NOD論文：NODToll樣受體細胞因子協(xié)同作用

1、NOD文：NOD Toll 樣受體細胞因子協(xié)同作用【中文摘要】真菌性角膜潰瘍?yōu)槿蜃钪饕闹旅ば匝鄄?，高發(fā) 于以農(nóng)業(yè)為主的發(fā)展中國家，我國是真菌性角膜潰瘍的高發(fā)地區(qū)，近 幾年來真菌性角膜潰瘍的報道研究越來越多，相關(guān)的臨床流行病學(xué)調(diào) 查顯示其發(fā)病率已上升到感染性角膜病的首位，因此,真菌性角膜潰 瘍的防治課題已成為我國致盲性眼疾的重要臨床課題。通常情況下，真菌感染時很少侵犯正常角膜，但當(dāng)角膜上皮組織被破壞，角膜基質(zhì) 層直接與真菌接觸時，真菌就能通過破損處破壞角膜上皮下層以及基 質(zhì)層，導(dǎo)致真菌性角膜潰瘍。因此,角膜上皮和基質(zhì)細胞在激活角膜的 固有免疫反應(yīng)和抵抗真菌入侵中有重要作用。眾多研究已經(jīng)證明了

2、 TLR 是人體固有免疫系統(tǒng)激活的關(guān)鍵因子，位于細胞膜的 TLR 識別來 自細胞外部的病原體。但是病原微生體為了避免被識別，有其他侵入 和通過上皮細胞層的方式，但是正常情況下真菌體內(nèi)的感染率并不高，這說明在避過 TLR 的識別后,機體一定還有其他的方式來識別入侵真 菌。NODg體蛋白家族能識別細胞內(nèi)的危險信號，啟動固有免疫系統(tǒng)，它代明了細胞內(nèi)同樣有防御監(jiān)測手段。NODS體是目前的研究熱點之 一,但是關(guān)于它在角膜細胞中的表達，在抗真菌過程中的作用以及它 與 TLR 的相互關(guān)系目前鮮有報道。研究細胞內(nèi)模式識別受體核苷酸結(jié) 合的寡聚結(jié)構(gòu)域 NODS體 NOD1 NOD2 在角膜細胞中的表達及其激活

3、角膜細胞固有免疫過程中的作用，并探討它與 Toll 樣受體 TLR4 在此 過程中的相互關(guān)系。方法：體外培養(yǎng)永生化人角膜上皮細胞（THCE） 和永生化人角膜基質(zhì)細胞（THSF）,實驗細胞分為 6 組,分別更換 DMEM培養(yǎng)液、LPS 刺激液（1 卩 g/ml）、DAP 刺激液（10 卩 g/ml）、MDP 刺激液 （10 卩 g/ml）、LPS（1 卩 g/ml）和 DAP（10 g/ml）聯(lián)合刺激液、LPS （1 卩 g/ml） 和 MDP （1 g/ml） 聯(lián)合刺激液，于刺激后 1h,3h,6h,12h,24h分 別收取細胞上清以及細胞。用 ELISA 法測定上清中的 TNF-a和 IL-

4、6 的分泌，用實時 RT-PCR 僉測角膜細胞中 N0D1 NOD 卻 TLR4 的 mRNA 表達，以及抗菌肽 hBD2 和 LL37 的 mRNA 勺表達。應(yīng)用 SPSS13.0 統(tǒng)計 分析軟件,數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組內(nèi)比較采用 t 檢驗,各組間 的比較采用方差分析,P0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：在相應(yīng) 配體刺激下角膜細胞中 NOD1NOD 的表達呈時間依賴性上調(diào)，并能引 起細胞培養(yǎng)物上清液中 IL-6 和 TNF-a的分泌增多，以及抗菌肽 LL37 和 hBD2 的表達增加。聯(lián)合刺激組比單獨刺激組的表達量明顯增 高,TLR4 和 NOD 受體間表現(xiàn)出協(xié)同作用。結(jié)論：這些結(jié)

5、果提示角膜細 胞中的 NOD1NOD2W TLR4這兩種胞內(nèi)外模式識別受體介導(dǎo)的固有免 疫信號傳導(dǎo)通路參與了角膜上皮細胞的固有免疫反應(yīng)，在角膜上皮細胞的抗真菌反應(yīng)中起到一定作用,NOD1 NOD 狂角膜細胞中表達并能 激活其固有免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)其分泌促炎癥細胞因子。NOD 于 TLR4 在 激活角膜細胞固有免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)其分泌促炎癥細胞因子的過程中具 有協(xié)同作用，為今后免疫治療提供了新的思路和靶點?！居⑽恼緽ackground:Mycotic keratitis is a capital eye diseasescaused bli ndn ess. especially in fectio

6、us corn eal diseases has become amajor eye diseases caused bli ndn ess of the world. In recent years, theincidenee of mycotic keratitis has rise n to the first of in fectious cor nealdiseases.Therefore, the prevention and research of mycotic keratitis has becomeanimportant scientificproblems of eye

7、diseases causedto blindness in our country.Normally,eumycete don t encroachnormal cornea, but when the corneal epithelium damaged, cornea propriaexposed, eumycete can invade into propria lamina and substantia proprialayer through the lesions, caused to mycotic keratitis. Corneal epitheliumand stroma

8、l cells participate inthe natural immuneresponse of the host to oppose the invading ofeumycete. TLR is on the surface of the cell which is resp on sible forsensing dan ger sig nals from outside of the cells, and NODs located in thecytoplasm, which is responsible for ide ntify ing dan gerous sig nal

9、in sideof the cells. Studies show that the TLR-mediated sig nali ng pathway in innate immune plays an importa nt role in resista nee to fun gal in fecti on ofcor neal cells, and takes part in immune tolera nee of cor neal cells ect. Butthe role of NOD in these processes and its relationshipwith theTLRis little known currently.Thisstudydiscusses the expression of NODn corneal cells and researches the role ofthe process