(藥分)第02節(jié) 中藥制劑分析的一般程序

1、第二節(jié)第二節(jié) 中藥制劑分析的一般程序中藥制劑分析的一般程序取樣取樣鑒別鑒別含量測定含量測定檢查檢查提取提取純化純化一、取樣 1.取樣均勻、合理、代表性 2.按規(guī)定方法取樣 （中藥材、中藥制劑）二、鑒別二、鑒別（一）顯微鑒別（一）顯微鑒別 在下列情況中應(yīng)用：藥材及炮在下列情況中應(yīng)用：藥材及炮制品的外形鑒別特征不明顯或外形相制品的外形鑒別特征不明顯或外形相似難于鑒別而組織構(gòu)造不同時；藥材似難于鑒別而組織構(gòu)造不同時；藥材破碎或呈粉末不易用肉眼辨認或區(qū)分破碎或呈粉末不易用肉眼辨認或區(qū)分時；含原藥材粉末的中藥制劑。時；含原藥材粉末的中藥制劑。 丸劑、片劑、膠囊劑、散劑丸劑、片劑、膠囊劑、散劑 快速，簡便

2、，覆蓋面大快速，簡便，覆蓋面大選擇原則選擇原則 1 1、應(yīng)選有專屬性的特征進行、應(yīng)選有專屬性的特征進行鑒別鑒別 2 2、多來源的藥材應(yīng)選擇共有、多來源的藥材應(yīng)選擇共有的特征進行鑒別的特征進行鑒別安宮牛黃丸安宮牛黃丸1 1、水牛角濃縮粉、水牛角濃縮粉2 2、麝香、麝香3 3、珍珠、珍珠4 4、朱砂、朱砂5 5、雄黃、雄黃6 6、黃連、黃連7 7、梔子、梔子8 8、郁金、郁金9、黃芩、黃芩 顯微化學(xué)反應(yīng)鑒別法：一般可顯微化學(xué)反應(yīng)鑒別法：一般可取藥材切片或粉末，中成藥取粉末，取藥材切片或粉末，中成藥取粉末，置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)晶、玻

3、片，在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)晶、沉淀物，以及特殊的顏色變化，作沉淀物，以及特殊的顏色變化，作為鑒別特征。該法可以確定基礎(chǔ)品為鑒別特征。該法可以確定基礎(chǔ)品種中特殊化學(xué)成分的存在及在組織種中特殊化學(xué)成分的存在及在組織中的分布。中的分布。 ( (二）化學(xué)鑒別二）化學(xué)鑒別 抗干擾能力差抗干擾能力差顯色、顯色、熒光、熒光試劑組分例例 二妙丸中蒼術(shù)的鑒別二妙丸中蒼術(shù)的鑒別褪色醚層樣品乙醚4KMnO蒼術(shù)酮蒼術(shù)酮蒼術(shù)炔蒼術(shù)炔（三）色譜鑒別（三）色譜鑒別TLCTLC法法應(yīng)用最多（應(yīng)用最多（R Rf f、顏色、熒光）顏色、熒光）GCGC法法 適用于含揮發(fā)性成分的藥適用于含揮發(fā)性成分的藥物物HPLCHPLC法法常與含

4、量測定同時進行常與含量測定同時進行鑒定有臨床療效的已知成分鑒定有臨床療效的已知成分黃連黃連 小檗堿（抗菌消炎）小檗堿（抗菌消炎） 麻黃麻黃 麻黃堿（支氣管哮喘）麻黃堿（支氣管哮喘）烏頭烏頭 烏頭堿（毒性）烏頭堿（毒性）洋地黃洋地黃 強心苷（強心）強心苷（強心）延胡索延胡索 延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）延胡索乙素（鎮(zhèn)痛）陰、陽對照法陰、陽對照法陽性對照陽性對照 將要鑒別的藥材按制將要鑒別的藥材按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液溶液陰性對照陰性對照 把制劑中要鑒別的藥把制劑中要鑒別的藥材除去，用剩下的各味藥按制劑工材除去，用剩下的各味藥按制劑工藝處理，再按鑒別方法提取的溶液

5、藝處理，再按鑒別方法提取的溶液 OO O O O O O O O O O 陰陰 樣樣 陽陽 對對 品品 對對例例大補陰丸大補陰丸 黃柏的黃柏的TLCTLC法鑒別法鑒別 樣樣品品對照對照藥材藥材小小檗檗堿堿O O OO O 例例薄層板的選擇薄層板的選擇 硅膠硅膠G G板（可加板（可加0.3% 0.3% 0.5% CMC-0.5% CMC-NaNa） 多用多用氧化鋁板氧化鋁板 常用于生物堿類藥物常用于生物堿類藥物聚酰胺板聚酰胺板 常用于黃酮類及酚類常用于黃酮類及酚類 藥物藥物 纖維素板纖維素板 常用于氨基酸類藥物常用于氨基酸類藥物 （四）中藥鑒別新技術(shù)中藥指紋圖（四）中藥鑒別新技術(shù)中藥指紋圖譜（色

6、譜）譜（色譜）1.1.定義：定義： 中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的色譜分析手段，理后，采用一定的色譜分析手段，得到的能夠標定該中藥材或中藥得到的能夠標定該中藥材或中藥制劑特性的共有峰的色譜圖制劑特性的共有峰的色譜圖2.2.色譜指紋圖譜的基本屬性色譜指紋圖譜的基本屬性整體性整體性 將指紋圖譜作將指紋圖譜作為一個整體來分析和比較它的綜合為一個整體來分析和比較它的綜合特征以達到鑒別的目的。特征以達到鑒別的目的。 b.b.模糊性模糊性 強調(diào)分析、比強調(diào)分析、比較指紋圖譜的相似性，而不是完全較指紋圖譜的相似性，而不是完全相同。相同。 是一種綜合的、量化的色是一種綜合的、

7、量化的色譜鑒別手段。譜鑒別手段。3. 3. 指紋圖譜的應(yīng)用指紋圖譜的應(yīng)用雅蓮云蓮味蓮味蓮雅蓮雅蓮云蓮云蓮IIIIII訶訶 子子小訶子小訶子大訶子大訶子絨毛訶子絨毛訶子人參須根人參須根人參主根人參主根不同產(chǎn)地高良姜的氣相指紋圖譜不同產(chǎn)地高良姜的氣相指紋圖譜指紋圖譜研究過程中的注意事項：指紋圖譜研究過程中的注意事項：1 1、在藥效學(xué)指導(dǎo)下進行研究，保證、在藥效學(xué)指導(dǎo)下進行研究，保證指紋圖譜反映的化學(xué)成分包括中指紋圖譜反映的化學(xué)成分包括中藥材中有效部位所含的絕大部分藥材中有效部位所含的絕大部分成分或有效成分的全部。成分或有效成分的全部。2 2、樣品的預(yù)處理過程及測定方法應(yīng)、樣品的預(yù)處理過程及測定方法

8、應(yīng)簡便、經(jīng)濟、易行，且專屬性、簡便、經(jīng)濟、易行，且專屬性、準確度與重現(xiàn)性好。準確度與重現(xiàn)性好。三、雜質(zhì)檢查三、雜質(zhì)檢查水分水分總灰分和酸不溶性灰分總灰分和酸不溶性灰分重金屬重金屬砷鹽砷鹽殘留農(nóng)藥殘留農(nóng)藥 主要項目主要項目雜質(zhì)來源及檢查意義雜質(zhì)來源及檢查意義水分水分 結(jié)塊、霉變或有效成分水解結(jié)塊、霉變或有效成分水解灰分灰分 控制藥物本身及泥土、沙石等控制藥物本身及泥土、沙石等 無機雜質(zhì)無機雜質(zhì)重金屬重金屬 環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入環(huán)境污染和使用農(nóng)藥引入砷鹽砷鹽 劇毒，常由除草劑、殺蟲劑或劇毒，常由除草劑、殺蟲劑或 化肥引入化肥引入殘留農(nóng)藥殘留農(nóng)藥 有毒有毒（一）水分測定法（一）水分測定法烘干法（不

9、含或少含揮發(fā)性成分）烘干法（不含或少含揮發(fā)性成分）甲苯法甲苯法 （含揮發(fā)性成分）（含揮發(fā)性成分）減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥）減壓干燥法（含揮發(fā)性成分貴重藥）GCGC法法酸不溶性灰分的測定酸不溶性灰分的測定灰化恒重炭化供試品已恒重坩堝600500 炭化灰化過濾總灰分已恒重坩堝HCld（二）總灰分和酸不溶性灰分的測定（二）總灰分和酸不溶性灰分的測定總灰分的測定總灰分的測定WHOWHO規(guī)定植物藥規(guī)定植物藥鉛鉛10ppm10ppm鎘鎘0.3ppm0.3ppm干法破壞干法破壞濕法破壞濕法破壞硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法（三）（三）重金屬的測定重金屬的測定干法破壞（干法破壞（ChPChP）濕法破壞（濕法破

10、壞（USPUSP）灰化炭化供試品低溫6005003HNO蒸干蒸干第一法HClOH2(調(diào)到中性調(diào)到中性)第一法消化供試品凱氏燒瓶O法古蔡氏法供試品有機破壞DDCAg 堿融法破壞堿融法破壞濕法破壞濕法破壞堿融法堿融法灰化炭化供試品6005002OHCaH+ 34AsO（四）（四）砷鹽的測定砷鹽的測定（五）殘留農(nóng)藥的測定（五）殘留農(nóng)藥的測定1 1、總氯量的測定、總氯量的測定2 2、總磷量的測定、總磷量的測定3 3、GCGC法法 中國藥典中藥制劑含量測定所占比例中國藥典中藥制劑含量測定所占比例 版本版本 % % 1977 1.48 1977 1.48 1985 5.31 1985 5.31 1990

11、8.73 1990 8.73 1995 12.81 1995 12.81 2000 62.09 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%)HPLC 36% TLCS 24% GC 3%)含量測定項目的選定含量測定項目的選定四、四、測定成分的選定原則測定成分的選定原則1.1.首選君藥及貴重藥、劇毒藥建首選君藥及貴重藥、劇毒藥建立含量、限量測定方法立含量、限量測定方法2.2.其次考慮臣藥及其他味藥其次考慮臣藥及其他味藥3.3.有效成分明確的，可選有效成有效成分明確的，可選有效成分分4.4.成分類別清楚的，可測某一類總成分類別清楚的，可測某一類總成分的含量成分的含量5.

12、5.檢測成分應(yīng)歸屬某單一藥味檢測成分應(yīng)歸屬某單一藥味6.6.檢測成分應(yīng)與中醫(yī)用藥的功能主檢測成分應(yīng)與中醫(yī)用藥的功能主 治相近治相近7.7.確無法含量測定的，可測定浸出確無法含量測定的，可測定浸出 物含量物含量化學(xué)分析法化學(xué)分析法色譜法色譜法常用定量方法常用定量方法 分光光度法分光光度法（一）化學(xué)分析法（一）化學(xué)分析法 重量分析法重量分析法 容量分析法容量分析法特點特點 A A、準確度、精密度高準確度、精密度高 B B、抗干擾能力差抗干擾能力差昆明山海棠片 HCl殘渣殘渣濾液濾液樣品樣品乙醇乙醇 OHNH23乙醚乙醚恒重恒重稱重稱重 例例（二）分光光度法（二）分光光度法UVUV法法 比色法比色法

13、特點特點 A A、靈敏度高靈敏度高 B B、簡便、快速簡便、快速 C C、精密度稍低精密度稍低 D D、干擾多干擾多 蘆丁蘆丁nm,max359299266259 黃芩苷黃芩苷nm,max314271240 小檗堿小檗堿 nm,max360350345 丹皮酚丹皮酚nmmax274 （三）（三）TLCSTLCS法法 測定薄層板上斑點對單色光的吸測定薄層板上斑點對單色光的吸收或反射的強度而進行定量的方法收或反射的強度而進行定量的方法特點特點 A A、分離效果好、分離效果好 B B、適用于無法用、適用于無法用UVUV、HPLCHPLC 法測定的組分法測定的組分 C C、準確度、精密度低于、準確度、

14、精密度低于HPLCHPLC20002000年版中國藥典（年版中國藥典（20002000年版）年版）薄層掃描法品種薄層掃描法品種 品種數(shù)量品種數(shù)量 TLCSTLCS數(shù)量數(shù)量 占總數(shù)占總數(shù)% %534534（藥材）（藥材） 20 3.7420 3.74458458（成藥）（成藥） 32 6.9932 6.99978978（總數(shù)）（總數(shù)） 52 10.7352 10.73 1.1.選擇測定條件選擇測定條件（1 1）薄層色譜條件）薄層色譜條件 分離好分離好 不拖尾不拖尾（2 2）檢測方法）檢測方法 吸收測定法吸收測定法 熒光測定法熒光測定法 反射法反射法 透射法透射法 外標法外標法 內(nèi)標法內(nèi)標法（3

15、3）掃描方式）掃描方式 單波長單波長 雙波長雙波長 線性掃描法線性掃描法 鋸齒掃描法鋸齒掃描法（4 4）散射參數(shù)）散射參數(shù)SXSX薄層板的散射使薄層板的散射使ECLA Kubelka-MunkKubelka-Munk方程方程 jSiKSdxdi iSjKSdxdj 2.2.注意事項注意事項（1 1）薄層板）薄層板 均勻、平整均勻、平整（2 2）點樣量）點樣量 準確準確（3 3）斑點）斑點 應(yīng)完全分離，不拖尾應(yīng)完全分離，不拖尾（4 4）顯色劑）顯色劑 均勻、適當均勻、適當（5 5）保護斑點）保護斑點 用相同大小潔凈玻璃用相同大小潔凈玻璃蓋住薄層板，并用透明膠紙封住邊緣，蓋住薄層板，并用透明膠紙封

16、住邊緣，以起固定和隔絕空氣作用以起固定和隔絕空氣作用 樣樣 樣樣 對對 對對 樣樣 樣樣 對對 對對 樣樣 樣樣 對對 對對 低低 高高 低低 高高 低低 高高 外標法（兩點校正法）外標法（兩點校正法）（四）（四） HPLCHPLC法法 外標法和內(nèi)標法外標法和內(nèi)標法RP HPLC RP HPLC 色譜柱色譜柱 ODS ODS 流動相流動相 甲醇甲醇 - - 水水PICPIC反離子反離子 氫氧化四丁基銨氫氧化四丁基銨RP - PIC RP - PIC 反離子反離子 烷基磺酸鹽烷基磺酸鹽 無機陰離子無機陰離子離子對色譜法（離子對色譜法（PICPIC） 極性流動相中加入離子對試劑，極性流動相中加入離

17、子對試劑，與被分析離子生成中性離子對，從而與被分析離子生成中性離子對，從而增加在非極性固定相中的溶解度，使增加在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增大分配系數(shù)增大20002000年版中國藥典（年版中國藥典（20002000年版）年版）HPLCHPLC法品種法品種 品種數(shù)量品種數(shù)量 HPLCHPLC數(shù)量數(shù)量 占總數(shù)占總數(shù)% %534534（藥材）（藥材） 54 10.1154 10.11458458（成藥）（成藥） 48 10.4848 10.48978978（總數(shù)）（總數(shù)） 102 20.59102 20.59應(yīng)用實例應(yīng)用實例- -小青龍合劑小青龍合劑 處方處方 麻黃麻黃125g 125g 桂

18、枝桂枝125g 125g 白芍白芍125g 125g 干姜干姜125 125 五味子五味子125g125g 細辛細辛62g 62g 甘草甘草( (蜜炙蜜炙) ) 法半夏法半夏188g188g生物堿生物堿桂皮醛桂皮醛芍藥甙芍藥甙揮發(fā)油揮發(fā)油三萜皂甙三萜皂甙應(yīng)用實例應(yīng)用實例- -小青龍合劑小青龍合劑 制法制法 以上八味，細辛、桂枝提取揮以上八味，細辛、桂枝提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與白芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至味白芍、麻黃、五味子、甘草加水煎煮至味盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水盡，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水溶液合并，濃縮至約溶液合

19、并，濃縮至約1000ml1000ml。法半夏、甘法半夏、甘姜照流浸膏劑項下滲漉法，用姜照流浸膏劑項下滲漉法，用70%70%乙醇作溶乙醇作溶劑，浸漬劑，浸漬2424小時后進行滲漉，漉液濃縮，小時后進行滲漉，漉液濃縮，與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮與上述藥液合并，靜置，濾過，濾液濃縮至至1000ml1000ml，加入苯甲酸鈉加入苯甲酸鈉3g3g與細辛、桂枝與細辛、桂枝揮發(fā)油，攪勻，即得。揮發(fā)油，攪勻，即得。 性狀性狀 本品為棕黑色的液體；氣微本品為棕黑色的液體；氣微香，味甜、微辛。香，味甜、微辛。 功能與主治功能與主治 解表化飲，止咳平喘。解表化飲，止咳平喘。用于風寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，用

20、于風寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，喘咳痰稀。喘咳痰稀。 用法與用量用法與用量 口服，一次口服，一次10-20ml10-20ml，一日一日3 3次，用時搖勻。次，用時搖勻。方藥分析：方藥分析：君君 麻黃麻黃發(fā)汗為君發(fā)汗為君臣臣 桂枝桂枝解表為臣解表為臣佐佐 甘草甘草恐發(fā)汗太過恐發(fā)汗太過, , 佐以甘草緩佐以甘草緩 之之使使 白芍、干姜、細辛、法半夏、五白芍、干姜、細辛、法半夏、五 味子味子幾藥合力共為使。幾藥合力共為使?？赏獍l(fā)汗，內(nèi)行水，散表里之邪?？赏獍l(fā)汗，內(nèi)行水，散表里之邪。漢代張仲景漢代張仲景傷寒論傷寒論小青龍湯小青龍湯 近代由重慶桐君閣中藥廠該湯近代由重慶桐君閣中藥廠該湯劑為合劑劑為合劑 本方

21、治療傷寒表不解，心下有水本方治療傷寒表不解，心下有水氣，干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于氣，干嘔，發(fā)熱而咳。近代也用于慢性支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣慢性支氣管炎，支氣管哮喘、肺氣腫，均見咳、喘、痰白清稀者。腫，均見咳、喘、痰白清稀者。供試品溶液與陰性對照液的制備：供試品溶液與陰性對照液的制備： 取合劑取合劑10 ml10 ml，石油醚分石油醚分3 3次萃取，次萃取，合并石油醚萃取液合并石油醚萃取液 油層油層 ，濃縮至，濃縮至1ml1ml，為供試品溶液為供試品溶液A A； 水層水層 用用NaNa2 2COCO3 3調(diào)調(diào)PH11-12PH11-12，用氯仿萃取，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，

22、殘渣用合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，殘渣用1ml1ml甲醇溶解，為供試品溶液甲醇溶解，為供試品溶液B B；陰性對照液陰性對照液如上法同步進行如上法同步進行。1. 1. 桂皮醛的鑒別桂皮醛的鑒別 取供試品液取供試品液A A、陰性對照液、桂陰性對照液、桂皮醛對照液（皮醛對照液（1ug/ml1ug/ml）1 15ul5ul，點于點于同一硅膠同一硅膠G G板上，環(huán)己烷板上，環(huán)己烷- -乙酸乙酯乙酸乙酯（1717：3 3）展開，晾干，噴）展開，晾干，噴2 2，44二二硝基苯肼乙醇硝基苯肼乙醇T.ST.S，供試品供試品A A與對照與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的橙色斑點，品在相應(yīng)位置上顯相同的橙色斑點，而陰性

23、對照液無此斑點。而陰性對照液無此斑點。2. 2. 細辛揮發(fā)油的鑒別細辛揮發(fā)油的鑒別 取供試品液取供試品液A A、陰性對照液、細陰性對照液、細辛揮發(fā)油對照液（辛揮發(fā)油對照液（1 1：1010乙醚液）乙醚液）5ul5ul，點于同一硅膠點于同一硅膠G G板上，環(huán)己烷板上，環(huán)己烷展開，晾干，噴展開，晾干，噴10%10%香草醛濃硫酸香草醛濃硫酸T.ST.S，加熱至顯色，供試品加熱至顯色，供試品A A與對照與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的粉紅色斑品在相應(yīng)位置上顯相同的粉紅色斑點，而陰性對照液無此斑點。點，而陰性對照液無此斑點。3. 3. 麻黃堿的鑒別麻黃堿的鑒別 取供試品液取供試品液B B，陰性對照液，麻陰性

24、對照液，麻黃堿對照品液（黃堿對照品液（1mg/ml1mg/ml）各各5ul5ul，點點于同一硅膠于同一硅膠G G，氯仿氯仿- -甲醇甲醇- -濃氨水濃氨水（2020：5 5：0.50.5）展開，晾干，噴茚三）展開，晾干，噴茚三酮酮T.ST.S，加熱至斑點顯色，供試品加熱至斑點顯色，供試品B B與與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的藍紫色對照品在相應(yīng)位置上顯相同的藍紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。斑點，而陰性對照液無此斑點。 取合劑取合劑5ml5ml，上聚酰胺柱，上聚酰胺柱，DWDW洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用洗脫，洗脫液水浴濃縮至干，用1ml1ml甲醇溶解，為供試品溶液甲醇溶解，為供試品溶液C C；

25、聚酰胺柱再用聚酰胺柱再用95%95%乙醇洗脫，棄乙醇洗脫，棄取洗脫液，用取洗脫液，用3M3M氨乙醇液洗脫，收氨乙醇液洗脫，收集洗脫液水浴蒸干，集洗脫液水浴蒸干， 1ml1ml甲醇溶解，甲醇溶解，為供試品溶液為供試品溶液D D。4. 4. 芍藥甙的鑒別芍藥甙的鑒別 取供試品液取供試品液C C、陰性對照液、芍陰性對照液、芍藥甙對照液（藥甙對照液（1mg/ml1mg/ml）10ul10ul，點于同點于同一硅膠一硅膠G G板上，氯仿板上，氯仿- -乙酸乙酯乙酸乙酯- -甲醇甲醇- -冰醋酸冰醋酸- -甲酸（甲酸（8 8：1 1：2 2：0.040.04）展開，）展開，晾干，噴晾干，噴10%10%硫酸乙

26、醇液，加熱至顯硫酸乙醇液，加熱至顯色，供試品色，供試品C C與對照品在相應(yīng)位置上與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。此斑點。 5. 5. 甘草酸的鑒別甘草酸的鑒別 取供試品液取供試品液D D、陰性對照液、甘陰性對照液、甘草酸銨對照液（草酸銨對照液（2mg/ml2mg/ml）2ul2ul，點于點于同一硅膠同一硅膠G G板上，乙酸乙酯板上，乙酸乙酯- -甲酸甲酸- -冰冰醋酸醋酸- -蒸餾水（蒸餾水（3030：2 2：2 2：4 4）展開，）展開，晾干，噴晾干，噴10%10%硫酸乙醇液，加熱至顯硫酸乙醇液，加熱至顯色，色，UVUV燈燈365n

27、m365nm觀察，供試品觀察，供試品D D與對照與對照品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點，品在相應(yīng)位置上顯相同的紫色斑點，而陰性對照液無此斑點。而陰性對照液無此斑點。含量測定含量測定HPLCHPLC法測定芍藥甙的含量法測定芍藥甙的含量 儀器與色譜條件儀器與色譜條件 BECKMAN 332BECKMAN 332型高效液相色譜儀型高效液相色譜儀 163163型可變波長紫外檢測儀，型可變波長紫外檢測儀，220nm220nm 427427型記錄及數(shù)據(jù)處理儀型記錄及數(shù)據(jù)處理儀 色譜柱為色譜柱為YWGC18YWGC18 流動相乙腈流動相乙腈- -水（水（1515：8585） 標準曲線制備標準曲線制備 精密稱取

28、芍藥甙精密稱取芍藥甙5.08mg5.08mg，溶于水至溶于水至50ml50ml量瓶中，定容，分別吸取量瓶中，定容，分別吸取0.500.50、1.001.00、1.501.50、2.00ml2.00ml于于10ml10ml量瓶中量瓶中定容。定容。 回收率測定回收率測定 精密吸取除去白芍制成的合精密吸取除去白芍制成的合劑（劑（即陰性對照液即陰性對照液）0.3ml0.3ml與適量芍藥甙對與適量芍藥甙對照品液，通過照品液，通過0.5g0.5g聚酰胺柱，用水洗脫至聚酰胺柱，用水洗脫至50ml50ml量瓶中至刻度，依前述條件測定，平量瓶中至刻度，依前述條件測定，平均回收率為均回收率為99.42%99.42

29、%，RSDRSD為為0.23%0.23%（n=3n=3）。）。 樣品測定樣品測定 取自制小青龍合劑搖勻，用濾取自制小青龍合劑搖勻，用濾紙過濾，精密吸取紙過濾，精密吸取0.3ml0.3ml濾液通過濾液通過聚酰胺柱，以不同回收率測定條聚酰胺柱，以不同回收率測定條件進行測定。件進行測定。 分析實例分析實例萬氏牛黃清心丸萬氏牛黃清心丸 處方處方 牛黃牛黃10g 10g 朱砂朱砂6060g g 黃連黃連200200g g 黃芩黃芩120120g g 梔子梔子120120g g 郁金郁金8080g g分析實例分析實例萬氏牛黃清心丸萬氏牛黃清心丸 制法制法 以上六味，除牛黃外，朱砂水以上六味，除牛黃外，朱砂

30、水飛或粉碎成極細粉；其余黃連等四飛或粉碎成極細粉；其余黃連等四味粉碎成細粉；將牛黃研細，與上味粉碎成細粉；將牛黃研細，與上述粉末配研，過篩，混勻。每述粉末配研，過篩，混勻。每100100g g粉末加煉蜜粉末加煉蜜100-200100-200g g制成大蜜丸，制成大蜜丸，即得。即得。古方為糊丸，亦有水丸古方為糊丸，亦有水丸 性狀性狀 本品為紅棕色至棕褐色的大本品為紅棕色至棕褐色的大蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。蜜丸；氣特異，味甜、微澀、苦。 功能主治功能主治 清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神。清熱解毒，鎮(zhèn)驚安神。用于熱邪內(nèi)閉，煩躁不安，神昏譫用于熱邪內(nèi)閉，煩躁不安，神昏譫語，小兒高熱驚厥。語，小兒高熱驚厥。

31、方藥分析方藥分析 牛黃牛黃清熱解毒藥，主含膽酸類成分。清熱解毒藥，主含膽酸類成分。黃連黃連清熱燥濕藥，主要為小檗堿。清熱燥濕藥，主要為小檗堿。黃芩黃芩清熱燥濕藥，主要為黃酮類。清熱燥濕藥，主要為黃酮類。梔子梔子清熱瀉火藥，主含梔子甙。清熱瀉火藥，主含梔子甙。朱砂朱砂安神藥，主含硫化汞（安神藥，主含硫化汞（HgSHgS）。）。郁金郁金活血去瘀藥，主含揮發(fā)油?；钛ヰ鏊?，主含揮發(fā)油。 鑒別鑒別q 顯微鑒別顯微鑒別郁金郁金糊化淀粉團塊幾乎無色。糊化淀粉團塊幾乎無色。梔子梔子種皮石細胞。種皮石細胞。黃芩黃芩纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細。纖維淡黃色，梭形，厚壁，孔溝細。黃連黃連纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔

32、明顯。纖維鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯。朱砂朱砂不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或棕黃色。鮮紅色或棕黃色。郁金郁金糊化淀粉團糊化淀粉團塊塊梔子梔子種皮石細胞種皮石細胞黃芩黃芩纖維纖維黃連黃連纖維纖維朱砂朱砂不規(guī)則塊狀不規(guī)則塊狀物或顆粒狀物，暗物或顆粒狀物，暗紅棕色、鮮紅色或紅棕色、鮮紅色或棕黃色棕黃色化學(xué)鑒別化學(xué)鑒別1. 1. 朱砂的鑒別朱砂的鑒別 取本品取本品3g3g，加水適量，研勻，反復(fù)加水適量，研勻，反復(fù)洗去懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，洗去懸浮物，可得少量朱紅色沉淀，取出，加入鹽酸加入鹽酸1 1mlml及銅片少量，加熱煮沸，銅及銅片少量，加熱煮

33、沸，銅片由黃色變?yōu)殂y白色。片由黃色變?yōu)殂y白色。 HgS+2HCl+CuHgS+2HCl+CuCuClCuCl2 2+Hg+H+Hg+H2 2S S 在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)生置換在酸性條件下，朱砂與銅片發(fā)生置換反應(yīng)析出金屬汞，在銅片表面形成銀白色反應(yīng)析出金屬汞，在銅片表面形成銀白色汞齊。汞齊。2. 2. 人工牛黃的鑒別人工牛黃的鑒別 取本品，剪碎，加硅藻土取本品，剪碎，加硅藻土0.6g0.6g，研勻，加氯仿研勻，加氯仿10ml10ml、冰醋酸冰醋酸0.50.5mlml，加熱回流加熱回流3030min,min,放冷，濾過，濾液放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇蒸干，殘渣加乙醇2 2mlml使溶解

34、，濾過，使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。濾液作為供試品溶液。 膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成膽酸和豬去氧膽酸加乙醇制成1 1mlml含含1 1mgmg的混合溶液，作為對照品的混合溶液，作為對照品溶液。溶液。TLCTLC法法 CMC-NaCMC-Na，硅膠硅膠G G展開劑展開劑 醋酸乙酯醋酸乙酯- -正己烷正己烷- -醋酸醋酸- -甲醇甲醇 （32:6:1:132:6:1:1）顯色劑顯色劑 10%10%磷鉬酸乙醇液，磷鉬酸乙醇液， 1101100 0C,10minC,10min人工牛黃人工牛黃供試品供試品牛黃空白牛黃空白豬去氧膽酸豬去氧膽酸膽膽酸酸3. 3. 黃芩的鑒別黃芩的鑒別 供試品溶液的制備

35、：取本品供試品溶液的制備：取本品3g3g，剪碎，加硅藻土剪碎，加硅藻土0.5g0.5g，研勻，加甲研勻，加甲醇醇20ml20ml，加熱回流加熱回流1hr,1hr,放冷，濾過，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。濾液作為供試品溶液。 對照品溶液的制備：黃芩甙對對照品溶液的制備：黃芩甙對照品加甲醇制成每照品加甲醇制成每1 1mlml含含1 1mgmg的溶液，的溶液，作為對照品溶液。作為對照品溶液。TLCTLC法法 CMC-NaCMC-Na，硅膠硅膠G G （4%4%醋酸鈉）醋酸鈉）展開劑展開劑 醋酸乙酯醋酸乙酯- -丁酮丁酮- -甲酸甲酸- -水水 （5:3:1:15:3:1:1）顯色劑顯色劑 2%2

36、%三氯化鐵乙醇液三氯化鐵乙醇液使使斑點更為集中斑點更為集中-OH與與Fe+3絡(luò)合絡(luò)合黃芩甙供試品黃芩空白4. 4. 梔子的鑒別梔子的鑒別 供試品溶液的制備：取本品供試品溶液的制備：取本品3g3g，加乙醚加乙醚15ml15ml，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，加醋酸加醋酸乙酯乙酯30ml30ml，加熱回流加熱回流1hr,1hr,放冷，濾放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3ml3ml溶解，濾過，溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。濾液作為供試品溶液。 對照品溶液的制備：梔子甙對照品加甲對照品溶液的制備：梔子甙對照品加甲醇制成每醇制成每1 1mlml含含

37、1 1mgmg的溶液，作為對照品溶的溶液，作為對照品溶液。液。TLCTLC法法 CMC-NaCMC-Na，硅膠硅膠G G展開劑展開劑 醋酸乙酯醋酸乙酯- -丙酮丙酮- -甲酸甲酸- -水水 （10 : 7 : 2 : 0.510 : 7 : 2 : 0.5）顯色劑顯色劑 10%10%硫酸乙醇硫酸乙醇 1051050 0C, 10minC, 10min梔子甙梔子甙供試供試品品梔子空白梔子空白5. 5. 黃連的鑒別黃連的鑒別 供試品溶液的制備：取含量測供試品溶液的制備：取含量測定項下剩余的鹽酸定項下剩余的鹽酸- -甲醇提取液甲醇提取液4ml4ml，水浴蒸干，殘渣加甲醇水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，使成

38、溶解，使成1ml1ml作為作為供試品溶液。供試品溶液。 對照藥材溶液對照藥材溶液的制備：黃連對的制備：黃連對照藥材照藥材50mg50mg，加甲醇加甲醇10ml10ml，回流加回流加熱熱15min ,15min ,濾過，濾液蒸干，殘渣加濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇甲醇1ml1ml使溶解，作為對照藥材溶液。使溶解，作為對照藥材溶液。 對照品溶液的制備對照品溶液的制備：再取鹽酸：再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇小檗堿對照品，加甲醇制成每制成每1 1mlml含含 0.5mg0.5mg的溶液，作為對照品溶液。的溶液，作為對照品溶液。TLCTLC法法 硅膠硅膠G CMC-NaG CMC-Na展開劑展開劑 苯苯-

39、 -醋酸乙酯醋酸乙酯- -甲醇甲醇- -異丙醇異丙醇- -濃濃氨試液（氨試液（12:6:3:3:112:6:3:3:1）顯色劑顯色劑 UVUV（365nm365nm）鹽酸小檗堿黃連黃連公式品供試品供試品黃連空白黃連空白含量測定含量測定 1. 1. 朱砂朱砂 取本品約取本品約5g5g，剪碎，精密稱定，剪碎，精密稱定，置置250ml250ml凱氏燒瓶中，加硫酸凱氏燒瓶中，加硫酸30ml30ml與與硝酸鉀硝酸鉀8g8g，加熱俟溶液至近無色，放冷，轉(zhuǎn)入加熱俟溶液至近無色，放冷，轉(zhuǎn)入250ml250ml錐形瓶中，用水錐形瓶中，用水50ml50ml分次洗滌燒瓶，分次洗滌燒瓶，洗液并人溶液中，滴加洗液并人溶液中，滴加1%1%高錳酸鉀溶液至高錳酸鉀溶液至顯粉紅色