抗結(jié)核分支桿菌抗體在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用

1、    抗結(jié)核分支桿菌抗體在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用        自用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 檢測結(jié)核抗原抗體用于結(jié)核性腦膜炎（簡稱結(jié)腦）診斷以來，報道檢測抗體的較多，而檢測抗原的較少。我們分別用三種抗原(BCG、聚合OT、BCGPPD)免疫家兔，獲得、號抗血清，并用于腦脊液（CSF）中結(jié)核抗原的檢測。材料與方法將羅氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)的BCG處理后配成濕重80 mg/ml，紫外線殺死細菌，用于免疫家兔。免疫方法：第1次0.2 ml耳靜脈注射，第2、3、4次0.5 ml

2、BCG 加不完全福氏佐劑(第3、4次量增加1倍)，皮下多點注射，第5次0.5 ml耳靜脈注射。每次間隔2周，末次注射后710天放血，分離血清，命為號血清。將OT經(jīng)透析后用氯甲酸乙酯聚合，測蛋白含量并調(diào)配為200 g/ml。取聚合OT 600 g另加OT 5 mg(0.14 ml)加福氏完全佐劑3 ml，磁力攪拌器上充分混勻乳化，用于免疫家兔。雙側(cè)背部多點皮內(nèi)注射1 ml，共5次，每次間隔2周，第6次將聚合OT 200 g/ml調(diào)pH為7.2后緩慢靜注。7天后放血，分離血清，命為號血清。用制成的濕重為80 mg/ml的BCG，經(jīng)超聲波粉碎后加PPD 1 mg加福氏完全佐劑。免疫家兔，于雙后足掌皮

3、下各注射1 ml，第2次雙腹股溝淋巴結(jié)內(nèi)各注射0.5 ml，第3次同第1次量，背部皮內(nèi)多點注射，第4次同第2次，第5次同第3次，第6次用粉碎BCG 1 ml加PPD 0.5 mg靜脈緩注,每次間隔2周,末次注射后7天放血分離血清,命為號血清。用雙向免疫擴散試驗和試管凝集試驗鑒定血清效價。結(jié)果3種血清的效價比較見表1。并用效價較高的、號血清經(jīng)提純后，通過ELISA試驗（雙抗夾心法）檢測了臨床確診的結(jié)腦38例和29例非結(jié)腦患者CSF中結(jié)核抗原。每份標本做復(fù)孔，平均值為其結(jié)果。參考國外的報道以酶標光度計所讀A4920.20為陽性1，檢測結(jié)果見表2，3。表13種抗血清效價比較血清號雙擴效價(PPD)*

4、凝集效價141601811001161140注：*PPD=1 mg/ml 表2號血清檢測腦脊液中結(jié)核抗原結(jié)果組別例數(shù)A值范圍陽性數(shù)陽性率(%)結(jié)腦組380.1000.6532668其他疾病組2900.14700表3號血清檢測腦脊液中結(jié)核抗原結(jié)果組別例數(shù)A值范圍陽性數(shù)陽性率(%)結(jié)腦組380.1600.9083182其他疾病組2900.18300討論從表1中可見號血清雙擴效價為116，凝集效價為1140，是3種血清中效價最高的。號血清次之，雙擴效價為18，凝集效價為1100。號血清效價最低，雙擴效價為14，凝集效價160。參考國外報道1檢測結(jié)核抗原的抗體大多是兔抗BCG,但無法查到該抗體制備方法

5、。我們反復(fù)用不同濃度BCG、滅活和未滅活的BCG及不同的免疫程序免疫家兔，所得抗血清效價均不理想，認為單用BCG為抗原制抗體效果不好。后改用聚合OT(聚合OT的目的是使其分子量增大，增強其抗原性)和BCGPPD為抗原免疫家兔,獲得了較滿意的抗血清號和號。這兩種血清比較來看，號血清優(yōu)于號。而且用這兩種血清對67份CSF中結(jié)核抗原檢測結(jié)果的敏感性分別為82和68,特異性均為100。 號血清檢測抗原的結(jié)果與國外報道基本一致1。從此結(jié)果中可看出，用號血清檢測CSF中結(jié)核抗原，完全可以幫助臨床上快速診斷結(jié)腦。在研制結(jié)核抗體過程中，我們體會到免疫過程較制備其他抗體要長，約23個月，甚至更長，效果好些。此外

6、免疫途徑用皮內(nèi)多點注射和淋巴結(jié)內(nèi)注射效果較好。免疫中發(fā)現(xiàn)兔子消瘦者較體重變化不大者血清效價要高些，其原因還不太清楚，有待進一步研究。近年來聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)用于結(jié)核分支桿菌的檢測報道甚多，但在檢測中逐漸發(fā)現(xiàn)由于污染、存在擴增抑制物、試劑盒缺乏規(guī)范化標準化問題，加之技術(shù)條件、質(zhì)控等方面因素，影響了其敏感性和特異性，而且該項技術(shù)需要特殊儀器和試劑，故限制了在基層的推廣使用。因此我們認為，探索出較好的制備結(jié)核分支桿菌抗體的方法，對于促進用免疫學(xué)方法檢測結(jié)核抗原，幫助臨床快速診斷結(jié)核病是有重要價值的。作者單位：400016 重慶，重慶醫(yī)科大學(xué)臨床微生物學(xué)、免疫學(xué)教研室(吳立翔、蘭景剛系檢驗系學(xué)生)參考文獻1Watt G, Zaraspe G, Bautista S, et al. Rapid diagnosis of tuberculous meningitis by using enzyme-linked immunosorbent assay to detect mycobacterial a