《高三生物復(fù)習(xí)資料》實驗2-分離以尿素為氮源的微生物

1、整理課件實驗實驗2 2 分離分離以尿素為氮源的以尿素為氮源的微生物微生物整理課件 土壤中的某些細(xì)菌土壤中的某些細(xì)菌 尿素尿素 NH3 中性中性 堿性堿性 酚紅顏色：酚紅顏色： 黃色黃色 紅色紅色任務(wù)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。整理課件（1）將土壤中的固氮菌分離出來（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基整理課件配制培養(yǎng)基 尿素培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基 K2HPO4 瓊脂糖瓊脂糖 水水 25mL 尿素溶液尿素溶液 10mL選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純

2、化的混合物瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物內(nèi)含一定量的含氮化合物該培養(yǎng)基如何滅菌？該培養(yǎng)基如何滅菌？尿素溶液用尿素溶液用G6G6玻璃漏斗過濾，玻璃漏斗過濾，其他用高壓蒸汽滅菌。其他用高壓蒸汽滅菌。整理課件2 2、要驗證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基、要驗證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對土壤中的細(xì)菌確實具有選擇作用，你對土壤中的細(xì)菌確實具有選擇作用，你該如何設(shè)計實驗。該如何設(shè)計實驗。思考：思考： 整理課件配制培養(yǎng)基 尿素培養(yǎng)基 K2HPO4 瓊脂糖 尿素 10ml LB培養(yǎng)基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 瓊脂糖： 0.5g 對照組對照組選擇培養(yǎng)基選擇培

3、養(yǎng)基實驗組實驗組整理課件3 3、請你提供一種方法，判斷分解、請你提供一種方法，判斷分解尿素的細(xì)菌確實能將尿素分解成氨。尿素的細(xì)菌確實能將尿素分解成氨。思考：思考： 方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑中加入酚紅指示劑, ,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。整理課件二、實驗?zāi)康亩?、實驗?zāi)康? : 使用以尿素為使用以尿素為唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌的培養(yǎng)基分離細(xì)菌( (有脲有脲酶酶) ) 通過指示劑（酚紅）通過指示劑（酚紅）顏色的變化顏色的變化檢知檢知培養(yǎng)基培養(yǎng)基pHpH的變

4、化的變化( (脲酶催化的化學(xué)反應(yīng)脲酶催化的化學(xué)反應(yīng)) ) 統(tǒng)計被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源的微生統(tǒng)計被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量物的數(shù)量整理課件三、實驗步驟三、實驗步驟（1）制備細(xì)菌懸液制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液得得10-2, 10-3, 10-4的菌懸液的菌懸液1g土壤土壤整理課件（2 2）倒平板）倒平板 需要倒3個LB平板，9個尿素平板LB(對照)尿素10-310-410-5每個稀釋度每個稀釋度 3個個LB對照平板對照平板 3個尿素平板個尿素平板(平行重復(fù)組平行重復(fù)組)整理課件接種 取菌懸液整理課件涂布分離高濃度高濃度低濃度，換槍頭低濃度，

5、換槍頭低濃度低濃度高濃度，可不用換槍頭高濃度，可不用換槍頭整理課件涂布分離整理課件整理課件37倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞按濃度捆成一摞恒溫恒溫37培養(yǎng)培養(yǎng)整理課件三、實驗中涉及到的一些問題：三、實驗中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（選材的問題）（二）此實驗用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（二）此實驗用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對尿素分解能力的高低？對尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計微生物的數(shù)量可用哪些方法

6、？（四）統(tǒng)計微生物的數(shù)量可用哪些方法？腐殖質(zhì)豐富的土壤，或哺乳動物排泄物的地方取樣。腐殖質(zhì)豐富的土壤，或哺乳動物排泄物的地方取樣。水、無機(jī)鹽、碳源、尿素、酚紅、瓊脂糖水、無機(jī)鹽、碳源、尿素、酚紅、瓊脂糖培養(yǎng)基紅色的深淺培養(yǎng)基紅色的深淺涂布分離法，用血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)涂布分離法，用血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)整理課件利用血細(xì)胞計數(shù)板的缺點(diǎn)利用血細(xì)胞計數(shù)板的缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌不能區(qū)分死菌與活菌不適于對運(yùn)動的細(xì)菌計數(shù)不適于對運(yùn)動的細(xì)菌計數(shù)需要相對高的細(xì)菌濃度需要相對高的細(xì)菌濃度個體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察個體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察整理課件三、實驗中涉及到的一些問題：三、實驗中涉

7、及到的一些問題：（五）用不同濃度涂布分離法計數(shù)時，發(fā)現(xiàn)菌落過（五）用不同濃度涂布分離法計數(shù)時，發(fā)現(xiàn)菌落過密，該如何進(jìn)一步操作？密，該如何進(jìn)一步操作？重復(fù)性原則重復(fù)性原則對照原則對照原則做一系列濃度梯度實驗，探究合適的稀釋度做一系列濃度梯度實驗，探究合適的稀釋度（以培養(yǎng)皿中（以培養(yǎng)皿中20個左右菌落為宜）個左右菌落為宜）（六）實驗設(shè)計要遵循的原則：（六）實驗設(shè)計要遵循的原則：整理課件1 1、土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們試圖探究土壤中微、土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們試圖探究土壤中微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計了以下實驗，并成功篩選到生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計了以下實驗，并成功

8、篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如表所示，實能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如表所示，實驗步驟如圖所示。請分析回答：驗步驟如圖所示。請分析回答：KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10 g10 g尿素尿素1 g1 g瓊脂瓊脂15 g15 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到水定容到100 mL100 mL （1 1）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選 ，這種培養(yǎng)基屬，這種培養(yǎng)基屬于于 培

9、養(yǎng)基。培養(yǎng)基。（2 2）“目的菌目的菌”生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的 和和 ，實驗需要振蕩培養(yǎng)，原因是，實驗需要振蕩培養(yǎng)，原因是 目的菌目的菌選擇選擇尿素尿素 為目的菌提供氧氣為目的菌提供氧氣 葡萄糖葡萄糖 整理課件（3 3）圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時，常采用）圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時，常采用 的方的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。（4 4）在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實驗時，）在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實驗時，A A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約出大約150150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約5050個菌落。個菌落。A A同學(xué)的同學(xué)的實驗結(jié)果產(chǎn)生的原因