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1、培養(yǎng)基母液的配制(一) 激素母液由于多數(shù)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)難溶于水,因此配法各不相同,激素母液可以在24冰箱中保存。在配制藥品前,應(yīng)準(zhǔn)備好一定容積的小燒杯、玻璃棒,用純凈水沖洗干凈方可使用:1、 IAA、IBA、GA3、ZT可先用少量95%酒精溶解,再加水定容,搖勻后貯于試劑瓶中,貼上標(biāo)簽。2、 2,4-D、KT、可用少量10%的Noah溶解,再加水定容。3、 6-BA可用少量1mol/LHCl溶解后,再加水定容。4、 NAA可溶于熱水或少量95%酒精中,再加水定容至一定體積。5、1mg/ml的2.4-D的配制:稱取0.1g2,4-D,用少量1mol/LNaOH溶解,然后定容到100ml容量瓶中。6
2、、1mg/ml的6BA的配制:稱取0.1g6-BA,用少量1mol/LNaOH溶解,然后定容到100ml容量瓶中。7、1mg/ml的NAA的配制:稱取0.1gNAA,用少量95%酒精助溶,然后定容到100ml容量瓶中。8、1mol/L的HCl的配制:量取83.3ml鹽酸加水稀釋定容至1L。(一般、組培室用量少,配制500ml即可,即:稱取鹽酸41.65ml稀釋定容至500ml。配制鹽酸時(shí)。需要帶口罩、戴手套。)9、10%的NaOH的配制:稱取10gNaOH,加少量純凈水溶解,然后定容到100ml容量瓶中。10、HgCl2 的配制:稱量1g的HgCl2,加熱水后進(jìn)行溶解定容至1L。二、培養(yǎng)基配制
3、配錯(cuò)培養(yǎng)基造成的危害比組培技術(shù)中其他任何失誤都大。因此,配制培養(yǎng)基和稱取其他成分必須絕對(duì)小心。為了降低配錯(cuò)培養(yǎng)基的風(fēng)險(xiǎn),最好準(zhǔn)備一張紙,詳細(xì)地寫出配制培養(yǎng)基過(guò)程中所需的成分和配置步驟。每配完一種成分或配完一種母液,劃掉相應(yīng)的記錄。1、一般而言,分化配方的配制:除萱草瓊脂為5.5g/L外,其它植物為瓊脂5g/L。白糖為30g/L。母液粉為4.74g/L。用自己配制的母液配培養(yǎng)基時(shí),大量母液(1號(hào))50ml/L,微量(25號(hào)為5 ml/L)。2、配制½的生根培養(yǎng)基,是大量母液(1號(hào))減半為25ml/L,微量不變(25號(hào)為5 ml/L)。生根配方中,萱草、紅掌白糖為25g/L,其他不變。配制培養(yǎng)基步驟:1、稱量母液粉加入少量水溶解放入瓊脂、糖溶解水開后關(guān)火混合均勻定容加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)(激素)調(diào)pH值選用干凈瓶子分裝培養(yǎng)基(每瓶約30ml)培養(yǎng)基凝固培養(yǎng)基封口培養(yǎng)基高壓滅菌冷卻備用2、加入一定量的純凈水放入瓊脂、糖溶解水開后關(guān)火加大量元素及微量元
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