乳酸菌細(xì)菌素的制備

1、1系部:制藥系專業(yè):生物制藥組員:張婉月 徐潔 嚴(yán)夢迎 臧贏 陳孝顏生藥生藥13112乳乳酸菌的介紹酸菌的介紹 乳酸菌（Lactobacillus）是發(fā)酵糖類且主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細(xì)菌的總稱。凡是能從葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌統(tǒng)稱為乳酸菌。是一種存在于人類體內(nèi)的益生菌。乳酸菌可用于制造酸奶、乳酪、德國酸菜、啤酒、葡萄酒、泡菜、腌漬食品和其他發(fā)酵食品。3乳酸菌小介紹乳酸菌小介紹中文學(xué)名：乳酸菌界：細(xì)菌界門：厚壁菌門Firmicutes綱：芽孢桿菌綱Bacilli目：乳桿菌目Lactobacillales科：乳桿菌科Lactobacillaceae屬：乳桿菌屬La

2、ctobacillus代謝類型：異養(yǎng)厭氧型4形態(tài)特征形態(tài)特征 乳酸鏈球菌族，菌體球狀，通常成對或成鏈。5生理功能生理功能 1防治有些人種普遍患有的乳糖不耐癥（喝鮮奶時出現(xiàn)的腹脹、腹瀉等癥狀）。 2促進蛋白質(zhì)、單糖及鈣、鎂等營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生維生素B族等大量有益物質(zhì)。 3增加加腸道有益菌群，改善人體胃腸道功能，恢復(fù)人體腸道內(nèi)菌群平衡，形成抗菌生物屏障，維護人體健康。 4、抑制腐敗菌的繁殖，消解腐敗菌產(chǎn)生的毒素，清除腸道垃圾。6生理功能生理功能 5抑制膽固醇吸收，降血脂、降血壓作用。 6免疫調(diào)節(jié)作用，增強人體免疫力和抵抗力。 7抗腫瘤、預(yù)防癌癥作用。 8提高SOD酶活力，消除人體自由基，具抗衰老

3、、延年益壽作用。 9有效預(yù)防女性泌尿生殖系統(tǒng)細(xì)菌感染。 10控制人體內(nèi)毒素水平，保護肝臟并增強肝臟的解毒、排毒功能。7生活習(xí)性生活習(xí)性繁殖：在固體培養(yǎng)基上菌落較小，生長緩慢。在液體發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)可以很快地生長，離心洗滌可以獲得純度較高的菌體且兼具需氧和厭氧的性能。運動：大多數(shù)不運動，少數(shù)以周毛運動。活性：普通的乳酸菌，活力極弱，它們只能在相對受限制的環(huán)境中存活，一旦脫離這些環(huán)境，其自身也會滅亡。只有經(jīng)過特殊工藝處理的乳酸菌才能到達(dá)腸道。進入腸內(nèi)的乳酸菌，必須具備數(shù)量多、活力強，才能發(fā)揮其生物功效8類型類型 乳酸菌大體上可分為兩大類： 1） 動物源乳酸菌 2）植物源乳酸菌 因為取自植物易被人體吸收

4、，不論攝取多大的量，人體不會產(chǎn)生異體蛋白排斥反應(yīng)，且植物源乳酸菌比動物源者更具有活力，能比動物源多8倍的數(shù)量到達(dá)人體小腸內(nèi)定植，從而發(fā)揮其強大而穩(wěn)定的生物功效。9 作用機理作用機理 乳酸菌在動物體內(nèi)能發(fā)揮許多的生理功能。乳酸菌能促進動物生長，調(diào)節(jié)胃腸道正常菌群、維持微生態(tài)平衡，從向改善胃腸道功能；提高食物消化率和生物效價；降低血清膽固醇，控制內(nèi)毒素；抑制腸道內(nèi)腐敗菌生長：提高機體免疫力等10 工業(yè)應(yīng)用工業(yè)應(yīng)用 食品生產(chǎn) 常用于制造酸奶、乳酪、德國酸菜、啤酒、葡萄酒、泡菜、腌漬食品和其他發(fā)酵食品。在牛奶中加入乳酸菌可提高牛奶保健作用。 經(jīng)乳酸菌發(fā)酵的乳酸菌奶酪蛋白及乳脂被轉(zhuǎn)化為短肽、氨基酸和小分

5、子的游離脂類等更易被人體吸收的小分子。奶中豐富的乳糖已被分解成乳酸，乳酸與鈣結(jié)合形成乳酸鈣，極易被人體吸收，也可被乳糖不耐癥人群選用。乳酸菌奶能促進胃液分泌，促進消化，對胃具有保養(yǎng)功能，并能抑制腸道內(nèi)腐敗菌的生長，其生物保健價值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于牛奶。11 青貯飼料 不同的研究或者接種不同類型的乳酸菌有不同的結(jié)果。一般接種同型乳酸菌（如乳酸片球菌；植物胚芽乳桿菌；酪蛋白乳桿菌；糞鏈球菌；戊糖片球菌）可降低青貯飼料pH值，增加乳酸含量，降低丁酸含量；接種異型乳酸菌（如布氏乳桿菌；發(fā)酵乳桿菌）則提高青貯飼料pH，增加乙酸的生成。 畜禽生產(chǎn) 飼料中添加乳酸菌，能提高蛋雛雞成活率和日增重，可使斷乳后仔犬體重顯著

6、增加，因此顯著提高飼料利用率。 肉品貯藏 乳酸菌常用于生物防腐，研究表明，用乳酸菌發(fā)酵液保鮮肉品，可以抑制肉品中的致病菌和腐敗菌的生長，保存風(fēng)味物質(zhì)，不改變食品組織狀態(tài)，而且在正常冷卻儲存條件下，也不影響食品的感官特性。12乳酸菌凍干粉制作方案乳酸菌凍干粉制作方案材料 菌種 ： 乳酸菌 培養(yǎng)基 ：MRS培養(yǎng)基：蛋白胨10g、酵母膏5g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、磷酸氫二鉀2g、檸檬酸三氨1g、乙酸鈉5g、硫酸鎂0.8g、硫酸錳0.25g、吐溫80 1ml、PH值6.26.4、用蒸餾水定容至1000ml，115-120滅菌30min。 計數(shù)培養(yǎng)基：1LMRS培養(yǎng)基加入瓊脂20g、13技術(shù)路線技

7、術(shù)路線14主要試劑和儀器 試劑 奶粉、甘露醇、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖、磷酸氫二鉀、檸檬酸三氨、乙酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳、吐溫、蒸餾水、生理鹽水等。 儀器 高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、無菌操作臺、高速離心機、發(fā)酵罐、真空冷凍離心機、菌液瓶等15.具體實施方案 1乳桿菌活化 將實驗室冰箱保藏的德氏乳桿菌用100ml滅菌的MRS液體培養(yǎng)基進行第一次活化，活化溫度37 ，24h后平板檢測純度和活菌數(shù)，檢測達(dá)標(biāo)后再將上述100ml菌液全部轉(zhuǎn)入至400ml滅菌MRS液體培養(yǎng)基進行第二次活化，24h后平板檢測純度和活菌數(shù)，檢測達(dá)標(biāo)后轉(zhuǎn)至40L發(fā)酵罐中進行擴大培養(yǎng)48h。16 2活菌數(shù)的測定 菌種經(jīng)活化、擴培后

8、，接入MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，待測活菌數(shù)時，取0.5mL發(fā)酵液加入至4.5mL滅菌的生理鹽水中，依次做10倍系列稀釋，選取10-8、10-9、10-10三個稀釋倍數(shù)，吸取0.2mL稀釋液注入無菌培養(yǎng)皿中，傾注法加入15mL左右的計數(shù)培養(yǎng)基混勻，每個稀釋度做三個平行培養(yǎng)皿。待培養(yǎng)基凝固后，倒置放入37恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48h，選取菌落數(shù)在30-300之間的培養(yǎng)皿計菌落數(shù)。17 菌體收集 利用超速離心機對發(fā)酵后的菌液進行離心，在轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min的條件下離心10min，去上清收集沉積物。18 4菌泥冷凍干燥 將收集到的沉積物加入至復(fù)配保護劑，用振蕩器混勻，制成菌懸液。再將其盛入冷凍平皿中，隨后先置4冰箱平衡30min后，移入-30冰箱60min，然后置-80冰箱60m