植物生物技術復習題-金(共4頁)

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上一.名詞解釋：1.植物組織培養(yǎng)：在含有營養(yǎng)物質及植物生長物質的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)離體植物組織（器官或細胞）并誘導使其長成完整植株的技術。 2.細胞全能性：廣義的細胞全能性指一個細胞發(fā)育成一個完整有機個體的潛能和特性。植物細胞的全能性指具有完整細胞核的細胞，在適宜的條件下能夠分化發(fā)育成完整植株的潛在能力。 3.外植體：從植株上切離、用于培養(yǎng)的部分或器官稱為外植體。 4.細胞懸浮培養(yǎng)：將細胞置于液體培養(yǎng)基中進行振蕩培養(yǎng)，稱為懸浮細胞培養(yǎng)。 5.莖尖培養(yǎng)：取植物莖尖組織放入培養(yǎng)液中進行的無菌培養(yǎng)。 6.花藥培養(yǎng)：將花藥接種到培養(yǎng)基上，使其中的花粉發(fā)育成單倍體植株的過程。 7.感

2、受態(tài)：外植體細胞培養(yǎng)初期獲得能被誘導形態(tài)發(fā)生的狀態(tài)稱為感受態(tài)。 8.脫分化：指已分化的細胞在一定條件下恢復分裂機能，轉變成分生組織細胞和形成愈傷組織的過程。 9.再分化：指在植物組織培養(yǎng)中，對處于脫分化狀態(tài)的愈傷組織進行培養(yǎng)，誘導其形成新的植物體的過程。 10.愈傷組織：植物外植體脫分化、經(jīng)過細胞分裂形成的一團無序生長的薄壁細胞。 11.器官發(fā)生：指培養(yǎng)細胞在適宜的誘導培養(yǎng)條件下形成不定芽和不定根等器官，形成完整植物的過程。 12.胚狀體：非合子細胞經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育形成的胚狀結構。13.褐變：指外植體在培養(yǎng)過程中，自身組織從表面培養(yǎng)基釋放褐色物質，以致培養(yǎng)基逐漸變成褐色，外植體也隨之進一步變

3、褐而死亡的現(xiàn)象。 14.消毒：指殺死病原微生物、但不一定能殺死細菌芽孢的方法。 15.滅菌：是指用物理或化學的方法殺滅全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之達到無菌保障水平。 16.接種：按無菌操作技術要求將目的微生物移接到培養(yǎng)基質中的過程。 17.初代培養(yǎng)：指在組織培養(yǎng)過程中，最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。 18.繼代培養(yǎng)：將原有的培養(yǎng)物轉移到新配制的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)的過程稱為繼代培養(yǎng)。 19.形態(tài)建成：外植體在適宜的培養(yǎng)條件下，經(jīng)脫分化、再分化產(chǎn)生芽和根或者形成胚狀體，發(fā)育成苗或完整植株的過程。 20.體細胞胚：又叫胚狀體，是指離體培養(yǎng)條件下沒有經(jīng)過受精過程而形成的胚胎類似物。

4、21.胚培養(yǎng)：對植物成熟胚或幼胚進行離體培養(yǎng)，以獲得發(fā)育正常的植株。 22.花粉培養(yǎng)：將花粉粒接種到培養(yǎng)基上，發(fā)育成單倍體植株的過程。 23.看護培養(yǎng)法：用一塊活躍生長的愈傷組織來看護單個細胞，促使其生長和增殖的方法?？烧T導形成單細胞無性系。24.原生質體：去除細胞壁后的裸露細胞。 25.原生質體融合：指通過人為的方法，使遺傳性狀不同的兩個細胞的原生質體進行融合，借以獲得兼有雙親遺傳性狀的穩(wěn)定重組子的過程。 26.無病毒苗：未被病毒感染，或經(jīng)人工處理去除病毒的植物苗株。 27.人工種子：是將植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生的體細胚包埋在含有營養(yǎng)成分和保護功能的物質中，在適宜的條件下發(fā)芽出苗。 28.種質：是決

5、定生物遺傳性狀、并將遺傳信息從親代傳遞給子代的遺傳物質。(即，一個物種的基因庫)。 29.種質保存：通過自然或人為的技術措施，保護種質資源，使其不至于流失或滅絕。 30.超低溫保存：在低于80的溫度下保存。通常超低溫保存的介質有：超低溫冰箱（-80）、干冰（-79）、液氮（-196），等。 31.體細胞雜交：又稱體細胞融合，指將兩個遺傳性狀不同的體細胞融合成一個體細胞的過程。32.煉苗：煉苗是在保護地育苗的情況下，采取放風、降溫、適當控水等措施對幼苗強行鍛煉的過程，使其定植后能夠迅速適應露地的不良環(huán)境條件，縮短緩苗時間，增強對低溫、大風等的抵抗能力。 33.分子標記：以生物體核酸多態(tài)性為基礎的

6、遺傳標記。如，nDNA、cpDNA、mtDNA標記。 34.RFLP（限制性片段長度多態(tài)性）：使用限制性DNA內切酶消化某個DNA分子后出現(xiàn)的長度多樣性。因其具有種質特異性而常用作遺傳學的分子標記。35遺傳轉化：(植物的遺傳轉化)又稱植物轉基因,是通過某種途徑或技術(物理的、化學的和生物的方法)，將從動物、植物、微生物中分離的甚至是人工合成的目的基因導入植物受體細胞并整合到基因組中，使之在受體細胞中得以正確表達和穩(wěn)定遺傳，并且賦予受體植物一個新的預期性狀的技術體系。 36、Ti質粒:是存在于根癌農(nóng)桿菌中的一種能夠自我復制的共價閉合的dsDNA分子. 37、T-DNA ：（百度）又稱轉移DNA，

7、是農(nóng)桿菌Ti(tumor inducing)或Ri(root inducing)質粒中的一段DNA序列,可以從農(nóng)桿菌中轉移并穩(wěn)定整合到植物核基因組中,已成為植物分子生物學中廣泛應用的遺傳轉化載體。38、選擇標記基因：是指一些具有解除篩選壓力的基因。 39、報告基因：是一種編碼易被檢測的蛋白質或酶的基因。 40、卸甲載體：是相對于天然的毒性Ti質粒而言的。結構上，卸甲載體切除了天然Ti質粒T-DNA上的致瘤基因和冠癭堿合成酶基因等序列之后，失去致瘤能力的Ti質粒，即無毒的Ti質粒載體。41、遺傳標記 ：是指可穩(wěn)定遺傳、能用肉眼明確觀測的差異化個體外部形態(tài)特征。42、SSR：又稱微衛(wèi)星DNA，是一

8、類優(yōu)核心序列（通常是1-5個堿基組成的基序motif進行串聯(lián)重復）和兩端的單拷貝保守側翼序列構成。43植物細胞工程:指以細胞為基本單位在體外條件下進行培養(yǎng)、繁殖，或人為地使細胞某些生物學特性按人們的意愿生產(chǎn)某種物質的過程。44植板率：即形成愈傷組織的原生質體數(shù)量占所培養(yǎng)原生質體總數(shù)的百分比。二.簡答題：1.植物組織培養(yǎng)技術主要包括哪些環(huán)節(jié)。答：（1）培養(yǎng)基的配制及滅菌；（2）外植體的選擇及滅菌；（3）外植體的接種及培養(yǎng)；（4）試管苗的馴化與移栽。2.請就一個植物組織培養(yǎng)室的各功能分區(qū)進行分析說明。答：1、儲藏室 2、洗滌室 3、藥品室 4、培養(yǎng)基準備室 5、接種室 6、培養(yǎng)室 7、顯微觀察室3

9、.簡述植物組織培養(yǎng)的外植體選擇原則。答：取材季節(jié)；取材部位；發(fā)育年齡；材料大小 選擇優(yōu)良的種質選擇健壯的植株選擇最適宜的時期選取適宜的大小。4.如何對外植體進行表面消毒。答：(1) 將需要的材料用水洗干凈。(2) 表面滅菌：用 75%酒精浸 30-60s 左右。(3) 滅菌劑處理：0.1%升汞 10 分鐘、或在 10%漂白粉上清液中浸泡 10-15 分鐘。(4) 用無菌水沖洗 3-5 次左右。5.簡述外植體的褐變及其預防措施。答：（1）褐變是指在組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質，致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)材料也慢慢變褐而死亡的現(xiàn)象。（2）預防措施：選擇適宜的外植體及最佳培養(yǎng)基、

10、連續(xù)轉移、加抗氧化劑、加活性劑。6.論述植物生長調節(jié)物質在組織培養(yǎng)中的作用，并列舉常見的種類。答：（1）生長素：用于誘導細胞的分裂和根的分化，促進細胞分裂和伸長，促進生根等。常見種類有：吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸(IBA)、苯乙酸（PAA）、4-氯-3-吲哚乙酸（4-Cl-IAA）等。（2）細胞分裂素：防止器官衰老，打破休眠，促進果實生長等作用，可誘導芽的產(chǎn)生。常見種類有：激動素（KT）、6-芐基腺嘌呤（BA）、玉米素（ZT）等。（3）赤霉素：刺激體細胞胚生長發(fā)育成小植株，促進少數(shù)植物培養(yǎng)細胞的形態(tài)發(fā)生。常見種類：GA3。（4）多胺和一些生長抑制劑：多胺對有些植物的體細胞胚發(fā)生有促進作用。部

11、分生長抑制劑對某些植物的試管苗增殖有促進作用。7.植物生長物質如何調控外植體形態(tài)發(fā)生。答：一般使用的濃度為0.1-10 mg/L。要注意種類和濃度，特別是生長素和細胞分裂素的比值。高，利于根的形成；適中，利于愈傷組織形成；低，利于芽的形成8.植物組織培養(yǎng)后，外植體發(fā)育成形成植株的途徑有哪些。答：(1) 外植體愈傷組織根、芽試管苗 同時長芽和根 先長芽，再長根 先長根，再長芽 (2) 外植體胚狀體試管苗 (3) 外植體根、芽試管苗。9.簡述熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫病毒的原理。答：病毒和宿主對高溫的耐受性有差異，在植物受到高溫傷害前殺死病毒或使病毒活性有效鈍化。10.草莓無毒苗的繁殖程序分哪幾步。答：

12、匍匐莖尖外植體消毒莖尖剝離莖尖培養(yǎng)不定芽增殖誘導生根煉苗移植脫毒效果檢測脫毒苗繁殖。11.目前鑒定脫毒苗脫毒效果的方法有哪些答：1、指示植物鑒定2、血清學技術3、電鏡技術4、核酸雜交及PCR技術12.闡述試管苗煉苗、移栽、管理的一般技術過程。答：1.外植體接種，初代培養(yǎng) 2.芽體誘導和增殖 3.誘導生根成苗 4.煉苗移栽13.什么叫污染，污染的原因有哪些，簡述預防污染的措施。答：（1）污染：外來物質或能量的作用，導致生物體或環(huán)境產(chǎn)生不良效應的現(xiàn)象。（2）污染原因：從病源分面主要有細菌和真菌和兩大類，一是從環(huán)境中引入，二十操作過程中帶入。 （3）預防措施：(1)減少或防止材料帶菌(2)外植體滅菌

13、要徹底 (3)玻璃器皿和金屬器皿的滅菌 (4)布質制品的滅菌(5)無菌室的消毒(6)操作人員一定要嚴格按照無菌 操作的程序進行接種。14.簡述花粉培養(yǎng)產(chǎn)生植株的可能倍性及其原因。答：由花藥培養(yǎng)產(chǎn)生的花粉植株不僅有單倍體，還有二倍體、三倍體及非整倍體。不同倍性花粉植株的來源是：花粉細胞核內發(fā)生有絲分裂，或畸變可產(chǎn)生二倍體、四倍體。花粉細胞核分裂并出現(xiàn)核融合，可產(chǎn)生三倍體、五倍體?；ㄋ幈诨蚧ㄋ巸炔拷M織（濃氈層）細胞同時發(fā)育，產(chǎn)生二倍體。植物種類、接種花藥的花粉發(fā)育時期、培養(yǎng)基中生長調節(jié)劑種類與濃度均可影響花粉植株的倍性。而花粉植株的發(fā)生途徑、愈傷組織繼代培養(yǎng)時間長短的影響尤為顯著。一般有花粉胚狀體

14、直接成苗或由第二代愈傷組織分化成苗，單倍體頻率高。此外，隨著愈傷組織繼代次數(shù)、繼代時間的增加，二倍體的比例也會增加。15.接種后離體培養(yǎng)物對光、溫、濕等環(huán)境條件的要求。答：(1) 光照： 愈傷組織的誘導不需光照或弱光， 器官分化需要光照， 一般 1216h/d， 光照度 10005000lx。 (2) 溫度：一般 25±2 (3) 濕度：培養(yǎng)室內的濕度要求保持 7080的相對濕度。16.植物組織培養(yǎng)主要應用于哪些方面。答：（一）脫毒及快速繁殖： 1.無病毒苗培育應用 2.組織培養(yǎng)快速繁殖 （二）育種研究1、單倍體育種 2、胚培養(yǎng)3、單細胞培養(yǎng)突變體的選擇與應用 4、體細胞雜交育種 5

15、、轉基因育種 （三）藥物及其它生物制劑的工業(yè)化生產(chǎn) 1、通過組織培養(yǎng)藥用植物 2、利用細胞培養(yǎng)的方法,獲得次生代謝產(chǎn)物,直接生產(chǎn)藥物。（四）建立低溫儲存及種質庫，保護物種。17.無菌操作時應注意哪些事項。答：(1) 在接種 4h 前用甲醛熏蒸接種室； (2) 在接種前 15-20min，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈； (3) 接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，并換穿拖鞋等； (4) 上工作臺后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后 70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺面； (5) 接種工具蘸 95%酒精，灼燒； (6) 接種時將試管斜著，使試管口在酒精燈火焰上轉動，灼燒數(shù)秒鐘。接

16、完種后，將管口在火焰上再灼 燒數(shù)秒鐘。 (7) 接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等； (8) 接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺。18.如何配制組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基。答：(1） 配制母液： 一般母液配成比所需濃度高 10-100 倍的濃縮液， 配制時可分別配成大量元素、 微量元素、 鐵鹽、有機物和激素類等。 (2) 配制方法： 將母液按順序擺放 取適量的蒸餾水入容器 按需要量依次取母液及生長調節(jié)物質 加入蔗糖（30g/L）溶解 定容 調 PH 值 分裝培養(yǎng)瓶，并加瓊脂(6-10g/L)，封口 高壓滅菌接種19.怎樣進行培養(yǎng)基的高壓濕熱滅菌。答：（1）首先將內層鍋取出，再向

17、外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。（2）放回內層鍋，并裝入待滅菌物品。不要裝的太擠，三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸。（3）加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內，蓋好蓋子，以防漏氣。（4）用電爐或煤氣爐加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內溫度升到所需溫度時，控制熱源，維持溫度至所需時間。（5）滅菌所需時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至零時，打開排氣閥，打開蓋子，取出滅菌物品。（6）將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37溫箱培養(yǎng)24h，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。

18、20.原生質體分離的方法。答：1）機械分離法 先將細胞放在高滲溶液中預處理，待細胞發(fā)生輕微質壁分離、原生質體收縮成球形，再用機械法磨碎細胞，從傷口處可以釋放出完整的原生質體。優(yōu)點： 可避免酶制劑對原生質體的破壞作用。缺點： 獲得完整的原生質體的數(shù)量比較少。2）酶解分離法 利用酶的作用去除細胞壁。常用的細胞壁降解酶種類：纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶等。優(yōu)點： 可獲得大量的原生質體。缺點： 酶制劑中含有核酸酶、蛋白酶、過氧化物酶及酚類物質，影響原生質體的活力。 21.原生質體融合有哪幾種主要方法。答：鹽類融合法；高Ca2+和高PH值融合；聚乙二醇（PEG）融合法；PEG與高Ca2+和高PH值結合融

19、合法；電融合法。22.什么是基因工程?；蚬こ痰幕静襟E。答：（1）基因工程：利用人工的方法，把生物的遺傳物質在體外進行切割、拼接和重組，獲得重組DNA分子，然后導入宿主細胞或個體，使受體的遺傳特性得到修飾或改變的過程。（2）基本步驟：1.目的基因（或片段）的獲??；2.重組載體的構建；3. 將目的基因導入受體細胞；4. 目的基因的檢測與鑒定。23.植物轉基因常用的載體是什么，有哪些主要結構元件。答：克隆載體、表達載體、測序載體、質粒載體、噬菌體載體、人工染色體載體 1）具有復制起點2）有若干個限制酶識別位點3）具備合適的篩選標記4）具備合適的拷貝數(shù)目5）分子量相對較小6）在細胞內穩(wěn)定性高7）易

20、分離純化作為克隆載體：（1）較高的拷貝數(shù)；（2）具有復制起點；（3）具有若干限制酶識別位點；（4）帶有選擇標記；（5）較小的相對分子質量。作為表達載體的條件：（目的基因能在宿主細胞表達）(1) 自主復制；(2) 克隆位點和篩選標記；(3) 可受誘導調控的啟動子；(4) 具有終止子；(5) 具有翻譯起始信號。24.外源基因導入植物受體的方法有哪些。答：（1）生物介導，如農(nóng)桿菌等介導的基因轉移；（2）物理方法：基因槍法、電擊法、顯微注射法；（3）化學方法：PEG誘導法、脂質體導入法。25.什么是分子標記。試列舉幾種常用標記的名稱。答：分子標記：也稱DNA分子標記。本質上是指能反映生物個體或種群間基

21、因組中某種差異特征的DNA片段，是 DNA 水平上遺傳多態(tài)性的直接反映。以生物體核酸多態(tài)性為基礎的遺傳標記。如，nDNA、cpDNA、mtDNA標記。RFLP、RAPD、 AFLP、 ISSR、 SSR、SRAP、STS、SNP。26.RAPD、RFLP、SSR、ISSR、AFLP、SNP等標記的中文名稱及其原理。答：1.RAPD隨機擴增多態(tài)性DNA（random amplification polymorphism DNA）原理：運用 PCR 技術，以10 nt左右的隨機寡核苷酸單一引物，擴增模板 DNA中引物反向結合位點之間適宜大小的片段，電泳分離，檢測 DNA 序列多態(tài)性。 2.RFLP

22、 限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism）原理：用限制性內切酶消化后的不同個體的基因組DNA中，含有與探針序列同源的酶切片段在數(shù)量、大小(長度)上的差異。這種差異，是由于堿基替換、插入、缺失或重復造成某種限制酶酶切位點的增加或喪失以及酶切位點間DNA片段變化所引起。 3.SSR簡單重復序列（simple sequence repeats）原理：SSR的兩翼，多是相對保守的單拷貝序列。利用SSR兩翼序列設計一對特異引物，然后PCR擴增單個SSR位點，進行 SSLP (簡單序列長度多態(tài)性) 分析。SSR的多態(tài)性，主要因為串聯(lián)重復的次數(shù)

23、是高度可變的。 4.ISSR簡單序列重復間區(qū)（inter- simple sequence repeats）原理利用真核生物基因組廣泛存在的簡單重復序列（SSR）來設計單一通用 PCR引物，擴增位于反向排列的SSR之間的不太大的單拷貝序列，通過電泳檢測出DNA的多態(tài)性。 5.AFLP擴增片斷長度多態(tài)性 （amplified fragment length polymerphism）原理AFLP標記，是基于PCR技術，選擇性擴增基因組DNA的限制性酶切片段，以擴增條帶數(shù)量及大小反映基因組DNA的多態(tài)性。 6.SNP單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism）原理

24、主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異（轉換、顛換）所引起的等位基因序列多態(tài)性。這種差異的發(fā)現(xiàn)，建立在基因組大量測序或基因芯片基礎之上。屬于第三代分子標記技術。3 填空題二、填空 1物理滅菌包括: 高溫高壓滅菌 ; 干熱滅菌 ; 射線照射滅菌 和 過濾滅菌 。2任意寫出三種常用的培養(yǎng)基： MS, B5, KM8P, N6等 3胚培養(yǎng)的重要用途是克服 種間雜交的不親和性 ,獲得種間或屬間雜種。4外植體脫分化形成愈傷組織一般經(jīng)歷3個時期，分別是： 啟動期 ；分裂期 和 形成期 。5胚狀體具有兩個特點： 二極性 和 與母體植物或外植體的維管束系統(tǒng)無直接連系 。6逆境處理對某些植物的小孢子胚胎發(fā)生具

25、有誘導作用,任意寫出4種常用的逆境處理方式: 饑餓處理，高溫處理，低溫處理，射線，秋水仙素，重金屬脅迫等 7分離原生質體時果膠酶的作用是 降解胞間聯(lián)絲 。8最常用的誘導細胞融合的方式是 PEG 和 電誘導 融合法。9目前聚合酶鏈式反應常用到的DNA聚合酶是 Taq 酶 。10利用分子標記輔助選擇的重要條件是目標基因與分子標記存在 緊密連鎖（或共分離） 關系。11種植轉基因作物面積最大的4個國家分別是 美國 ； 阿根廷 ； 加拿大 和 中國 。13培養(yǎng)基的成分可以分為三大類，分別是： 無機營養(yǎng)物 ； 有機營養(yǎng)物 和植物生長調節(jié)物質 。4培養(yǎng)條件下花粉的分裂增殖方式有4種類型，分別是： 營養(yǎng)細胞發(fā)

26、育途徑 ；生殖細胞發(fā)育途徑 ； 營養(yǎng)細胞與生殖細胞并進途徑 和 花粉均等分裂途徑 。15分離原生質體時纖維素酶的作用是 降解細胞壁的纖維素 。16幼胚培養(yǎng)可以挽救種間雜種胚,但當胚體很小時,往往采用 胚珠 培養(yǎng)獲得雜種胚。17常用的原生質體培養(yǎng)方法有： 液體淺層培養(yǎng)法 ； 固體平板培養(yǎng)法 和 液固雙層培養(yǎng)法 。18Ti質粒的T-DNA致瘤基因主要包括兩類基因，分別是 細胞分裂素合成 和 生長素合成 基因。19目前種植面積最大的4種轉基因作物是 大豆 ； 棉花 ； 油菜 和 玉米 。20在遺傳轉化中，目前廣泛使用的選擇標記是 NPTII 基因。21聚合酶鏈式反應（PCR）一般分變性、 復性 和 延伸 。22隨機擴增多態(tài)性（RAP