人肺炎衣原體抗體Cpn-Ab酶聯(lián)免疫分析

1、人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原 -抗體-抗原復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值)，與 CUTOF

2、F值相比較，從而判定 標本中人肺炎衣原體抗體 (Cpn-Ab)的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml X1 瓶7終止液6ml X1 瓶2酶標試劑6ml X1 瓶8陽性對照0.5ml X1 瓶3酶標包被板12孔$條9陰性對照0.5ml X1 瓶4樣品稀釋液6ml X1 瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml X1 瓶11圭寸板膜2張6顯色劑B液6ml X1/瓶12密封袋1個標本要求1 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20 C保存，但應避免反復凍融2 .不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活

3、性。操作步驟1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照 2孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50卩。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40卩,然后再加待測樣品10卩。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3. 溫育：用封板膜封板后置37C溫育30分鐘。4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑50 U，空白孔除外。7. 溫育：操

4、作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 4，再加入顯色劑 B50也輕輕震蕩混勻，37C避光顯色 15分鐘.10終止：每孔加終止液50 4，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):準備試劑*樣品和標準品加入準備好的樣品和標準品，37反應30分鐘洗板5次，加入酶標試劑+ 37C反應30分鐘洗板5次，加入顯色液A、B, 379顯色10分鐘加入終止液I15分鐘Z內(nèi)讀0D值計算計算和結(jié)果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值 羽.00；陰性對照平均值 切.10 臨界

5、值（CUT OFF ）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品 OD值臨界值（CUT OFF ）者為肺炎衣原體抗體（Cpn-Ab）陰性 陽性判定：樣品 OD值端界值（CUT OFF ）者為肺炎衣原體抗體（Cpn-Ab）陽性注意事項1 操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 4封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請避光保存。 6試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為63