乙二醇法復(fù)制腎結(jié)石模型給藥途徑和方法的比較

1、    乙二醇法復(fù)制腎結(jié)石模型給藥途徑和方法的比較        主題詞腎結(jié)石； 投藥，口服；動物，實驗中分類號Q95-33文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1000-4718(2000)04-0381-02 MeSHKidney calices; Administration, oral; Animals, laboratory乙二醇法是在動物身上復(fù)制泌尿系統(tǒng)結(jié)石模型最常用的方法，也是新藥評審中規(guī)定選用的方法之一1。該方法的原理是在草酸代謝通路上加大中間代謝產(chǎn)物乙二醇的量，導(dǎo)致動物體內(nèi)草

2、酸含量增加而形成草酸鈣結(jié)石2。因此法操作簡單，成石率高，已被廣泛應(yīng)用于防治泌尿系結(jié)石藥物的藥理學(xué)、藥效學(xué)研究。常用的乙二醇法復(fù)制腎結(jié)石模型的給藥途徑有3種：（1）將乙二醇加入動物飲水中自由攝?。唬?）將乙二醇加入動物飼料中自由攝??；（3）將乙二醇按動物體重灌胃。由于（2）需制作特殊飼料操作起來較麻煩，為達(dá)到滿意的成石率，選擇最佳的給液途徑和方法，我們用56只SD雄性大鼠，分別采用2種給液途徑、5種給液方法進(jìn)行方法學(xué)的比較。材料和方法一、 材料（一） 藥品成石液用1%乙二醇（廣州化學(xué)試劑廠）+1%氯化銨（廣州臺山化工廠）配制而成。（二） 主要實驗儀器ZS 83-1型內(nèi)切式組織勻漿器（浙江浙西機(jī)械

3、廠）；721型分光光度計（上海第三分析儀器廠）；日立180-80塞曼原子吸收分光光度計（日本）。（三）動物雄性SD大鼠56只，體重(212.4±40.4) g，由第一軍醫(yī)大學(xué)實驗動物所提供（動物合格證：粵檢證字第98A057號）。二、 方法（一） 實驗分組及給液方法雄性SD大鼠56只，隨機(jī)分為6組。A組6只（正常對照組），正常飲水4周；B組10只（自由攝取組），不限量自由攝取成石液代替正常飲水，給3周；C組10只（定量攝取+定量補(bǔ)水組），每只給成石液10 mL/d，定量自由攝取完后定量補(bǔ)水每只20 mL/d，給3周；D組10只（定量攝取+不限量補(bǔ)水組），每只給成石液10 mL/d，定

4、量自由攝取完后正常飲水，不限量，給3周；E組10只（灌胃+定量補(bǔ)水組）， 成石液1.5 mL/100g體重，1次/d 灌胃后定量補(bǔ)水每只20 mL/d，給4周；F組10只（灌胃+不限量補(bǔ)水組）,成石液1.5 mL/100g體重，1次/d 灌胃后正常飲水，不限量，給4周。（二）實驗方法1. 腎草酸、腎鈣、血清鈣含量測定：實驗結(jié)束時頸動脈取血，制備血清；處死動物取腎臟，2/3左腎稱重后，加入1mol/L HCl 10 mL浸泡4h后用內(nèi)切式組織勻漿器制備組織勻漿，3000 r/min離心20min，取上清液用變色酸比色法測草酸含量3；1/3左腎經(jīng)烘箱干燥后稱重，用火焰原子吸收法測定腎鈣和血清鈣含量

5、。2. 腎組織學(xué)檢查：取右腎常規(guī)切片，HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察草酸鈣結(jié)晶情況。判定標(biāo)準(zhǔn)如下：（0）無結(jié)晶；（1）腎皮質(zhì)內(nèi)結(jié)晶；（2）腎髓質(zhì)內(nèi)結(jié)晶；（3）腎乳頭內(nèi)結(jié)晶；（4）腎盂內(nèi)結(jié)晶4。結(jié)果一、 大鼠成石率、死亡率、給成石液前后體重變化的比較實驗結(jié)果A、B、C、D、E、F組的成石率分別為0、100%、67%、60%、10%、0；死亡率分別為0、70%、10%、0、10%、10%；B組和F組大鼠體重顯著低于A組（P0.01,P0.05），結(jié)果見表1。二、腎組織草酸和鈣含量及血清鈣含量的比較實驗結(jié)果顯示，B組動物腎組織草酸和鈣含量均明顯高于A組( P0.05,P0.01）；C組、F組動物腎組織

6、草酸含量以及C組、D組腎組織鈣含量也略高于A組，但無顯著；E組血清鈣含量顯著高于A組，其余各組與A組差異無顯著，結(jié)果見表2。表 1 成石液對SD大鼠成石率、死亡率及體重變化的影響Tab 1Effect of the incidence of calculus formation on the mortality and the change with body weight in SD rat （<"01.jpg (732 字節(jié))" src="/med/cano/201003/20100309193603285.jpg" 15 17>

7、7;s）Group nDeath (mortality) Calculus Formation(incidence) Body weightPre-treatment(g)Post-treatment(g)A60( 0 )0( 0 )230±54297±51B107(70%)3(100%)219±20171±13*C101(10%)6( 67%)214±20262±28D100( 0 )6( 60%)208±19275±15E101(10%)1( 10%)216±20302±21F101(10%

8、)0( 0 )217±41244±31*     * P0.05, *P0.01,vsgroup A 表 2 成石液對SD大鼠腎組織草酸和鈣含量及血清鈣含量的影響Tab 2 Effect of the incidence of calculus formation on concentration of oxalate and calcium in renal tissue and serum calcium in SD rat(<"01.jpg (732 字節(jié))" src="/med/cano/2

9、01003/20100309193603285.jpg" 15 17>±s)GroupnRenal tissueSerum calcium（mg/L）Oxalate（mg/g）Calcium（mg/kg） A60.38±0.13237± 45 98.6±7.3B30.63±0.12*1196±623*92.3±1.7C90.57±0.20450±41392.0±5.7 D100.36±0.22455±31997.4±6.4 E90.30±0

10、.23214± 23105.8±4.2*F90.65±0.07*221± 37100.6±3.5     * P0.05, * P0.01, vs group A 三、腎組織學(xué)檢查HE染色切片可見，A組腎組織無結(jié)晶形成，B組3例動物腎組織均見多灶性結(jié)晶形成亦有集結(jié)，主要分布于腎皮質(zhì)、髓質(zhì)和乳頭，腎組織內(nèi)炎性損害嚴(yán)重；C組動物有6例形成結(jié)晶，主要分布于腎乳頭及髓質(zhì)間，腎皮質(zhì)有輕度炎性損害；D組6例有少量結(jié)晶形成，腎組織內(nèi)炎性損害輕度；E組僅見1例有1小灶結(jié)晶形成；F組未見結(jié)晶，結(jié)果見表3。表 3 成石液對S

11、D大鼠腎組織學(xué)的影響Tab 3 Effect of the incidence of calculus formationon kidney histological of SD ratGradeABCDEF06034991000010200 210030214004013100     討論一、 兩種給成石液途徑的比較灌胃給液與自由攝取給液相比，有用量準(zhǔn)確且恒定的優(yōu)點(diǎn)，可避免自由攝取給液時不易控制乙二醇攝入量的缺陷，但該法有一定的技術(shù)難度，需具備熟練的操作技巧，且工作量大，不如自由攝取法方便。 二、5種給液方法的比較不限量自由攝取成石液代替飲水（B組）

12、，該法復(fù)制的模型成石率雖達(dá)到100%，但死亡率也高達(dá)70%，從病理檢查及腎組織草酸、鈣含量結(jié)果分析，造成高死亡率的原因一方面是因攝入液量過大致大鼠腎組織廣泛炎癥引起急性腎功能衰竭，另方面也因成石液長時間刺激胃腸道影響動物食欲，致動物體質(zhì)明顯減輕；定量攝取+補(bǔ)水法（C組、D組）因控制了成石液的攝入量又補(bǔ)充了水，動物體質(zhì)普遍良好，因而大大降低了死亡率（10%，0），而該法定量補(bǔ)水（C組）與不限量補(bǔ)水（D組）相比，雖成石率兩者差異不顯著，但前者因飲水量的控制，使尿液濃縮，更有利于結(jié)石的形成，腎組織鈣含量也高于后者；兩種灌胃給液法復(fù)制的模型成石率不理想，可能是因為本實驗設(shè)計成石液的量不夠，但提高成石液濃度時溶液易出現(xiàn)渾濁，如果加大劑量又將受單次灌胃給液容積的限制，需增加給液次數(shù)更增加了工作量。通過本實驗的比較， 我們認(rèn)為用乙二醇法復(fù)制大鼠腎結(jié)石模型，定量自由攝取給液并適量補(bǔ)水，能降低死亡率，提高成石率，減少工作量?；痦椖?廣東省自然科學(xué)基金資助鐘玲（暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室， 廣東 廣州 510632）熊愛華（暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室， 廣東 廣州 510632）楊延秀（暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室， 廣東 廣州 510632）蘇澤軒（暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科）參 考 文 獻(xiàn)1中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局主編.新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))M.