參附注射液對大鼠肢體缺血再灌注后髓過氧化物酶、丙二醛和能量代謝酶的影響

1、參附注射液對大鼠肢體缺血再灌注后髓過氧化物酶、丙二醛和能量代謝酶的影響         11-05-14 09:34:00     編輯：studa20               作者：謝朝暉,李巖,嚴(yán)宛鴻,王春愛,周驍【摘要】  目的 觀察參附注射液對大鼠肢體缺血再灌注后骨骼肌組織髓過氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量

2、和細(xì)胞色素氧化酶(CCO)及鈣激活A(yù)TP酶(Ca2-ATPase)活性水平變化的影響,探討其作用機(jī)制。方法 SD大鼠30只,建立肢體缺血再灌注損傷模型。A組：對照組(10只),只做手術(shù),不做阻斷；B組：缺血再灌注組(10只),缺血4 h,再灌注4 h,未作藥物治療；C組：參附注射液治療組(10只),缺血及再灌注時(shí)間同前一組。阻斷前于股動(dòng)脈阻斷部位處注入?yún)⒏阶⑸湟?2.0 mL/kg),5 min后夾閉股動(dòng)靜脈。再灌注前15 min,再次自尾靜脈注入同樣濃度參附注射液,檢測骨骼肌組織MPO、MDA、濕重/干重值(W/D)和CCO及Ca2-ATPase活性的變化。結(jié)果 參附注射液能降低大鼠骨骼肌缺

3、血再灌注損傷所引起的骨骼肌組織MPO、MDA、W/D的升高,在一定程度上保護(hù)CCO及Ca2-ATPase的活性。結(jié)論 參附注射液可減輕肢體缺血再灌注時(shí)骨骼肌組織的損傷。 【關(guān)鍵詞】  骨骼?。辉俟嘧p傷；參附注射液；大鼠    Abstract：Objective  To observe the effect of shenfu injection on ischemia/reperfusion injury in skeletal muscle of rats. Methods Rat posterior limb ischemia/repe

4、rfusion model were made. Thirty SD rats were randomly divided into three groups (n10)：sham group (group A), ischemia/reperfusion group (group B) and shenfu injection treatment group(group C). In group A, the rats received sham operation only. In group B, the animals recieved posterior limb ischemia

5、4 hours and reperfusion 4 hours. In group C, shenfu injection 2.0 mL/kg were injected iv 5 min before ischemia and 15 min before reperfusion. The level of malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO), wet weight/dry weight (W/D), cytochrome oxidase (CCO) and Ca2+-ATPase in the skeletal muscle were m

6、easured at the end of the experiment. Results Shenfu injection can reduce the heightened level of MDA, MPO, W/D and protect the activity of CCO, Ca2+-ATPase in the skeletal muscle, lighten the injury of the ultrastructure. Conclusion Shenfu Injection can protect ischemia/reperfusion injury in skelet

7、al muscle.    Key words：skeletal muscle；ischemia/reperfusion injury；Shenfu injection；rat     臨床上急性動(dòng)脈栓塞、血栓形成、外傷、手術(shù)時(shí)捆扎止血帶以及血管重建手術(shù)時(shí)的血流阻斷,均可引起肢體不同程度的缺血再灌注損傷。肢體缺血再灌注損傷及其保護(hù)是關(guān)系到肢體功能恢復(fù)的重要問題。本研究旨在探討參附注射液對肢體缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。1  實(shí)驗(yàn)材料1.1  動(dòng)物    SPF級雄性

8、SD大鼠30只,體重250300 g,甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2  試劑與藥物    髓過氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)試劑盒,由南京建成生物工程研究所提供。參附注射液系醫(yī)用注射液,雅安三九藥業(yè)有限公司產(chǎn)品,批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z51020664,批號041106。2  實(shí)驗(yàn)方法2.1  造模    2%戊巴比妥鈉(首次40 mg/kg體重,維持量20 mg/kg體重)腹腔注射麻醉后,參照Crinnion1法建立大鼠后肢骨骼肌缺血再灌注損傷模型。2.2  分組  

9、;  實(shí)驗(yàn)前12 h禁食,自由飲水,隨機(jī)分為3組。A組(對照組)10只,僅麻醉及頸外靜脈插管術(shù)；B組(缺血再灌注治療組)10只,缺血4 h后放開止血帶,再灌注4 h；C組(參附注射液治療組)10只,再灌注前15 min自頸外靜脈給參附注射液5 mg/kg；而B組僅給予等量的生理鹽水作為對照。再灌注4 h即頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物,于后肢腓腸肌取材。2.3  觀測指標(biāo)及方法    MDA、MPO檢測嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行。濕重/干重(W/D)測定：取腓腸肌200 mg立即測其濕重,然后于80 恒溫干燥箱中干燥48 h,再測干重,最后計(jì)算W/D,以反映組織水腫程度。另取材按酶組織化學(xué)常規(guī)制作標(biāo)本并分別進(jìn)行細(xì)胞色素氧化酶(CCO)及鈣激活A(yù)TP酶(Ca2+-ATPase)組織化學(xué)染色和活性觀察,CCO按DAB法,Ca2+-ATPase按Chayen法2。標(biāo)本切成1 mm×1 mm×1 mm大小,用3%戊二醛固定,Epon包埋,醋酸鈾和枸椽酸鉛雙重染色,所有反應(yīng)根據(jù)切片著色深淺在10×40倍光鏡下定性。用陰性(,不著色)、弱陽性(±,介于陰性和陽性之間,稍著色,但不足以達(dá)到陽性水平)、陽性(,Ca2-ATPase為淡棕色,CCO為淡茶褐色)、中等陽性(,Ca2-ATPa