薄層色譜法分離菠菜葉色素

1、薄層色譜法分離菠菜葉色素2012/11/27 1.掌握薄層色譜法的原理、操作方法；掌握薄層色譜法的原理、操作方法； 2.利用薄層色譜法對菠菜葉色素進行分離。利用薄層色譜法對菠菜葉色素進行分離。一、實驗目的 薄層色譜法薄層色譜法 薄層色譜法是一種微量、快速和簡單的色譜方法，薄層色譜法是一種微量、快速和簡單的色譜方法，它不僅是一種定性定量分析的重要手段，還是一種它不僅是一種定性定量分析的重要手段，還是一種有效的分離提純方法，在有機化學、生物化學和制有效的分離提純方法，在有機化學、生物化學和制備分離領域具有廣泛應用。備分離領域具有廣泛應用。 特點：設備簡單，操作方便迅速，分離效率高，有特點：設備簡單

2、，操作方便迅速，分離效率高，有較高的靈敏度和靈活性，既適合分離微量樣品，又較高的靈敏度和靈活性，既適合分離微量樣品，又適合于大型制備色譜。適合于大型制備色譜。二、實驗原理 色譜有三種形式：吸附色譜、分配色譜和離子交換色譜有三種形式：吸附色譜、分配色譜和離子交換色譜。應用較為廣泛的是吸附薄層色譜，即固液吸色譜。應用較為廣泛的是吸附薄層色譜，即固液吸附薄層色譜，其原理是附薄層色譜，其原理是化合物在吸附劑和展開劑之化合物在吸附劑和展開劑之間進行反復的吸附和解吸附，吸附能力較弱的溶質間進行反復的吸附和解吸附，吸附能力較弱的溶質首先被展開劑解吸下來，隨展開劑向前移動較快，首先被展開劑解吸下來，隨展開劑向

3、前移動較快，而吸附能力較強的溶質解析較慢，隨展開劑移動較而吸附能力較強的溶質解析較慢，隨展開劑移動較慢，從而達到分離的目的。慢，從而達到分離的目的。二、實驗原理 R甲甲 = a/cR乙乙 = b/cRf值測量方法值測量方法二、實驗原理 1. 吸附劑的選擇和薄層板的制備吸附劑的選擇和薄層板的制備 2. 薄層板的活化薄層板的活化 硅膠板，硅膠板，105110烘箱中活化烘箱中活化0.5h。 3. 點樣點樣 在距薄層板一端在距薄層板一端約約1cm處用鉛筆畫起始線；配置樣品溶液；毛處用鉛筆畫起始線；配置樣品溶液；毛細管點樣，斑點直徑不要太大。細管點樣，斑點直徑不要太大。 4. 展開展開 展開劑的選擇原則

4、：展開劑的選擇原則： I. 展開劑的極性應該對分離的物質有一展開劑的極性應該對分離的物質有一 定的解吸能力，但不定的解吸能力，但不能太大，比被分離物質的極性略??；能太大，比被分離物質的極性略??； II. 展開劑對被分離的物質有一定的溶解度。展開劑對被分離的物質有一定的溶解度。 常用混合溶劑：石油醚常用混合溶劑：石油醚乙醚、石油醚乙醚、石油醚乙酸乙酯、環(huán)己烷乙酸乙酯、環(huán)己烷乙酸乙酯等。乙酸乙酯等。 5. 顯色顯色 紫外燈顯色、碘薰顯色、顯色劑顯色。紫外燈顯色、碘薰顯色、顯色劑顯色。三、操作方法 活化硅膠板、活化硅膠板、層析缸層析缸、玻璃棒、研缽；、玻璃棒、研缽； 95%乙醇、石油醚（乙醇、石油醚

5、（6090 ）、丙酮、菠菜葉。）、丙酮、菠菜葉。四、儀器與試劑直立式層析缸示意圖直立式層析缸示意圖 1. 硅膠板的活化硅膠板的活化 于烘箱中于烘箱中105110活化活化0.5h。 2. 菠菜葉綠素的提取菠菜葉綠素的提取 將將12片新鮮菠菜葉剪碎放于研缽中研磨，然后加入片新鮮菠菜葉剪碎放于研缽中研磨，然后加入20ml石油石油醚醚乙醇（乙醇（1:1）混合溶液繼續(xù)研磨）混合溶液繼續(xù)研磨3min，用吸管將萃取液轉，用吸管將萃取液轉移至分液漏斗中，用等體積的水洗滌兩次，將上層有機相轉移移至分液漏斗中，用等體積的水洗滌兩次，將上層有機相轉移至干燥的小錐形瓶中，用無水硫酸鎂干燥。至干燥的小錐形瓶中，用無水硫

6、酸鎂干燥。 3.分離與鑒定分離與鑒定 在經活化的硅膠板一端約在經活化的硅膠板一端約1cm 處，用鉛筆輕輕劃上起始線，用處，用鉛筆輕輕劃上起始線，用管口平整的毛細管吸取提取液點樣，斑點直徑約為管口平整的毛細管吸取提取液點樣，斑點直徑約為2至至3mm。在在層析缸層析缸中加入約深中加入約深0.5cm的展開劑（的展開劑（丙酮丙酮:石油醚石油醚=1:2），將），將點好樣的硅膠板放入其中進行展開，當展開劑前沿爬至上端約點好樣的硅膠板放入其中進行展開，當展開劑前沿爬至上端約1cm處時，取出硅膠板并立即用鉛筆記下溶劑前沿位置，晾干處時，取出硅膠板并立即用鉛筆記下溶劑前沿位置，晾干后計算各斑點的后計算各斑點的R

7、f值。值。五、實驗步驟 4. 菠菜葉色素的分離菠菜葉色素的分離 從上至下依次為：從上至下依次為：-胡蘿卜素、去鎂葉綠素胡蘿卜素、去鎂葉綠素a、葉綠、葉綠素素a、葉綠素、葉綠素b、葉黃素、紫黃質、新黃質、點樣點、葉黃素、紫黃質、新黃質、點樣點。五、實驗步驟1. 1. 菠菜葉不可研得太爛而成糊狀，否則會造成分離困菠菜葉不可研得太爛而成糊狀，否則會造成分離困 難；難；2. 2. 用水洗滌萃取液時，不要劇烈振蕩，否則容易乳化；用水洗滌萃取液時，不要劇烈振蕩，否則容易乳化；3. 3. 于于層析缸層析缸中加入展開劑后可搖動幾下，令其蒸汽達中加入展開劑后可搖動幾下，令其蒸汽達到飽和；到飽和；4. 4. 點樣時不要點破硅膠層表面，點樣完畢后應先令溶點樣時不要點破硅膠層表面，點樣完畢后應先令溶劑揮發(fā)后再進行展開。劑揮發(fā)后再進行展開。六、注意事項七、思考題 1.1.怎樣選擇合適的展開劑？展開劑極性太大或是太怎樣選擇合適的展開劑？展開劑極性太大或是太小會有什么影響？小會有什么影響？ 2.2.為什么樣品斑點直