8人類免疫缺陷病毒抗體測定標準操作規(guī)程

1、第 5 頁 共 5 頁 滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗科 標準操作規(guī)程文件編號：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：1滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗科標準操作規(guī)程項目人類免疫缺陷病毒抗體測定方法（雙抗原夾心法）文件編號CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本第1版編寫者：鄭昕審核者：陶良萍批準者：謝瑞玉批準日期：20161101本規(guī)程自2016年11月1日起實施，每3年復審一次復審人：復審日期：文件分發(fā)部門和/或個人：醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任臨床免疫室規(guī)程修訂記錄：修訂號修訂內(nèi)容修訂人修訂日期1.原理采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿中的HI

2、V1/HIV2型抗體。在微孔板預包被基因重組HIV(1+2)型抗原，當加入的待測樣本中存在HIV抗體時，將反應形成抗原抗體復合物，再與加入的酶標記基因工程HIV(1+2)型抗原反應，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗體-酶標記HIV抗原”的免疫復合物，加入底物后形成顯色反應。2.樣品要求2.1病人準備事項準備事項具體內(nèi)容禁食/特種飲食不要求禁食，但由于重度脂血可能干擾檢測，禁食樣品最佳。病人的準備事項安靜狀態(tài)下抽取靜脈血，樣品采集特殊要求采血時應一針見血，切忌反復穿刺，避免溶血2.2樣品類型及處理方法樣品類型血清或肝素、枸櫞酸鈉、EDTA抗凝血漿樣品量最佳量5ml最少量3ml收集容器肝素抗凝管

3、（綠帽）運輸要求室溫穩(wěn)定性及儲藏要求室溫2小時冷藏溫度（2-8C）4天-20C1月-70C6月標本制備4000轉/分離心 5分鐘制備血清/血漿標本拒收拒絕采集量不足、肉眼觀察有溶血及抗凝劑類型不符的樣品3.試劑名稱規(guī)格儲存條件有效期HIV預包被微孔板（包被基因工程HIV抗原）96人份28避光保存12個月HIV酶標抗原（含HRP標記基因工程HIV抗原）1支28避光保存12個月HIV-1型陽性對照（含HIV-1型抗體）1支28避光保存12個月HIV-2型陽性對照（含HIV-2型抗體）1支28避光保存12個月HIV抗體陰性對照（正常人血清）1支28避光保存12個月濃縮洗滌液（PBS-T緩沖液）2瓶2

4、8避光保存12個月底物A(含H2O2)1支28避光保存12個月底物B（含TMB）1支28避光保存12個月終止液（含H2SO4）1支28避光保存12個月4.儀器名稱廠家型號全自動酶標分析儀北京天石SM-35.方法性能5.1 特異性：陰、陽性參考品檢出情況符合要求。5.2 靈敏度：各亞型的最低檢出量符合要求。5.3 精密性：檢測精密性參考品，CV15%（N=10）。5.4 穩(wěn)定性：試劑盒內(nèi)各組分，37放置6天，產(chǎn)品性能仍符合1-3項標準。6.質(zhì)量控制6.1 設置陰、陽對照6.2 失控規(guī)則：陰性對照OD均值0.1或者陽性對照OD均值0.67.操作步驟 7.1平衡：將試劑盒各組分從盒中取出，平衡至室溫

5、，微孔板開封后，余者即時以自封袋封存。7.2 配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻，濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。7.3 編號：取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按順序編號。7.4 加樣：分別在相應孔中加入50ul陰、陽性對照血清和待測樣本50ul。7.5 溫育：封板后，置37溫育60分鐘。7.6 洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干。7.7 加酶：分別在每孔中加入酶標記抗體100ul。7.8 溫育：封板后，置37溫育30分鐘。7.7 洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干。7.8 顯色：每孔加入底物A、B各50ul，混勻，置37溫育30分鐘。7.9 終止：每孔加入終止液50ul，混勻。7.10 測定：用酶標儀雙波長450nm/630nm測定各孔OD值，并記錄結果。8.結果判定 樣本OD值S/C.O. 1者為HIV抗體反應初篩陽性 樣本OD值S/C.O. 1者為HIV 抗體反應陰性 初篩陽性者應重新取樣進行雙孔復試，復試陽性者應按照“全國HIV檢測管理規(guī)范”送HIV確認實驗室進行相關確認試驗。9.危急值及處理 無。10.臨床意義 適用于HIV(1+2)型抗體的輔助診斷及獻血員篩查?？梢杂行У臏p少疾病的傳播擴散。12.干擾 溶血、高血脂、高膽紅素樣本有一定