趨化因子CCL5在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑液炎性細(xì)胞中的表達(dá)

1、         06-07-05 17:05:00     編輯：studa20             作者：劉寧濤，楊明輝，袁國華，魏 錦 【摘要】  目的  探討趨化因子CCL5 (RANTES) 在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的產(chǎn)生來源。方法  用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定28例RA患者血清滑液中CCL5水平，

2、并對(duì)患者外周血白細(xì)胞和滑液炎性細(xì)胞體外產(chǎn)生CCL5進(jìn)行研究。結(jié)果  RA患者血清和滑液CCL5水平均明顯高于OA患者，RA血清CCL5水平與關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、ESR、CRP呈正相關(guān)。RA患者滑液炎性細(xì)胞體外產(chǎn)生CCL5水平較外周血白細(xì)胞高。結(jié)論  血清CCL5水平與RA的活動(dòng)性病變相關(guān)，RA患者滑液炎性細(xì)胞是CCL5產(chǎn)生的主要來源。    【關(guān)鍵詞】  關(guān)節(jié)炎；類風(fēng)濕；趨化因子；CCL5/RANTES    Production of CC chemokine CCL5 in synovial fluid i

3、nflammatory cells from patients with rheumatoid arthritis       【Abstract】  Objective  To determine the CC chemokine CCL5 (RANTES) level in serum and synovial fluid (SF) from patients with rheumatoid arthritis (RA)，and the expression of CCL5 in synovial fluid

4、inflammatory cells.Methods  CCL5 in serum and SF was quantified by ELISA in 28 RA patients and 21 OA patients. The production of CCL5 by SF inflammatory cells in vitro was also determined ，and compared with that by peripheral white blood cells.Results  Serum CCL5 level in RA was higher tha

5、n that in OA， moreover the concentration of CCL5 in SF was greater than in serum in RA. Serum CCL5 level correlated significantly with joint swelling index， ESR and CRP. Higher production of CCL5 was found in SF inflammatory cells from RA as compared with SF inflammatory cells from OA， and periphera

6、l white blood cells from RA.Conclusion  The increased level of CCL5 in RA， as well as the correlation of serum CCL5 with clinical and laboratory parameters of RA， indicate that CCL5 play an important role in RA. The increased production CCL5 by SF inflammatory cells suggests that those cells ar

7、e main source of CCL5 secretion in RA.    【Key words】  arthritis  rheumatoid  chemokine  CCL5    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種常見的慢性炎性關(guān)節(jié)炎，其病理特點(diǎn)為大量炎性細(xì)胞在滑膜的浸潤和在滑液的滲出，及由此導(dǎo)致滑膜增生、血管翳形成，最終造成關(guān)節(jié)軟骨破壞。近期的研究顯示，趨化因子（chemokine）在RA的炎性細(xì)胞關(guān)節(jié)浸潤中起著極為重要的作用1?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)CC亞族趨化因子受體5（CCR5）在RA關(guān)節(jié)浸潤的

8、炎性細(xì)胞中表達(dá)增高2，提示RA患者病變關(guān)節(jié)內(nèi)CCR5的配體產(chǎn)生增多，選擇性地趨化CCR5陽性白細(xì)胞亞群進(jìn)入炎性關(guān)節(jié)部位。本文通過采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定RA患者血液和滑液中CCR5配體CCL5 （又稱調(diào)節(jié)活化的正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的因子(Regulated  on  Activation  Normal  T  Cell  Expressed  and Secreted，RANTES)）水平，并對(duì)RA患者外周血白細(xì)胞、滑液炎性細(xì)胞產(chǎn)生CCL5進(jìn)行體外研究，以探討CCL5與RA的相關(guān)性，及其在RA患者的產(chǎn)生來源。&

9、#160;   1  資料與方法      一般資料  在本院就診RA患者28例，男5例，女23例，年齡2167歲，平均年齡38歲，病程6個(gè)月19年，平均7.8年。所有病人均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)3，且病情處于活動(dòng)期。病人取空腹外周血，分離血清后置-20冰箱保存?zhèn)溆谩?duì)28例患者中11例有膝關(guān)節(jié)積液的患者，在無菌條件下行膝關(guān)節(jié)穿刺，抽取關(guān)節(jié)液后，1000r/min，離心10min，取上清液置-20冰箱保存?zhèn)溆茫恋碛脽o菌PBS洗3次后，收集滑液中炎性細(xì)胞，同時(shí)收集并記錄RA的臨床資料，包括晨僵時(shí)

10、間、握力、關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛指數(shù)、關(guān)節(jié)X線病變程度、血沉、C反應(yīng)蛋白（CRP）和類風(fēng)濕因子（RF）等實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。    另選骨關(guān)節(jié)炎（OA）患者21例作為對(duì)照，其中男7例，女14例，年齡3678歲，平均年齡45.2歲，病程1.215年，平均9.6年。對(duì)并發(fā)膝關(guān)節(jié)積液的6例OA患者，同時(shí)行膝關(guān)節(jié)穿刺，抽取關(guān)節(jié)液分離上清和細(xì)胞。      CCL5測(cè)定  CCL5測(cè)定采用ELISA方法，CCL5定量測(cè)定試劑盒（美國RD公司生產(chǎn)）測(cè)定敏感度為3.1pg/ml，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。  

11、60; 外周血白細(xì)胞和滑液炎性細(xì)胞體外產(chǎn)生CCL5的研究  對(duì)抽取關(guān)節(jié)液的11例RA和6例OA患者，另取外周抗凝血10ml，離心去血漿后加2倍體積冷無菌0.2%氯化鈉溶液，振蕩混勻10s后迅速加入等體積無菌1.6%氯化鈉溶液，在4，1000r/min，離心5min，去上清，重復(fù)裂解紅細(xì)胞12次，用無菌冷PBS 洗2次后，加2ml RPMI1640培養(yǎng)液（含10%小牛血清，100U/ml青霉素和100g/ml鏈霉素）懸浮沉淀細(xì)胞，混勻后取10l行臺(tái)盼蘭染色，活細(xì)胞計(jì)數(shù)。收集到的外周血白細(xì)胞和滑液炎性細(xì)胞用上述培養(yǎng)液稀釋成105/ml，按每孔0.5ml接種于24孔培養(yǎng)板，置含5%CO2孵

12、育箱中，于37培養(yǎng)48h，收集上清，按上述ELISA測(cè)定CCL5。       統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  兩組間計(jì)數(shù)資料用t檢驗(yàn)，血清CCL5水平與臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析采用直線相關(guān)回歸分析。    2  結(jié)果     血清和關(guān)節(jié)液CCL5測(cè)定結(jié)果  RA和OA患者血清和關(guān)節(jié)液CCL5的測(cè)定結(jié)果見圖1。對(duì)照RA患者血清CCL5水平與臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)分析結(jié)果顯示：血清CCL5水平與關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)（r=0.3229，P0.05），ESR（r=0.4001，P0.05）和CRP（r=0.3735 ， P0.01）呈顯著正相關(guān)（圖2，圖3，圖4），而與晨僵、握力、關(guān)節(jié)疼痛指數(shù)及RF相關(guān)性不明顯。