巰甲丙脯酸和倍他樂克對高血壓大鼠左心室MHC基因表達(dá)的影響

1、    巰甲丙脯酸和倍他樂克對高血壓大鼠左心室MHC基因表達(dá)的影響            關(guān)鍵詞：高血壓；肌球蛋白；卡托普利    中國病理生理雜志000803    摘 要 目的和方法:采用核酸斑點(diǎn)雜交技術(shù)，測定雙腎雙夾(2K2C)腎性高血壓大鼠早期左心室肌球蛋白重鏈(MHC)基因表達(dá)的變化，及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑巰甲丙脯酸和-受體阻斷劑倍他樂克對該變化

2、的影響。結(jié)果:2K2C組大鼠術(shù)后24 h，左心室-MHC mRNA水平即有所降低， 72h時(shí)明顯降低，為對照組的0.48倍(P<0.05)；與此相反，2K2C組-MHC mRNA水平，在術(shù)后24h已略有升高，72 h時(shí)明顯增加，為對照組的2.7倍(P<0.05)。巰甲丙脯酸可抑制2K2C引起的MHC基因表達(dá)的改變，而倍他樂克不能阻止該變化。結(jié)論:腎性高血壓早期,MHC基因表達(dá)發(fā)生改變，腎素血管緊張素系統(tǒng)可能起重要作用。    中分類號(hào) R544.1+4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A    文章編號(hào) 1000-4718

3、(2000)08-0681-04    Effect of captopril and betaloc on the changes in    expression of MHC of left ventricle in hypertensive rats    RUAN Hong-mei    (Department of Physiology，Guangzhou Medical College, Guangzhou 510182,

4、 China)    PAN Jing-yun    (Department of Physiology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089, China)    Abstract AIM：To investigate myosin heavy chain(MHC)gene expression and the effects of captopril and betaloc at an

5、early stage of hypertension. METHODS：Model of hypertension was made by partly narrowing two bilateral renal arteries(2K2C). The rats were divided into four groups at random. (1) control group; (2)2K2C group；(3)captopril group;(4)betaloc group.Levels of -MHC and -MHC mRNA were determined by dot-blot.

6、 RESULTS：-MHC mRNA expression were gradual1y reduced in 2K2C group，while -MHC mRNA expression were increased，and the marked changes were observed at 72h postoperation. Captopril could inhibit the changes in MHC gene expression; but betaloc could not. CONCLUSION: The expression of MHC gene has change

7、d at an early stage of renal hypertensive rat，and renin-angiotensin system may play an important role in this change.    MeSH Hypertension; Myosin; Captopril    肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain,MHC)基因表型的變化是心肌肥大的重要表現(xiàn)之一。在哺乳動(dòng)物心室肌中存在兩種MHC基因，即-MHC 基因和-MHC基因，其表達(dá)產(chǎn)物形成3種同型異構(gòu)體

8、，其中V1型含兩條相同的-MHC鏈，V3型含兩條相同的鏈。    正常成年大鼠以V1型占絕對優(yōu)勢，V3型為胚胎期的主要形式。主動(dòng)脈縮窄壓力超負(fù)荷大鼠心室肌由V1型向V3型遷移1，進(jìn)而引起心肌細(xì)胞功能改變，其機(jī)制尚不清楚。本工作用核酸雜交技術(shù)，研究雙腎雙夾(two-kidney two-clip, 2K2C)早期高血壓大鼠，左心室MHC基因轉(zhuǎn)錄的變化，以及巰甲丙脯酸和倍他樂克的作用，探討心肌肥大的可能機(jī)制。    材 料 和 方 法    一、實(shí)驗(yàn)分組  &

9、#160; 雄性SD大鼠體重80100 g(購自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)隨機(jī)分4組。(一)2K2C組 經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉(50 mg/kg，ip),無菌條件下切開腹腔，將銀夾(內(nèi)徑0.3 mm)安置于雙側(cè)腎動(dòng)脈起始部，造成雙側(cè)腎動(dòng)脈部分狹窄。(二)巰甲丙脯酸組 手術(shù)同2K2C組，術(shù)前3 d至實(shí)驗(yàn)結(jié)束服用巰甲丙脯酸，劑量為100 mg.kg-1.d-1，加至水中飲用，每日新鮮配制。(三)倍他樂克組 手術(shù)同2K2C組，術(shù)前3 d至實(shí)驗(yàn)結(jié)束服用倍他樂克，劑量為200 mg.kg-1.d-1，加至水中飲用。(四)對照組 除不上銀夾外，其余手術(shù)同2K2C組。   

10、60;二、平均動(dòng)脈血壓(MAP)和左心室重量測定    術(shù)后24 h、36 h、48 h、72 h，麻醉，稱體重，由右頸總動(dòng)脈插管經(jīng)壓力換能器四導(dǎo)生理記錄儀(RM-6000，日本光電廠)測血壓。開胸取出心臟，留取左心室(含室間隔)并稱重，測定左心室重量/體重比值。    三、左心室總RNA提取及-MHC和-MHC mRNA水平的測定    用硫氰酸胍-酚-氯仿一步法2提取左心室總RNA,-MHC和-MHC探針各含20個(gè)核苷酸3(上海細(xì)胞生物學(xué)研究所合成)，用T4噬菌體多核苷酸

11、酶(Pharmacia Co.產(chǎn)品)在其5端標(biāo)記-32P(購自北京福瑞生物工程公司)，依方法4在液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢測counts.min-1，探針比活度達(dá)3×l08 counts.min-1.g-1，探針標(biāo)記率為40%。各樣品取8.0 g總RNA，采用Dot一blot進(jìn)行雜交分析3，放射自顯影后，剪下雜交纖維膜上各斑點(diǎn)放入5 mL液閃劑中，作液體閃爍計(jì)數(shù)。    四、統(tǒng)計(jì)分析    每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，數(shù)據(jù)以±s表示，t檢驗(yàn)和方差分析。    結(jié) 果 

12、;   一、 平均動(dòng)脈血壓(MAP)和左心室重量/體重比(LVW/BW)    表1 各實(shí)驗(yàn)組術(shù)后不同時(shí)間MAP的水平    Tab 1 Characteristics of 2K2C ,captopril and betaloc on MAP after 2K2C(±s,n=6)    24h    36h    48h   

13、 72h    Control    14.28±0.50    14.17±1.17    12.75±1.16    13.11±1.46    2K2C    15.42±0.97    16.31±0.

14、19.    19.46±4.71. .    23.77±1.93. .    2K2C+captopril    11.91±1.68    10.09±1.47    12.84±1.14    11.06±0.63   &

15、#160;2K2C+betaloc    12.56±2.2    11.43±1.37    12.17±0.94    13.02±2.50    .P<0.05,. .P<0.01, vs control    雙腎雙夾36 h，大鼠動(dòng)脈血壓明顯高于假手術(shù)組，并持續(xù)72 h。巰甲丙脯酸組、倍他樂克組血

16、壓術(shù)后36 h開始，明顯低于2K2C組；在各對應(yīng)時(shí)點(diǎn)，與對照組無顯著差異。觀察期間(表2)，各實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組LVW/BW比值均接近，無顯著差異(P>0.05)。在2K2C組術(shù)后24h,36h,48h和72h時(shí)，LVW/BW比值與對照組比無明顯差異(P>0.05)。    表2 各實(shí)驗(yàn)組術(shù)后不同時(shí)間LVW/BW的水平    Tab 2 Characteristics of 2K2C,captopril and betaloc on LVW/BW (×10-3)after 2K2C (

17、±s,n=6)    24h    36h    48h    72h    Control    3.37±0.18    2.92±0.27    2.89±0.09    3.37±0

18、.16    2K2C    3.68±0.03    3.44±0.14    4.05±0.40    4.22±0.20    2K2C+captopril    3.34±0.09    2.88±0.02

19、60;   3.34±0.11    3.43±0.33    2K2C+betaloc    3.24±0.21    4.03±0.07    4.11±0.19    3.92±0.27    二、 左心室-MHC和-MHC

20、 mRNA水平的變化    (一)-MHC和-MHC 基因表達(dá)的時(shí)間過程 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，對照組-MHC和-MHC mRNA水平無明顯差異(P>0.05)(結(jié)果未顯示)。2K2C組大鼠在術(shù)后24 h，-MHC表達(dá)低于對照組。36 h后，隨腎動(dòng)脈縮窄時(shí)間延長,-MHC mRNA含量逐漸減少，72 h時(shí)左心室-MHC表達(dá)水平僅有(243±34.5) counts.min-1，明顯低于對照組-MHC mRNA水平(497.0±23.6) counts.min-1(P<0.05)。與-MHC 變化相反，2K2C組大鼠左心室-MHC

21、 mRNA水平在術(shù)后24h高于對照組，并隨腎動(dòng)脈縮窄時(shí)間延長,表達(dá)亦越來越強(qiáng)。72 h時(shí)，-MHC 表達(dá)水平為(381.7±93.6) counts.min-1，明顯高于對照組(141.0±10.4) counts.min-1(P<0.05)(1)。    (二)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑巰甲丙脯酸(captopril)的作用 2K2C組術(shù)后72 h時(shí)，左心室-MHC顯著少于對照組。在對應(yīng)時(shí)點(diǎn)，巰甲丙脯酸組左心室-MHC mRNA水平均高于2K2C組，72 h時(shí)有顯著差異，為2K2C組的1.45倍(P<0.05)；與對照組間無

22、明顯差異(P>0.05)。2K2C組大鼠，術(shù)后48 h、72 h時(shí)，左心室-MHC表達(dá)明顯高于對照組，分別達(dá)到(257.67±6.7) counts.min-1和(381.7±33.6) counts.min-1。巰甲丙脯酸組大鼠，術(shù)后36 h、48 h、72 h, -MHC表達(dá)均少于2K2C組，72 h時(shí)為(152.3±7) counts.min-1，有顯著差異(P<0.05)；與對應(yīng)時(shí)點(diǎn)對照組的-MHC含量(134.3±17.3) counts.min-1接近(P>0.05)。結(jié)果表明，巰甲丙脯酸能夠逆轉(zhuǎn)2K2C腎性高血壓早期左心室

23、MHC基因表達(dá)的改變(2)。    Fig 1 Dot-blot analysis of MHC mRNA levels in 2K2C hypertension rats    1 斑點(diǎn)雜交分析2K2C高血壓大鼠左心室MHC基因表達(dá)    Fig 2 Dot-blot analysis of effect of captopril on MHC gene expression in 2K2C hypertension rats at 72h post-operation&#

24、160;   2 斑點(diǎn)雜交分析captopril對2K2C術(shù)后72h大鼠左心室MHC基因表達(dá)的影響    (三)-腎上腺素能受體阻斷劑倍他樂克(betaloc)的作用 為進(jìn)一步探討2K2C引起MHC基因表型轉(zhuǎn)換的作用機(jī)制，大鼠預(yù)先服用等效降壓作用的降壓藥倍他樂克，再接受2K2C手術(shù)。術(shù)后72 h，倍他樂克組-MHC 表達(dá)量為(289.7±31.4) counts.min-1，與2K2C組(257±48.3) counts.min-1水平接近(P>0.05)；仍明顯低于對照組(406.0±23.5) counts.min-1(P<0.05)。2K2C組術(shù)后72 h，-MHC表達(dá)已明顯高于對照組(1)；倍他樂克組血壓雖然正常，左心室-MHC mRNA含量