漢防己甲素肺靶向微球?qū)Υ笫蟮脱跣苑蝿?dòng)脈高壓的急性效應(yīng)

1、    漢防己甲素肺靶向微球?qū)Υ笫蟮脱跣?#160;肺動(dòng)脈高壓的急性效應(yīng)        【摘要】目的了解漢防己甲素(Tet)肺靶向微球?qū)Φ脱跣苑蝿?dòng)脈高壓的治療效應(yīng)及其對(duì)肺循環(huán)的選擇性作用。方法采用噴霧干燥法制備Tet含量為32%的Tet肺靶向微球；雄性Wistar大鼠分為3組，每組10只，分對(duì)照組和Tet水溶劑治療組、Tet肺靶向微球治療組。經(jīng)低氧處理3周，分別給予Tet水溶劑和Tet肺靶向微球，觀察用藥前后大鼠肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)和體循環(huán)平均壓(mSBP)的變化。結(jié)果低

2、氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠應(yīng)用Tet肺靶向微球組mPAP的降低較Tet水溶劑治療組更為明顯(P<0.05)，且mPAP在注藥后60 min時(shí)仍明顯低于注射前水平；大鼠mSBP無(wú)顯著變化。結(jié)論Tet肺靶向微球?qū)Ψ窝h(huán)具有較好的選擇性，可明顯增強(qiáng)Tet降低mPAP的效應(yīng)。【關(guān)鍵詞】高血壓，肺性；漢防己甲素；肺靶向微球The acute effect of tetrandrine pulmonary targeting microspheres on hypoxic pulmonary hypertension in ratsCHENG Deyun, CHEN Wenbin, LU Bin, et a

3、l.Department of Respiratory Disease, The First Affiliated Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041, China【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of tetrandrine (Tet) pulmonary targeting microspheres on hypoxic pulmonary hypertension and its selective role on pulmonary

4、 circulation. MethodsTet pulmonary targeting microspheres were synthesized by spraying desiccation, the content of tetrandrine in pulmonary targeting microspheres is 32%. Twenty Wistar rats were exposed to hypoxia for three weeks, the rats were given Tet pulmonary targeting microspheres and Tet aque

5、ous solution respectively and another 10 rats were as normal control. The mean pulmonary arterial pressure (mPAP) was measured by a right cardiac catheterization, mean systemic blood pressure (mSBP) was measured by left femoral catheterization. ResultsAt the end of hypoxic treatment, rats developed

6、pulmonary hypertension. mPAP in the rats receiving Tet pulmonary targeting microspheres decreased more obviously than the rats receiving Tet aqueous solution (P<0.05), and the effects maintained for 60 min after administration. However, the mSBP remained normal in rats receiving Tet pulmonary tar

7、geting microspheres. ConclusionTet pulmonary targeting microspheres can improve the effect of Tet on the hypoxic pulmonary hypertension and Tet has the selective role on the pulmonary circulation. 【Key words】Hypertension, pulmonary;Tetrandrine;Pulmonary targeting microspheres漢防己甲素(tetrandrine, Tet)具

8、有擴(kuò)張血管、抑制膠原合成和多種介質(zhì)釋放的作用，臨床上己應(yīng)用于高血壓和冠心病等多種疾病的治療。文獻(xiàn)報(bào)道，Tet對(duì)慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺動(dòng)脈高壓亦具有較好的療效1。為了使藥物主要分布于肺內(nèi)，達(dá)到提高療效和降低副作用的目的，我們采用噴霧干燥法制備Tet肺靶向微球，觀察其對(duì)大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的急性治療效果。材料與方法一、Tet肺靶向微球的制備1.試劑和主要儀器：Tet(江西彭澤制藥廠生產(chǎn))；載體材料選擇白蛋白。UV-250型分光光度儀(日本島津)；S-450型電子掃描顯微鏡(日本，分辨率6 nm)；CDR-1型差熱分析儀(上海天平儀器廠)。2.制備工藝：采用噴霧干燥法。由于Tet不溶于水，采

9、用改變?nèi)軇┓ㄖ瞥晌⒕?，將微晶分散在液滴中噴霧干燥成球，然后加熱變性(100)、離心和洗滌后制成白色粉末狀Tet微球。二、實(shí)驗(yàn)方法1.動(dòng)物和低氧處理：雄性Wistar大鼠共30只(華西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重200220 g，分籠飼養(yǎng)，自由飲水和攝食。按體重配對(duì)分為正常對(duì)照組(組)、Tet水溶劑治療組(組)和Tet肺靶向微球治療組(組)，每組10只。Tet組和Tet組在注藥前均接受常壓低氧吸入氧濃度(FiO2)=0.10±0.053周，建立肺動(dòng)脈高壓模型。正常對(duì)照組在注藥前不接受低氧處理，置于同一房間內(nèi)飼養(yǎng)。表1各組大鼠Tet肺靶向微球降低mPAP的效果(±s)組別只

10、數(shù)注藥前mPAP (mm Hg)注藥后mPAP(mm Hg)1 min5 min10 min20 min30 min60 min組1016.6±1.116.4±1.416.2±1.216.5±1.416.4±0.916.7±1.516.5±0.9組1029.9±1.226.4±1.1*26.0±1.6*26.5±1.4?29.0±1.929.6±0.929.8±1.0組1030.0±1.825.5±1.4*21.0±1.7*#

11、15.0±1.3*#21.8±1.4*#24.0±1.5*#25.0±1.7*#注：1 mm Hg=0.133 kPa，與組比較，P0.01；與同組用藥前比較，*P0.05；與組比較，#P0.05 表2各組大鼠Tet肺靶向微球?qū)SBP的影響(±s)組別只數(shù)注藥前mSBP (mm Hg)注藥后mPAP(mm Hg)1 min5 min10 min20 min30 min60 min組10110±14104±998±12*96±9*102±11104±14107±16組1010

12、4±999±1296±9*95±14*98±18101±12104±12組10111±11108±14107±14105±13108±12107±14109±17注：與用藥前比較，*P0.05 2.給藥方法：和組大鼠低氧結(jié)束后，組大鼠經(jīng)左側(cè)頸外靜脈緩慢注射Tet水溶劑4 mg/kg，組大鼠經(jīng)左側(cè)頸外靜脈緩慢注射Tet肺靶向微球10 mg/kg(相當(dāng)于Tet 3.2 mg/kg)。組大鼠經(jīng)左側(cè)頸外靜脈緩慢注射Tet水溶劑4 mg/kg。3.觀察指標(biāo)：大鼠經(jīng)戊

13、巴比妥鈉(33 mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉。經(jīng)右側(cè)頸外靜脈將微導(dǎo)管插入大鼠肺動(dòng)脈檢測(cè)其肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)，經(jīng)大鼠左側(cè)股動(dòng)脈插管檢測(cè)其體循環(huán)平均壓(mSBP)，以四道生理記錄儀進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄。待上述測(cè)定指標(biāo)穩(wěn)定時(shí)記錄用藥前基礎(chǔ)值，然后分別給予Tet水溶劑和Tet肺靶向微球，記錄用藥后1、5、10、20、30、60 min時(shí)的上述指標(biāo)變化。三、統(tǒng)計(jì)分析采用兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用±s表示。結(jié)果一、Tet肺靶向微球的特性對(duì)微球特性分析，大多數(shù)微球呈大小均勻的球形微粒，其平均粒徑為2 m，見(jiàn)1；藥物含量分析顯示微球中含Tet量為32%；經(jīng)電泳試驗(yàn)證實(shí)微球帶有正電荷。二、Tet肺靶向微球

14、的作用1.Tet肺靶向微球?qū)Υ笫髆PAP的作用：對(duì)正常對(duì)照組大鼠靜脈注射Tet水溶劑后，大鼠mPAP無(wú)明顯改變；低氧3周大鼠mPAP明顯升高，形成了肺動(dòng)脈高壓，經(jīng)靜脈注射Tet水溶劑1 min后大鼠mPAP開(kāi)始下降，于5 min左右達(dá)最低水平，30 min后回升至注射前水平；給低氧3周大鼠靜脈注射Tet肺靶向微球后1 min mPAP開(kāi)始下降，于10 min左右達(dá)最低水平，維持較長(zhǎng)的時(shí)間，60 min仍未回升至注射前水平，見(jiàn)表1。1Tet肺靶向微球掃描電鏡(×15 000)2.Tet肺靶向微球?qū)Υ笫髆SBP的作用：對(duì)正常對(duì)照組及低氧3周大鼠靜脈注射Tet后，mSBP出現(xiàn)下降趨勢(shì)，于5

15、10 min左右達(dá)最低水平，然后逐漸回升，于30 min后恢復(fù)到注射前水平；給低氧3周大鼠靜脈注射Tet肺靶向微球后，mSBP無(wú)明顯變化，見(jiàn)表2。討論正常大鼠靜脈注射Tet水溶劑后，mPAP無(wú)明顯變化，說(shuō)明Tet對(duì)正常大鼠肺動(dòng)脈壓無(wú)影響。低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠接受Tet水溶劑靜脈注射后，出現(xiàn)mPAP下降，其降低mPAP的作用在30 min左右消失；Tet肺靶向微球靜脈注射后，大鼠mPAP降低程度更為顯著，且mPAP在60 min時(shí)仍明顯低于注射前水平，說(shuō)明Tet肺靶向微球具有比Tet水溶劑更強(qiáng)和更持久的降低低氧性肺動(dòng)脈高壓效應(yīng)。正常和低氧大鼠靜脈注射Tet水溶劑后，均可出現(xiàn)輕微的mSBP降低，顯

16、示出Tet對(duì)體循環(huán)的降壓效應(yīng)，說(shuō)明Tet同其它的擴(kuò)血管藥物一樣，對(duì)肺循環(huán)不具有選擇性，在降低mPAP的同時(shí)，可引起一定程度的mSBP下降。對(duì)低氧大鼠應(yīng)用Tet肺靶向微球后，mSBP無(wú)顯著變化，提示Tet肺靶向微球的作用主要發(fā)生于肺內(nèi)，亦即具有一定的選擇性。Tet為中藥漢防己中提取的生物堿，具有多種藥理作用，包括擴(kuò)張血管、減輕炎癥過(guò)程和抑制膠原合成等作用2；對(duì)COPD肺動(dòng)脈高壓患者應(yīng)用Tet后，可使其肺動(dòng)脈壓降低1。我們以前的研究亦發(fā)現(xiàn)，對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠應(yīng)用Tet水溶劑并同時(shí)繼續(xù)低氧1周，其mPAP明顯降低3，均提示Tet在低氧性肺動(dòng)脈高壓的治療中具有較大的應(yīng)用前景。然而，由于Tet水溶劑

17、經(jīng)注射后，迅速通過(guò)肺臟進(jìn)入體循環(huán)，故Tet水溶劑在肺內(nèi)停留時(shí)間不長(zhǎng)，其降低mPAP的作用時(shí)間亦較短暫，且進(jìn)入體循環(huán)的Tet降低mSBP，產(chǎn)生一定的不良反應(yīng)。本研究將Tet制成白蛋白微球，經(jīng)靜脈注射后可被肺毛細(xì)血管床機(jī)械性濾取以及所帶電荷的作用而具有肺靶向的特性。Kanke等4報(bào)道，微粒的直徑和電荷等特征可影響微球的靶向特性。微球的大小與其機(jī)械性截留有關(guān)，直徑為715 m的微球可被肺截留，從而達(dá)到延長(zhǎng)藥物在肺內(nèi)停留時(shí)間的作用；微球所帶電荷與其靶器官導(dǎo)向有關(guān)，帶正電荷的微粒較易達(dá)到肺臟，而帶負(fù)電荷的微球則較易進(jìn)入肝臟5。本研究采用噴霧干燥法制備的Tet肺靶向微球直徑為2 m，帶有正電荷，具備肺靶向

18、的特性。該法制成的微球直徑為2 m較文獻(xiàn)報(bào)道的微球直徑為小，可避免微球直徑過(guò)大導(dǎo)致肺毛細(xì)血管阻塞而發(fā)生肺血管栓塞的危險(xiǎn)，但由于其電荷的作用，以及溶解后的微球可相互粘附，從而可延長(zhǎng)微球在肺循環(huán)的停留時(shí)間。低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠靜脈注射后，初步研究的結(jié)果提示Tet肺靶向微球較Tet水溶劑具有更好的治療效果，而無(wú)明顯的降低體循環(huán)血壓的作用。說(shuō)明Tet制成微球后在肺內(nèi)停留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，可明顯提高Tet的治療效果，減少不良反應(yīng)的發(fā)生。 基金項(xiàng)目：國(guó)家“九五”科技攻關(guān)專(zhuān)題基金資助項(xiàng)目(96-906-02-17)；四川省中醫(yī)管理局科研基金資助項(xiàng)目(96027)作者單位：程德云（610041 成都，華西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科）陳文彬（610041 成都，華西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科）莫曉能（610041 成都，華西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科）陸彬（藥學(xué)院）參考文獻(xiàn)1，康健，于潤(rùn)江，王懷良，等.漢防己甲素降低慢性阻塞性肺病肺動(dòng)脈高壓的臨床觀察.中華結(jié)核和呼吸雜志，1993，16：93-94.2，楊儀方，王聯(lián)億.漢防己甲素的藥理作用研究近況.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1986，2：43-45.3，李為民，陳文彬，吳兆鋒，等.漢防己甲素對(duì)缺氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織鈣調(diào)素活性的影響.中華結(jié)核和呼吸雜志，1996，19：75-7