 2.7 m:P/N 695975-302， ZORBAX SB-Aq RRHT 100*3.0mm，1.8 m P/N.828975-314。 1.2 樣品前處理?xiàng)l件1.2.1雞肉中利巴韋林的前處理方法準(zhǔn)確稱取雞肉樣品( 2g 0. 02 g 于15mL 具塞離心管中, 加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，5 mL 的乙腈1%三氯乙酸溶液（7:3）, 加蓋后渦旋1min, 10000r/min離心10 min, 吸取上清液于15mL 離心管中；再向殘?jiān)性偌尤? mL的乙腈1%三氯乙酸溶液（7:3）, 重復(fù)上述操作, 合并兩次上清液；渦旋混勻，用

4、氨水調(diào)節(jié)提取液pH 值為8.5 0.1,再10000r /min離心10 min，取全部上清液過柱凈化。凈化 流程如下： 1.2.2雞肉中金剛烷胺的前處理方法稱取2g 雞肉樣品（精確至0.01g ）至15mL 離心管中，依次加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、 5mL 的甲醇1%三氯乙酸（50+50，V/V），渦旋1min ，超聲30min ，10000r/min離心10min ，上清液全部轉(zhuǎn)移至15mL 離心管中；再加入 5mL 的甲醇1%三氯乙酸（50+50，V/V）重復(fù)提取一次，合并全部提取液；渦旋均勻后重新離心，取出上清液5mL ，過Plexa PCX固相萃取柱凈化，如下所示： 1.3 液相和質(zhì)譜條

5、件液相色譜柱為安捷倫Poroshell120 EC-C18，3.0 x 100mm, 2.7 m （金剛烷胺）和ZORBAX SB-Aq RRHT 3.0 x 100mm，1.8 m P/N.828975-314（利巴韋林）；流動(dòng)相為A 為水（含0.1%體積比的甲酸+5mM乙酸銨），B 為乙腈，柱溫30o C ；進(jìn)樣量2L，流速為0.4 mL/min。利巴韋林梯度見下表1Time(min B% 0.00 0.00 2.00 0.00 4.00 15.00 4.10 90.00 6.0090.00金剛烷胺洗脫梯度見表2Time(min B% 0.00 0.00 2.00 0.00 4.00 15

6、.00 5.00 15.00 8.00 30.00 8.50 98.00 10.0098.00QQQ 質(zhì)譜參數(shù)（ESI+模式）：干燥氣溫度（Gas Temp）300 oC ，干燥氣流量（Gas Flow）8mL/min，霧化器壓力（Nebulizer ）40psi ，鞘流氣溫度（Sheath Gas Temp）300 oC ，鞘流氣流量（Sheath Gas Flow）11mL/min，毛細(xì)管電壓（Capillary ）3000V ，噴嘴電壓（Nozzle）0V ；MRM 參數(shù)見表3，安捷倫MassHunter軟件用于定性（Qualitative ）和定量（Quantitative ）分析。表

7、3 利巴韋林和金剛烷胺的MRM 參數(shù) 2 結(jié)果與討論從利巴韋林和金剛烷胺的結(jié)構(gòu)和文獻(xiàn)報(bào)道，可以采用電噴霧離子源正離子模式測(cè)試，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明利巴韋林可以生成M+H+（m/z 245.1）和M+Na+ （m/z 267.1）分子離子峰，金剛烷胺可以生成M+H+（m/z 152.2）分子離子峰；分別選擇M+H+峰進(jìn)行子離子掃描，最終確認(rèn)利巴韋林選擇m/z 113（定量子離子）和96（定性子離子），金剛烷胺選擇m/z 135（定量子離子）和93（定性子離子）作為多反應(yīng)通道監(jiān)測(cè)離子對(duì)。由于利巴韋林極性較強(qiáng)，在反相C18色譜柱上保留較弱，所以采用100%水相作為梯度色譜條件的起始比例，另比較了C18柱和S

8、B-Aq 在分析利巴韋林時(shí)具有選擇性差異，在C18上不能完全分離的基質(zhì)干擾，SB-Aq 可以實(shí)現(xiàn)很好的分離。另外流動(dòng)相添加0.1%甲酸和低濃度乙酸銨促進(jìn)正離子電離。經(jīng)過優(yōu)化后的色譜圖見圖1。 圖1 1ppb 濃度利巴韋林和金剛烷胺的MRM 譜圖儀器方法學(xué)考察了靈敏度，線性范圍，穩(wěn)定性及添加回收率等指標(biāo)。其中靈敏度測(cè)試了0.1ppb 濃度標(biāo)準(zhǔn)品，其中利巴韋林的信噪比為99.2；金剛烷胺的信噪比為35.6，均大于10倍信噪比定量檢出限，結(jié)果如圖2和圖3所示： 圖2 0.1ppb 濃度利巴韋林靈敏度譜圖 圖3 0.1ppb 濃度金剛烷胺靈敏度譜圖在0.1ppb 10ppb 濃度范圍內(nèi)，測(cè)試線性相關(guān)系

9、數(shù)均大于0.999。如圖4和圖5所示： 圖4 利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖5 金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)平行6針測(cè)試，峰面積的RSD 均小于5%，具有良好的穩(wěn)定性。分別向空白雞肉中添加標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)試回收率，其中利巴韋林的添加回收率在80101%之間，見表4；金剛烷胺添加回收率結(jié)果在70%82%之間，見表5。標(biāo)準(zhǔn)品，空白樣品和添加樣品的譜圖如圖6和圖7所示： 圖6 利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)品、空白樣品和添加樣品的TIC 疊加譜圖 圖7金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品、空白樣品和添加樣品的TIC 疊加譜圖表4 雞肉中的利巴韋林回收率結(jié)果 表5雞肉中的金剛烷胺添加回收率結(jié)果 3 結(jié)論 利用安捷倫科技的 Bond Elut PBA 和 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱和 1290UHPLC+6460QQQ 高 靈敏度液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)問題雞肉中抗病毒藥物利巴韋林和金剛烷胺殘留量的檢測(cè)確證分 析，可以為此類藥物的快速篩查確證分析提供了有力的解決方案。 Poroshell120 EC-C18 是安捷倫專利的薄殼型高效液相色譜柱， 具有柱壓低， 柱效高的突出特點(diǎn)， 既可以用于 UHPLC 分析，也可以在常規(guī) HPLC 上實(shí)現(xiàn)快速高效分析，是實(shí)驗(yàn)室提高工作效率，節(jié)約 溶