本實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)是在龔寧所編細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(2003年

1、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)前 言本實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)是在龔寧所編細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（2003年2月）的基礎(chǔ)上修訂而成，此次修訂是根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的變化進(jìn)行的，刪除了已經(jīng)納入生物技術(shù)大實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容，增設(shè)了微分干涉差顯微鏡的使用、電子顯微鏡演示、細(xì)胞凋亡等內(nèi)容。本實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)編寫過程中參考了楊漢民主編細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（1997年7月第二版）、李素文主編細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（2001年10月第一版）和中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院所編細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（2000年4月），設(shè)置了15個(gè)實(shí)驗(yàn)，使用時(shí)可根據(jù)當(dāng)時(shí)的具體情況選作10個(gè)。 由于編者的水平有限，本指導(dǎo)中難免錯(cuò)漏之處，懇請(qǐng)使用本指導(dǎo)的師生提出批評(píng)和建議，以便及時(shí)修改。 編 者2007年1月

2、3日細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)目錄實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察及大小測(cè)定1實(shí)驗(yàn)二 微分干涉差顯微鏡的使用2實(shí)驗(yàn)三 口腔上皮細(xì)胞的熒光觀察4實(shí)驗(yàn)四 葉綠體的提取5實(shí)驗(yàn)五 植物材料中DNA的提取6實(shí)驗(yàn)六 細(xì)胞膜的滲透性8實(shí)驗(yàn)七 光鏡下植物細(xì)胞骨架的制片技術(shù)及觀察10實(shí)驗(yàn)八 線粒體和液泡系的超活染色與觀察 11實(shí)驗(yàn)九 DNA的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)Feulgen反應(yīng) 13實(shí)驗(yàn)十 RNA的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)Unna 反應(yīng) 15實(shí)驗(yàn)十一 小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動(dòng)的觀察17實(shí)驗(yàn)十二 聯(lián)會(huì)復(fù)合體的染色與觀察18實(shí)驗(yàn)十三 去壁低滲法制備植物染色體標(biāo)本19實(shí)驗(yàn)十四 細(xì)胞凋亡22實(shí)驗(yàn)十五 透射及掃描電鏡演示實(shí)驗(yàn)23實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的

3、觀察及大小測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、觀察幾種細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)2、掌屋用測(cè)微尺測(cè)定細(xì)胞大小的原理和方法二、實(shí)驗(yàn)原理：測(cè)微尺分物鏡測(cè)微尺（簡稱物微尺或臺(tái)微尺）和目鏡測(cè)微尺（簡稱目微尺），兩者配合使用，可以測(cè)量細(xì)胞大小。目微尺是一個(gè)可以放在目鏡內(nèi)的特制玻璃園片，園片中央刻有一條直線，此線分為若干格。物微尺為一載玻片中央封固的小尺，長1mm，被等分為100格，長為0.01mm(10m)。當(dāng)測(cè)量細(xì)胞大小時(shí)，不能用物微尺直接測(cè)量細(xì)胞，而只能使用目微尺。因目微尺測(cè)量的細(xì)胞是經(jīng)物鏡放大后的像，而它每格所代表的實(shí)際長度隨物鏡的放大率而變，在測(cè)量時(shí)需要先用物微尺來標(biāo)定，求出某一放大率時(shí)目微尺每格所代表的實(shí)際長度，然后再

4、用以測(cè)定細(xì)胞大小。將物微尺放在顯微鏡的載物臺(tái)上，小心轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡測(cè)微尺，移動(dòng)物微尺使兩尺平行，起點(diǎn)線重合，然后找出另一處兩尺刻度重合處，記錄起點(diǎn)線到重合線之間的各尺的刻度數(shù)（格數(shù)），按下式計(jì)算，在該放大系統(tǒng)下目微尺每格所代表的實(shí)際長度： 物微尺格數(shù)目微尺每格所代表的實(shí)際長度= 10m 目微尺格數(shù) 例如：目微尺是100格，其對(duì)應(yīng)的物微尺是80格，則目微尺每格所代表的實(shí)際長度為80/10010=8m。測(cè)量某一細(xì)胞時(shí)，如果目微尺測(cè)得其橫徑為5格，則此細(xì)胞橫徑為85=40m。三、實(shí)驗(yàn)用品：普通光學(xué)顯微鏡 載玻片 蓋玻片 鑷子 消毒牙簽 燒杯 吸管 0.9%生理鹽水蒸餾水 吸水紙。四、實(shí)驗(yàn)材料：口腔黏膜上皮

5、細(xì)胞；洋蔥內(nèi)表皮；葫蘆蘚葉片；保存于阿氏液中的雞血；甜椒五、方法步驟：（一）、細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察：1、人口腔上皮細(xì)胞的觀察：1）、在潔凈的載玻片中央，滴一滴生理鹽水。2）、用消毒牙簽的一端，在漱凈的口腔側(cè)壁上輕輕地刮幾下。3）、把牙簽上附有碎屑的一端，放在載玻片上的生理鹽水滴中涂抹幾下。4）、用鑷子夾起潔凈的蓋玻片，將它的一邊先接觸載玻片上的生理鹽水滴，然后，輕輕地蓋在水滴上。 5）、用顯微鏡觀察細(xì)胞形狀，細(xì)胞呈扁平鱗狀。2、取洋蔥內(nèi)表皮，同上法制作臨時(shí)裝片（將生理鹽水換成蒸餾水），用顯微鏡觀察，可見長條狀的洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞3、取葫蘆蘚葉片，制作臨時(shí)裝片（制作方法同洋蔥內(nèi)表皮），用顯微鏡觀察，可

6、見內(nèi)含許多葉綠體的葉細(xì)胞，細(xì)胞呈什么形狀？4、制作雞血涂片，用顯微鏡觀察紅細(xì)胞5、取甜椒一片，用刀片刮去果肉，將表皮制成臨時(shí)裝片，用顯微鏡觀察表皮細(xì)胞，能看見胞間連絲嗎？（二）、細(xì)胞大小的測(cè)定：1、將目微尺放于目鏡內(nèi)2、將物微尺放在顯微鏡的載物臺(tái)上3、小心轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡測(cè)微尺，移動(dòng)物微尺使兩尺平行，起點(diǎn)線重合，然后找出另一處兩尺刻度重合處4、記錄起點(diǎn)線到重合線之間的各尺的刻度數(shù)（格數(shù)），按下式計(jì)算，在該放大系統(tǒng)下目微尺每格所代表的實(shí)際長度： 物微尺格數(shù)目微尺每格所代表的實(shí)際長度= 10m 目微尺格數(shù) 5、將制作的各種細(xì)胞臨時(shí)裝片置于載物臺(tái)上，測(cè)定細(xì)胞的大?。òㄩL徑和短徑）。六、注意事項(xiàng)：1、制作臨

7、時(shí)裝片時(shí)避免產(chǎn)生氣泡2、用物微尺標(biāo)定的目微尺每格長度的數(shù)值代表在某一放大系統(tǒng)下的情況，這一數(shù)值會(huì)隨物鏡的放大率而改變，因此，在什么放大倍數(shù)物鏡下標(biāo)定的目微尺只能在同一放大倍數(shù)的物鏡下測(cè)定細(xì)胞的大小。七、作業(yè)：1、繪出你所觀察到的洋蔥表皮細(xì)胞和葫蘆蘚葉細(xì)胞圖，指出各部分的名稱。2、列表說明你所測(cè)出的幾種細(xì)胞的大小。實(shí)驗(yàn)二 微分干涉差顯微鏡的使用用微分干涉差顯微鏡觀察口腔上皮細(xì)胞一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.了解微分干涉差顯微鏡觀察活細(xì)胞的原理2.了解微分干涉差顯微鏡的特殊組件和位置3.掌握微分干涉差顯微鏡的基本操作步驟二、實(shí)驗(yàn)原理：微分干涉差顯微鏡是根據(jù)通過物體內(nèi)只分開1um或者更短距離的2束相干的光之間的

8、相位差設(shè)計(jì)的，使標(biāo)本內(nèi)鄰近2點(diǎn)的光程差被顯微鏡中特殊的光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹ü鈴?qiáng)度）的變化。從而可以觀察到標(biāo)本內(nèi)細(xì)微的結(jié)構(gòu)，所以稱為微分干涉差顯微鏡。根據(jù)照明方式，微分干涉差顯微鏡分為落射式和透視式2種，生物學(xué)和醫(yī)學(xué)觀察中多采用透射式微分干涉差顯微鏡。微分干涉差顯微鏡包含2塊正交的偏光鏡：一塊靠近光源，稱為起偏鏡：另一塊靠近目鏡，稱為檢偏鏡。在起偏鏡和聚光鏡之間放置第一塊渥氏棱鏡，在物鏡和檢偏鏡之間放置第二塊渥氏棱鏡，這就是微分干涉差顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)。其基本原理是：來自光源的自然光經(jīng)過起偏鏡后成為線偏振光，以45度方位角（入射光偏振方向與晶體光軸之間的夾角）垂直入射到第一塊渥氏棱鏡，這時(shí)入射偏光

9、分解為振動(dòng)方向互相垂直、傳播方向一致的O光和E光，穿過第一塊渥氏棱鏡的中心點(diǎn)后，由于晶體光軸方向的改變，O光和E光從中心點(diǎn)散發(fā)開一個(gè)很小的角度，經(jīng)過聚光鏡后產(chǎn)生出間隔只有1um甚至更短些的平行光，穿過樣品的2個(gè)點(diǎn)。由于光線通過標(biāo)本的2個(gè)點(diǎn)的光程長度不同，2束光線的相位都發(fā)生了變化，帶有標(biāo)本2個(gè)鄰近點(diǎn)的相位差信息的這2束線偏振光通過物鏡后，會(huì)聚在第2塊渥氏棱鏡的中心點(diǎn)，組合在一起的這2束線偏振光相位差不同，偏振方向互相垂直，不能直接干涉成像。當(dāng)它們通過檢偏鏡后成為振動(dòng)面相同、頻率相同且具有一定相位差的相干光束，因而在中間像平面上形成干涉的物像。三、實(shí)驗(yàn)用品：微分干涉差顯微鏡 載玻片 蓋玻片 鑷子

10、 消毒牙簽 燒杯 吸管 0.9%生理鹽水 吸水紙。四、實(shí)驗(yàn)材料：口腔黏膜上皮細(xì)胞五、方法步驟：（一）、制作人的口腔上皮細(xì)胞的臨時(shí)裝片1.在潔凈的載玻片中央，滴一滴生理鹽水。2.用消毒牙簽的一端，在漱凈的口腔側(cè)壁上輕輕地刮幾下。3.把牙簽上附有碎屑的一端，放在載玻片上的生理鹽水滴中涂抹幾下。4.用鑷子夾起潔凈的蓋玻片，將它的一邊先接觸載玻片上的生理鹽水滴，然后，輕輕地蓋在水滴上。（二）、用微分干涉差顯微鏡觀察人的口腔上皮細(xì)胞1.將10×微分干涉差物鏡旋入光路，并調(diào)入相應(yīng)的渥氏棱鏡即N1。調(diào)焦距和起偏鏡使其與檢偏鏡正交，產(chǎn)生最好的圖像，并觀察細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。2.將40×微分干涉差物

11、鏡旋入光路，并調(diào)入相應(yīng)的渥氏棱鏡即N 2。調(diào)焦距和起偏鏡使其與檢偏鏡正交，產(chǎn)生最好的圖像，并觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)。六、注意事項(xiàng)：1.選取的載玻片的厚度在1mm左右，不要太厚；要清洗干凈。2.樣品制備時(shí)，防止產(chǎn)生氣泡。七、作業(yè):1.根據(jù)所觀察到的細(xì)胞，畫一個(gè)口腔上皮細(xì)胞圖，并且注出各部分的名稱.實(shí)驗(yàn)三、口腔上皮細(xì)胞的熒光觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、初步了解熒光顯微鏡的基本組件、位置和基本光路。2、初步掌握熒光顯微鏡的基本調(diào)節(jié)步驟。3、通過在熒光顯微鏡下觀察口腔上皮細(xì)胞的細(xì)胞核和線粒體，了解熒光探針與細(xì)胞成分的結(jié)合特性和光譜特性。二、實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)用的2種活細(xì)胞熒光探針分別為Hoechst 33342（Ho.

12、33342）和羅丹明123（Rho-damine 123）。Hoechst 33342（Ho.33342）是雙苯并咪唑類的一種衍生物,是一種親脂性物質(zhì),能跨膜進(jìn)入活細(xì)胞,在低濃度下毒性較弱.是一種能與DNA特異性結(jié)合的熒光探針,該探針的特點(diǎn)是既能與死細(xì)胞又能與活細(xì)胞的DNA特異性結(jié)合,因此被大量地應(yīng)用于活細(xì)胞觀察與定量的科學(xué)研究工作中。它的激發(fā)光波長約350nm，發(fā)射光波長約461nm。羅丹明123是一種親脂性陽離子熒光探針，也能穿過活細(xì)胞的膜。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，羅丹明123被線粒體吸收與電性吸引有關(guān)。線粒體內(nèi)膜本身因富含負(fù)電性的糖蛋白而帶負(fù)電荷，內(nèi)膜外有大量質(zhì)子積累造成外正內(nèi)負(fù)的跨膜電位差。而羅丹明

13、123具有正電荷，由于電性相吸，特異地標(biāo)記上線粒體。它的激發(fā)光波長約507nm，發(fā)射光波長約為529nm?？捎盟{(lán)光激發(fā)，被標(biāo)記的線粒體發(fā)出綠色熒光。三、實(shí)驗(yàn)用品：1、 藥品：含5-10ug/ml Ho.33342的PBS(pH7·4)；含10ug/ml 羅丹明 123的PBS(pH7·4)2、 儀器和用具:熒光顯微鏡、溫箱、載玻片、蓋玻片、牙簽、濾紙條、鑷子、滴管等四、實(shí)驗(yàn)材料：口腔黏膜上皮細(xì)胞五、方法步驟：1、 用牙簽刮取口腔上皮黏膜細(xì)胞，分別涂于2張載玻片上。2、 在2張載玻片的涂細(xì)胞處分別滴加Ho33342染液和羅丹明染液各一滴，在37暗處孵育20-30min。3、

14、加蓋玻片（注意防止氣泡），用濾紙條吸掉蓋玻片周圍多余的水分。4、 熒光觀察細(xì)胞核：先關(guān)閉激發(fā)光，將滴加Ho33342染液的裝片至于透射光下，找到樣品焦面，再關(guān)閉透射光，置于激發(fā)光為紫外光（UV）、發(fā)射蘭色熒光的濾片組合塊下觀察細(xì)胞核。先用10×熒光物鏡觀察，再換用40×熒光物鏡觀察。5、 熒光觀察線粒體：先關(guān)閉紫外激發(fā)光，將滴加羅丹明123的載玻片置于透射光下，找到樣品焦面，再關(guān)閉透射光，置于激發(fā)光為蘭光、發(fā)射綠色熒光的濾片組合塊下觀察線粒體。先用10×熒光物鏡觀察，再換用40×熒光物鏡觀察。六、注意事項(xiàng)：1.蓋片時(shí)防止產(chǎn)生氣泡2.滴加的染料不宜太多，否

15、則背景太深，影響觀察3.注意避光，包括制片、熒光觀察和探針保存4.熒光探針都有一定的毒性，操作時(shí)防止污染皮膚和環(huán)境七、作業(yè)：根據(jù)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，填表細(xì)胞核線粒體熒光探針激發(fā)光發(fā)射光形態(tài)（畫出）實(shí)驗(yàn)四、葉綠體的提取一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^本實(shí)驗(yàn)掌握分離葉綠體的技術(shù)，并了解制備細(xì)胞器的一般程序。二、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞器的分離一般采用差速離心法，細(xì)胞經(jīng)過破碎后，在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中進(jìn)行差速離心，利用細(xì)胞各組分質(zhì)量大小不同，在不同離心力的作用下，即可得到所需的組分。三、實(shí)驗(yàn)用品：1、介質(zhì)的配制：A：配制0.5M的蔗糖水溶液B：磷酸鉀緩沖液:將KH2PO4(分析純)溶于A液中,使其濃度為0.1M,PH調(diào)至7.4C：完全介

16、質(zhì):將EDTA-Na2溶于B液中,使其濃度為10mM,PH調(diào)至7.42 、低速大容量離心機(jī)3、研缽一付4、尼龍織物或紗布5、臺(tái)秤；塑料杯2個(gè)（平衡時(shí)用）6、玻璃漏斗7、燒杯(200ml)2個(gè)；滴管1支；50ml量筒1個(gè)8、顯微鏡；擦鏡紙9、蓋玻片和載玻片10、吸水紙四.實(shí)驗(yàn)材料: 菠菜葉或玉米葉五.方法步驟:1、將材料洗凈吸干后,稱取鮮重10g,剪成1-2cm2小塊.2、加入20ml完全介質(zhì),在研缽中充分研碎（介質(zhì)可分步加入）3、用雙層尼龍織物或雙層紗布過濾4、汁液在1000rpm下離心5分鐘,棄去沉淀5、上清在2000rpm下離心12分鐘6、將沉淀懸浮于15mlA液中,再以2000rpm離心

17、12分鐘,所得沉淀即為純化的葉綠體7、將沉淀懸浮于約3mlA液中。8、制片，在高倍鏡下觀察9、在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的自發(fā)熒光（蘭光作激發(fā)光，葉綠體發(fā)出火紅色熒光）。六、注意事項(xiàng)：1、離心前要先平衡2、研磨時(shí)可先加部分介質(zhì)，待研磨成勻漿后再加入剩余介質(zhì)，介質(zhì)過多不便研磨六、作業(yè):繪制所觀察到的葉綠體實(shí)驗(yàn)五、植物材料中DNA的提取一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 通過本實(shí)驗(yàn)了解用氯仿-異戊醇提取DNA的方法及原理二、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞經(jīng)過破碎后，加入適當(dāng)介質(zhì)配合離心以脫除各種雜質(zhì)，再用乙醇沉淀，DNA便以纖維狀沉淀析出。三、實(shí)驗(yàn)用品:1、藥品：1）研磨緩沖液含0.45M NaCl, 0.045M檸檬酸三鈉,0.1M

18、 EDTA, 1%SDS(十二烷基硫酸鈉)PH7.02）5M高氯酸鈉溶液3）氯仿4）異戊醇5）95%預(yù)冷乙醇6）0.1xSSC溶液(0.015M氯化鈉,0.0015M檸檬酸三鈉,PH7.0)7）10xSSC溶液(1.5M氯化鈉,0.15M檸檬酸三鈉,PH7.0)8）RNA酶溶液:RNA酶在0.15M綠化鈉溶液(PH5.0)中溶解,并在80oC水浴中保溫10分鐘,以滅活可能染的DNA酶.然后冷卻,在低溫下保存?zhèn)溆?2、用具：1）磨口三角瓶2）離心機(jī)3）細(xì)口吸管、燒杯、量筒等4）恒溫水浴鍋5）研缽四、實(shí)驗(yàn)材料: 韭菜、玉米幼苗或豌豆幼苗 五、方法步驟:1、將材料洗凈吸干,稱取20g,剪碎后放入研缽

19、,加入30ml研磨緩沖液,然后劇烈研磨,使之成為漿狀物2、將漿狀物倒人磨口三角瓶內(nèi),加等體積的氯仿-異戊醇(24:1v/v)混合液,加上瓶塞,劇烈搖晃30秒鐘,以脫除組織蛋白質(zhì)3、在室溫下離心(4000rpm)5分鐘,這時(shí)混合物會(huì)形成三層,用細(xì)口吸管小心地吸取上層含有核酸的水溶液,棄去中間的細(xì)胞碎片、變性蛋白質(zhì)及下層的氯仿4、將收集的水溶液倒入一個(gè)在70oC水浴中預(yù)熱的三角瓶中,并在70oC下繼續(xù)保溫3-4分鐘(不要超過4分鐘),以滅活組織內(nèi)DNA酶,然后訊速取出三角瓶,放在冰水浴中冷卻到室溫5、加入5M高氯酸鈉溶液（4：1v/v），使溶液中高氯酸鈉的最終濃度為1M6、再次加入等體積的氯仿-異

20、戊醇（24：1v/v）混合液，并在帶塞的三角瓶內(nèi)搖晃30秒鐘。7、將此乳濁液在室溫下離心（4000rpm）5分鐘后，收集上層含核酸的水溶液。8、將收集的水溶液置于燒杯內(nèi)，然后用滴管慢慢地加入二倍體積的95%預(yù)冷過的乙醇于水溶液表面上，用玻璃棒輕輕攪動(dòng)，此時(shí)核酸將訊速以纖維狀沉淀纏繞在玻璃棒上。9、 將核酸沉淀物在燒杯壁上輕輕擠壓以除去乙醇，然后溶解在適量的0·1×SSC溶液中。待完全溶解后，加入此溶液十分之一體積的10×SSC溶液，使之最終成為1×SSC溶液。10、按照（8）的步驟，再次用乙醇沉淀核酸，并按照（9）的步驟將核酸溶解，即得DNA粗制品。11

21、、加入RNA酶溶液使其最后作用的濃度為50-75ug/ml，并在37保溫30分鐘，以除去RNA。12、加入等體積的氯仿-異戊醇溶液（24：1v/v），在三角瓶內(nèi)搖晃30秒，再次除去殘留蛋白質(zhì)及所加的RNA酶。然后，按照（7）的方法離心并收集上層水溶液。13、 按照（8）再次沉淀DNA，并按照（9）的步驟將其溶解，即可得到純化的DNA溶液。六、注意事項(xiàng)： 1、水浴保溫時(shí)，三角瓶不要加蓋，否則加熱過程中可能將瓶蓋沖出2、用玻棒攪動(dòng)時(shí)宜慢不宜快，否則DNA會(huì)斷裂七、作業(yè)：1、實(shí)驗(yàn)中加入氯仿-異戊醇起什么作用？2、實(shí)驗(yàn)中加入高氯酸鈉溶液又起什么作用？實(shí)驗(yàn)六、細(xì)胞膜的滲透性 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私饧?xì)胞膜的

22、滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。二、 實(shí)驗(yàn)原理：紅細(xì)胞放置在數(shù)種等滲溶液中，根據(jù)紅細(xì)胞對(duì)各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可進(jìn)入，有的溶質(zhì)不能進(jìn)入，進(jìn)入紅細(xì)胞的溶質(zhì)能提高紅細(xì)胞的滲透壓，使水進(jìn)入紅細(xì)胞，引起溶血。由于溶質(zhì)透人速度不同，溶血時(shí)間也不同。三、 實(shí)驗(yàn)用品：1、 器材：50ml燒杯、滴管、試管、試管架2、 試劑：0·17mol/L氯化鈉 0·17mol/L氯化銨0·17mol/L醋酸銨 0·17mol/L硝酸鈉0·12mol/L草酸銨 0·12mol/L硫酸鈉0·32mol/L葡萄糖 0·32mol/L甘油0&#

23、183;32mol/L乙醇 0·9%生理鹽水阿氏液：葡萄糖2·02g，氯化鈉0·42g，檸檬酸鈉0·80g，檸檬酸0·055g，蒸餾水加到100ml，滅菌，0-4保存兩周四、實(shí)驗(yàn)材料： 雞血五、方法步驟：1、 雞紅細(xì)胞的制備：2、 制備流程如下：雞血（一份雞血加兩份阿氏液）混勻，離心（2000rpm）10 棄上清 取沉淀 加0·9%生理鹽水， 離心（2000rpm）10，重復(fù)2-3次棄上清 取沉淀，制成 3%雞紅細(xì)胞備用（用生理鹽水稀釋）3、 溶血現(xiàn)象的觀察：取試管一支，加入5ml蒸餾水，再加入0.5ml制備好的雞血，注意觀察 溶液顏

24、色的變化，由不透明的紅色逐漸澄清。紅細(xì)胞發(fā)生破裂，造成100%紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過溶液。4、 紅細(xì)胞的滲透性（1）取試管一支，加入0·17mol/L氯化鈉溶液5ml，再加入0.5ml制備的雞血，輕輕搖動(dòng)，注意是否有顏色變化？是否有溶血現(xiàn)象？為什么？（2）分別在下列幾種等滲溶液中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，步驟同（1）0·17mol/L氯化銨 0·17mol/L醋酸銨 0·17mol/L硝酸鈉 0·12mol/L草酸銨 0·12mol/L硫酸鈉 0·32mol/L葡萄糖 0·32mol/L甘油 0·32mol/L乙

25、醇 六、注意事項(xiàng)：1.雞紅細(xì)胞的稀釋要用0.9%生理鹽水，加入的生理鹽水體積與第一步取的雞血的體積相等。2.離心機(jī)使用時(shí)，要將配平后的離心管對(duì)稱放置在離心機(jī)內(nèi)，禁止未配平就放入離心機(jī)和非對(duì)稱放置離心管。七、作業(yè)：1、溶液的滲透壓主要與哪些因素有關(guān)?對(duì)簡單鹽溶液如何粗略計(jì)算出其滲透壓? 2、記錄觀察到的現(xiàn)象，并進(jìn)行分析和比較。（列表，按溶血快慢排列）編號(hào)溶液種類是否溶血溶血所需時(shí)間結(jié)果分析12345678910實(shí)驗(yàn)七、光鏡下植物細(xì)胞骨架 的制片技術(shù)及觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模撼醪秸莆赵诠忡R下植物細(xì)胞骨架標(biāo)本的制作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：用適當(dāng)濃度的Tritonx-100處理植物細(xì)胞時(shí)，可將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)破壞

26、，但卻可以保留細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)。后者用考馬斯亮藍(lán)染色，在光鏡下可觀察到細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。三、實(shí)驗(yàn)用品：（一）藥品1、 M緩沖液：50mM咪唑，0·5mM氯化鎂，1mM EGTA乙二醇雙（a-氨基乙苯）醚四乙酸，0·1mMEDTA（乙二胺四乙酸），1mM DTT（二硫蘇糖醇）2、 6mM PH6·5磷酸緩沖液（內(nèi)含5mM KCl）3、 1%Tritonx-100（用1液配制）4、 3%戊二醛5、 0·2%考馬斯亮蘭R250，用少許無水酒精溶解，然后用12·5%三氯醋酸定溶，裝入滴瓶備用。（二）用具：50ml燒杯、剪刀、鑷子、手術(shù)刀、玻璃滴管

27、、稱量瓶（或青霉素小瓶）、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸水紙（或衛(wèi)生紙）、溫箱等。四、實(shí)驗(yàn)材料：新鮮、幼嫩的洋蔥鱗莖內(nèi)表皮五、方法步驟：1、用鑷子撕取洋蔥鱗莖的內(nèi)表皮（取材時(shí)注意不要用靠近邊緣的內(nèi)表皮），剪成0·5-1cm大小，放入10ml，6mM，PH6·5的磷酸緩沖液中。2、將材料取出，用1%Tritonx-100處理0·5-1小時(shí)，（28oC溫箱），然后用M緩沖液洗3-5次，每次5分鐘。3、用3%戊二醛固定一小時(shí)（28oC溫箱）。4、用6mM，PH6·5的磷酸緩沖液洗3-5次，每次10分鐘。5、用0·2%考馬斯亮蘭R250染色15min-0.

28、5h（在載玻片上進(jìn)行）。6、材料染色后用蒸餾水沖洗。7、制片，在高倍鏡或油鏡下觀察，可見到與核聯(lián)系的細(xì)胞骨架及靠近細(xì)胞壁的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。六、注意事項(xiàng)：1、 用Tritonx-100處理時(shí)，材料應(yīng)浸泡入溶液2、 染色時(shí)注意勿稀釋藥液七、作業(yè)：繪制洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞的細(xì)胞骨架圖。實(shí)驗(yàn)八、線粒體和液泡系的超活染色與觀察一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、 觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。2、 學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。二、 實(shí)驗(yàn)原理： 活體染色是指對(duì)生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)

29、胞的死亡?；钊炯夹g(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識(shí)別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部位，主要是染料的“電化學(xué)”特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子的，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引

30、作用。但不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無毒性或毒性極小的染料，而且總是要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗鼈兙哂腥芙庠陬愔|(zhì)（如卵磷脂、膽固醇等）的特性，易于被細(xì)胞吸收。詹納斯綠B（Janus green B）和中性紅（neutral red）兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色各有專一性。三、 實(shí)驗(yàn)用品：1、 器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、10ml量筒、吸管、牙簽、吸水紙（或衛(wèi)生紙）等。2、 試劑：1） Ringer溶液（裝入滴瓶）氯化鈉 0·85g（變溫動(dòng)物用0·65g）氯化鉀 0&

31、#183;25g氯化鈣 0·03g蒸餾水 100ml2） 1%、1/3000中性紅溶液（裝入棕色滴瓶）稱取0·5g中性紅溶于50mlRinger液，稍加熱（30-40）使之很快溶解，用濾紙過濾，裝于棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。臨用前，取已配制的1%中性紅溶液1ml，加入29mlRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。3） 1%、1/5000詹納斯綠B溶液（裝入棕色滴瓶） 稱取50mg詹納斯綠B溶于5mlRinger溶液中，稍加熱（30-40），使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1%原液1ml加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液，裝入瓶

32、中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。四、 實(shí)驗(yàn)材料：1、人口腔上皮細(xì)胞2、洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞3、小麥或黃豆幼根根尖五、 方法步驟：（一）、線粒體的超活染色與觀察：線粒體是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所，其形態(tài)和數(shù)量隨不同物種、不同組織器官和不同的生理狀態(tài)而發(fā)生變化。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)），呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基（即無色狀態(tài)）。1、 人口腔黏膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察1）、取清潔載玻片放在37恒溫水浴鍋的金屬板上，滴兩滴1/5000詹

33、納斯綠B染液。2）、實(shí)驗(yàn)者用牙簽寬頭在自己口腔頰黏膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞，將刮下的黏液狀物放入載玻片的染液滴中，染色1015分鐘（注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液），蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。3）、在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡或油鏡進(jìn)行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ?xì)胞的核周圍胞質(zhì)中，分布著一些被染成藍(lán)綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。2、 洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察1） 用吸管吸取1/5000詹納斯綠B染液，滴一滴于干凈的載玻片上，然后，撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，置于染液中，染色1015分鐘。2） 用吸管吸去染液，加一滴Ringer液

34、，注意使內(nèi)表皮組織展平，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。3） 在高倍鏡下，可見洋蔥表皮細(xì)胞中央被一大液泡所占據(jù)，細(xì)胞核被擠至一側(cè)貼細(xì)胞壁處。仔細(xì)觀察細(xì)胞質(zhì)中線粒體的形態(tài)與分布。（二）、液泡系的超活染色與觀察中性紅為弱減性染料，對(duì)液泡系的染色有專一性，只將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)完全不著色，這可能與液泡中某些蛋白質(zhì)有關(guān)。1、 小麥或黃豆根尖細(xì)胞液泡系的中性紅染色與觀察1） 實(shí)驗(yàn)前，將小麥或黃豆種子培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內(nèi)潮濕的濾紙上，使其發(fā)芽，胚根伸長到1cm以上。2） 取初生的小麥或黃豆幼苗根尖（約12cm長）,置于載波片上,滴一滴Ringer液，用鑷子或刀片小心將根尖壓成一薄片，吸去Ringer液

35、，在材料上滴一滴1/3000中性紅染液，染色510分鐘。3） 吸去染液，滴一滴Ringer液，蓋上蓋玻片，并用鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察。4） 在高倍鏡下，先觀察根尖部分的生長點(diǎn)的細(xì)胞，可見細(xì)胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡。然后，由生長點(diǎn)向延長區(qū)觀察，在一些已分化長大的細(xì)胞內(nèi)，液泡的染色較淺，體積增大，數(shù)目變少。在成熟區(qū)細(xì)胞中，一般只有一個(gè)淡紅色的巨大液泡，占據(jù)細(xì)胞的絕大部分，將細(xì)胞核擠到細(xì)胞一側(cè)貼近細(xì)胞壁處。2、洋蔥表皮細(xì)胞液泡系的活體染色與觀察：1） 撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮2） 置于加有一滴1/3000的中性紅染液的載玻片中，染色510分鐘3

36、） 用吸水紙吸去染液，換上Ringer液，蓋上蓋玻片4） 顯微鏡下觀察，可見被染成磚紅色的中央大液泡 六、注意事項(xiàng)： 1、在對(duì)口腔上皮細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)不可使染液干燥，可適當(dāng)補(bǔ)加染液。2、在對(duì)植物進(jìn)行觀察時(shí)一定要讓材料盡量展開。七、作業(yè)：1、 繪口腔上皮細(xì)胞示線粒體形態(tài)與分布2、 繪小麥或黃豆根尖細(xì)胞示液泡系形態(tài)與分布實(shí)驗(yàn)九、DNA的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)Feulgen反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^根尖壓片法，掌握Feulgen反應(yīng)顯示DNA的基本原理和主要操作環(huán)節(jié)二、實(shí)驗(yàn)原理：Feulgen反應(yīng)是1924年由Feulgen和Rossenbeck開創(chuàng)的。這一反應(yīng)的原理是：DNA在一定的溫度（60）下，被酸水解，打開

37、嘌呤堿與脫氧核糖連接的鍵。在脫氧核糖的一端形成游離的醛基，醛基與Schiff試劑（脫色堿性品紅）結(jié)合，形成紫紅色化合物。所以，凡有DNA的部位，會(huì)呈現(xiàn)紫紅色陽性反應(yīng)，可以作為定性研究DNA的一種簡便方法。三、實(shí)驗(yàn)用品：（一）、藥品：1、Schiff試劑：稱1g堿性品紅，溶于200ml已煮沸的蒸餾水中（要漫漫加入，不可一下全部倒入），繼續(xù)煮沸5分鐘（攪動(dòng)），然后使其冷卻至50，過濾于棕色磨口瓶中，加入20ml1N HCl（取比重為1·19的HCl 32·5ml，加蒸餾水至1000ml即成），繼續(xù)冷卻至25時(shí)加入1g偏亞硫酸鉀（KHSO3）或偏亞硫酸鈉（NaHSO3），將瓶塞蓋

38、嚴(yán)，置于暗處24小時(shí)，溶液應(yīng)為無色，可保持在1-4冰箱中備用。如果紅色不退可加入2g活性炭粉末，攪動(dòng)數(shù)分鐘后靜置數(shù)小時(shí)，再過濾即可脫去紅色。2、1N HCl：取82.5ml比重為1.19的鹽酸加蒸餾水1000ml即成(應(yīng)將鹽酸緩緩加入水中)。3、45%醋酸4、亞硫酸水溶液：在200ml自來水中，加入10ml 10%的偏亞硫酸鈉（或偏亞硫酸鉀）溶液，或加入10ml 30%的偏重亞硫酸鈉溶液，再加入1N HCl 10ml即成，蓋緊瓶塞。此液要現(xiàn)配現(xiàn)用。5、Carnoy固定液：95%酒精3份，冰醋酸1份混合即可。6、50%酒精、30%酒精。7、5%三氯醋酸（二）、用具：顯微鏡、恒溫水浴鍋、鑷子、刀片

39、、載玻片、蓋玻片、酒精燈、青霉素小瓶、吸水紙等四、實(shí)驗(yàn)材料：大蒜、洋蔥或蠶豆根尖五、方法步驟：1、取0·5-1cm的根尖，在carnoy固定液中固定2-24小時(shí)。固定時(shí)以冰箱中進(jìn)行為宜。2、取出固定材料，用50%酒精、30%酒精、蒸餾水各沖洗5分鐘，以除掉材料上的醋酸。準(zhǔn)備兩張切片，其中一張作對(duì)照。3、水解：用1N的冷HCl過洗材料一次，然后放入溫度穩(wěn)定在60的1N HCl中，水解10-14分鐘，取出材料后再用1N冷HCl過一次。4、染色：將水解后的材料放入Schiff試劑中染色1小時(shí)左右，此時(shí)根尖部分會(huì)出現(xiàn)紫紅色。5、用亞硫酸水漂洗三次，每次5分鐘，使細(xì)胞質(zhì)的紫紅色退掉，再流水沖洗

40、515分鐘，洗后的材料放入蒸餾水中。8、用45%的醋酸壓片。9、鏡檢。與對(duì)照裝片比較。10、對(duì)照切片的制做：進(jìn)行Feulgen反應(yīng)時(shí), 一般要做一對(duì)照切片以便驗(yàn)證反應(yīng)結(jié)果。對(duì)照切片可用下面兩種方法制作：不經(jīng)水解直接放入schiff試劑內(nèi)染色。 材料固定后用5%三氯醋酸于90處理15min，用蒸餾水沖洗，以后步驟同實(shí)驗(yàn)組。六、注意事項(xiàng)：1、Feulgen反應(yīng)的染色深淺與材料、水解時(shí)的溫度和時(shí)間都有關(guān)系。水解時(shí)間的長短要根據(jù)固定液和材料來進(jìn)行選擇，時(shí)間太短則游離的醛基量少而染色不深，時(shí)間太長會(huì)因醛基進(jìn)一步變成其它物質(zhì)，染色也不深。水解時(shí)的溫度要嚴(yán)格控制。2、未經(jīng)水解的對(duì)照切片在schiff試劑中最

41、多不要超過1 h (0.5 h即可)，時(shí)間過長，試劑本身的酸性也會(huì)使DNA水解，從而出現(xiàn)假的正反應(yīng)。 3、Schiff試劑的作用 ：Feulgen反應(yīng)成功與否的一個(gè)非常關(guān)鍵的因素，就是schiff試劑的質(zhì)量。有一大類試劑均稱為堿性品紅，它們實(shí)際上是由幾種產(chǎn)品分別組成的。因此只能選用注明“DNA染色反應(yīng)用”的堿性品紅才行。此外，Schiff試劑的配制方法也可影響DNA的染色反應(yīng)。七、作業(yè)：1、繪圖表示Feulgen反應(yīng)的染色結(jié)果, 并驗(yàn)交Feulgen反應(yīng)的壓片1張。 2、總結(jié)Feulgen反應(yīng)染色結(jié)果的影響因素。3、Feulgen反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)原理是什么？ 4、在稀鹽酸水解后，為什么要用亞硫酸水洗

42、片？實(shí)驗(yàn)十、RNA的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)Unna反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆诊@示細(xì)胞內(nèi)RNA和DNA的主要細(xì)胞化學(xué)方法以及了解RNA和DNA在細(xì)胞內(nèi)的一般分布狀況。二、實(shí)驗(yàn)原理： 1989年P(guān)appenheim首創(chuàng)了甲基綠-派洛寧染色法。1902年Unna對(duì)這一方法進(jìn)行了改良。1940年Brachet研究證明甲基綠和派洛寧對(duì)DNA和RNA有選擇性的染色效果。這是一種利用堿性染料顯示細(xì)胞內(nèi)RNA的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。其原理是：利用DNA和RNA對(duì)堿性染料的親合力有差異，而進(jìn)行選擇性染色，即RNA被Unna試劑中的派洛寧染成紅色，DNA被Unna試劑中的甲基綠染成綠色。三、實(shí)驗(yàn)用品：（一）、藥品：1、 Unna試劑：

43、甲液：5%的派洛寧水溶液2ml；2%的甲基綠水溶液6ml；蒸餾水16ml乙液：1M PH4·8的醋酸鹽緩沖液。配制方法為：A液：6ml冰醋酸+100ml蒸餾水B液：13·5g醋酸鈉+100ml蒸餾水取A液40ml加B液60ml即為乙液。乙液以現(xiàn)配為好。 甲液和乙液分別保存在4冰箱中備用。用時(shí)甲、乙兩液混勻即成Unna試劑。2、丙酮3、正丁醇4、二甲苯5、加拿大樹膠6、明膠粘片劑：明膠1g，蒸餾水100ml，苯酚2g，甘油15ml。配法：將蒸餾水加熱至36，再依次加入明膠、苯酚、甘油（可在36水浴鍋中進(jìn)行，明膠在36溶解度最大），待充分溶解后，過濾，貯存于有玻璃塞的瓶中備用。

44、注意配好后不要放在冰箱中。7、70%酒精、95%酒精、無水酒精。8、Carnoy固定液（配法同實(shí)驗(yàn)九）9、5%三氯醋酸（二）、用具：顯微鏡、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、酒精燈、濾紙、染色缸（8個(gè)/組）、吸水紙等四、實(shí)驗(yàn)材料：洋蔥表皮五、方法步驟：1、在干凈的載玻片上涂以一極薄的明膠粘片劑，滴一滴蒸餾水，用鑷子撕下小片洋蔥表皮置于蒸餾水之上，使之展開。2、片子置于酒精燈火焰上烘烤，待蒸餾水蒸發(fā)后，洋蔥表皮即粘在載玻片上。3、立即將片子放入carnoy固定液中固定15分鐘。4、取出固定材料，用無水酒精將片子上的醋酸沖洗干凈，然后將片子經(jīng)95%、70%酒精（各5分鐘），然后移入蒸餾水中。將裝片分為實(shí)

45、驗(yàn)組和對(duì)照組。5、對(duì)照組用5%三氯醋酸于90處理15min，用蒸餾水沖洗5min。6、將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組裝片均浸入U(xiǎn)nna試劑中染色30分鐘。7、用蒸餾水沖洗數(shù)秒鐘，以洗去多余的染液，但沖洗時(shí)間不宜過長，否則派洛寧會(huì)被洗掉，然后用吸水紙將片子上的水分吸干。8、片子浸入純丙酮中分色3-20秒。9、蒸餾水洗片刻，鏡檢10、將制作較好的裝片移入正丁醇和二甲苯混合液（1：1）中10-30秒。11、在純二甲苯中透明5-15分鐘12、用加拿大樹膠封片，即成永久裝片。13、鏡檢。實(shí)驗(yàn)步驟簡示如下：六、注意事項(xiàng)：商品甲基綠?；煊屑谆希瑫?huì)影響染色效果，應(yīng)該用氯仿將甲基綠中的甲基紫成分洗脫干凈。方法是將市售甲基綠

46、泡入氯仿中，用力振搖，靜置后過濾，反復(fù)多次直到氯仿中無甲基紫色出現(xiàn)為止。洗去甲基紫后干燥備用。七、作業(yè)1、用彩色筆繪出反應(yīng)結(jié)果的細(xì)胞圖，并注明不同顏色的部位表示有什么物質(zhì)存在2、驗(yàn)交永久裝片一張實(shí)驗(yàn)十一、小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動(dòng)的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^對(duì)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活動(dòng)的觀察，加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程及其意義。二、實(shí)驗(yàn)原理巨噬細(xì)胞起源于骨髓，經(jīng)血液進(jìn)入組織中而成，分布于全身各處。當(dāng)機(jī)體受到某些損傷因素時(shí)（如微生物或其它病原體或異物侵入），能招引巨噬細(xì)胞，同時(shí)巨噬細(xì)胞有趨化性，主動(dòng)向病原體或異物游走，在接觸到病原體或異物時(shí)，細(xì)胞膜凹陷伸出偽足包圍異物，并發(fā)生胞吞作用形成吞噬

47、泡，繼而細(xì)胞質(zhì)中的溶酶體與吞噬泡融合，消化分解異物。含臺(tái)盼藍(lán)的淀粉肉湯，可使腹腔中有較多的吞噬細(xì)胞，以供觀察吞噬活動(dòng)。三、實(shí)驗(yàn)用品1、材料：小白鼠、1%雞紅細(xì)胞懸液、10%羊紅細(xì)胞懸液。2、試劑：6%的淀粉肉湯（含臺(tái)盼藍(lán)），0.9%生理鹽水。3、儀器設(shè)備：顯微鏡、注射器、注射針頭、吸管、試管架、解剖刀、解剖鑷、載玻片、蓋玻片、記號(hào)筆。四、實(shí)驗(yàn)材料：1、小白鼠2、1%雞紅細(xì)胞懸液五、方法步驟取一只注射過淀粉肉湯的小白鼠，腹腔注射1%雞紅細(xì)胞懸液1ml，25分鐘30分鐘后再向腹腔注射0.9%生理鹽水1ml，并用手輕揉小鼠腹部，有利于懸液分散。3分鐘后，用頸椎脫臼方法處死小鼠（一手捏著鼠頭、頸連接處

48、，一手捏住鼠尾，分別向兩端用力牽拉，直到拉死為止），迅速剖開腹腔，用不帶針頭的注射器貼腹腔背壁處直接抽取腹腔液，滴片，制備一張臨時(shí)裝片，蓋上蓋玻片。放置2分鐘3分鐘后在顯微鏡下觀察。在高倍鏡下，可見到圓形或形狀不規(guī)則的巨噬細(xì)胞，其胞質(zhì)中含有數(shù)量不等的藍(lán)色顆粒（為吞入的含臺(tái)盼藍(lán)的淀粉肉湯形成的吞噬泡），還可見少量淡黃色橢圓形有核的雞紅細(xì)胞。慢慢移動(dòng)玻片標(biāo)本，仔細(xì)觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的過程：有的雞紅細(xì)胞（一個(gè)至多個(gè)）緊貼于巨噬細(xì)胞表面；有的巨噬細(xì)胞已將一至數(shù)個(gè)雞紅細(xì)胞部分吞入；有的巨噬細(xì)胞已吞入了一個(gè)或幾個(gè)紅細(xì)胞，形成了橢圓形吞噬泡；有的巨噬細(xì)胞內(nèi)的吞噬泡已與溶酶體融合正在被消化，體積縮小呈圓

49、形。將所見到的處在不同吞噬階段的巨噬細(xì)胞動(dòng)態(tài)地聯(lián)系起來，想一想吞噬作用的全過程。六、注意事項(xiàng)：剖開小鼠腹腔時(shí)，剪刀頭要向上，以避免剪破腹腔血管，腹腔液應(yīng)是無色的液體。七、作業(yè)：將所見到的處在不同吞噬階段的巨噬細(xì)胞動(dòng)態(tài)地聯(lián)系起來，說一說吞噬作用的全過程。實(shí)驗(yàn)十二、聯(lián)會(huì)復(fù)合體的染色與觀察 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)光學(xué)顯微鏡顯示聯(lián)會(huì)復(fù)合體技術(shù)，觀察光鏡下聯(lián)會(huì)復(fù)合體的形態(tài)結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)原理：1977年Moses證明使用光鏡可以檢查聯(lián)會(huì)復(fù)合體，其后發(fā)展了許多用于明視野顯微鏡觀察的方法，依靠光鏡顯示聯(lián)會(huì)復(fù)合體，不僅對(duì)SC 的構(gòu)造、功能的研究有用，而且在臨床細(xì)胞遺傳學(xué)中對(duì)研究染色體異常現(xiàn)象也是有用的，它大大加快了

50、SC的研究特別是X、Y染色體配對(duì)行為的研究，并導(dǎo)致了X染色體上一種特殊夾狀結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)。聯(lián)會(huì)復(fù)合體是指在減數(shù)分裂前期，同源染色體的配對(duì)行為所形成的一種特殊結(jié)構(gòu)，由側(cè)線、橫線和中央軸三部分組成，在前期的粗線期時(shí)結(jié)構(gòu)較典型，它是動(dòng)植物同源染色體聯(lián)會(huì)時(shí)相當(dāng)普遍的一種結(jié)構(gòu)。三、實(shí)驗(yàn)用品：1、器材：離心機(jī)、顯微鏡、水?。?5）、培養(yǎng)皿（直徑16cm）、鑷子、剪刀、吸管、燒杯、量筒、離心管（10ml）、酒精燈、刻度吸管、鏡油、擦鏡紙、載玻片、臺(tái)秤。2、試劑：    0.7%檸檬酸鈉溶液。    3%中性福爾馬林溶液；8.3ml福爾馬林溶液，醋酸鈉1

51、.1克，加蒸鎦水91.7ml。    50%硝酸銀溶液    2.0%明膠；稱取2克明膠粉末，溶解于99ml蒸鎦水中，加1ml甲酸。    甲醇、冰醋酸四、實(shí)驗(yàn)材料：小白鼠（雄）五、方法步驟：1脫頸處死動(dòng)物，取出睪丸，放入盛有1ml 0.7%檸檬酸鈉培養(yǎng)器中。2分離并剪碎精小管，用吸管輕輕吹打，使精小管內(nèi)容物釋放出。3移至刻度離心管中，加4ml0.7%檸檬酸鈉溶液制成細(xì)胞懸浮液，室溫下低滲45-60分鐘。4在低滲終止前10分鐘，加3%中性福爾馬林液0.15ml，最終濃度0.1%，混勻。5常規(guī)離心（1000

52、rpm，10分鐘），棄去上清液。6加入甲醇和冰醋酸（3：1）混合液（臨用時(shí)配制）5ml，固定10min。7以1000rpm離心5min，棄去上清液。8重復(fù)6-7步一次。9加入1ml新鮮固定液，混勻。10.取細(xì)胞懸浮液，滴2-3滴于濕冷的載玻片上，置酒精燈上略加烘烤（或?qū)⑤d玻片置于熱至80的電熱板上）。11.銀染：加4滴50%AgNO3和2滴明膠液于載玻片細(xì)胞面上，混勻，覆以擦鏡紙，置酒精燈上烘烤（或?qū)⑤d玻片置于熱至80的電熱板上），至玻片標(biāo)本呈褐黑色為止。一般為3-4min。12.移去擦鏡紙，以蒸餾水快速漂洗，晾干。13.鏡檢。六：注意事項(xiàng)：制片的關(guān)鍵是長時(shí)間的低滲液處理和添加福爾馬林溶液七、作業(yè)繪圖表示光鏡下聯(lián)會(huì)復(fù)合體的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)十三、去壁低滲法制備植物染色體標(biāo)本一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌屋植物染色體標(biāo)本的去壁低滲方法2、了解中期染色體的形態(tài)結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)原理：植物細(xì)胞有很堅(jiān)實(shí)的細(xì)胞壁，染色體很難像動(dòng)物染色體那樣平整地貼在載玻片上，可通過纖維素酶和果膠酶處理去掉細(xì)胞壁；用低滲溶液處理可以提高染色體的分散程度。陳瑞陽等（1979，1982）提出了植物染色體標(biāo)本制備的酶解去壁低滲法，并在多種植物上得到廣泛應(yīng)用，成為當(dāng)前植物染色體研究中的重要方法。三、實(shí)驗(yàn)用品：（一）器材：顯微鏡；溫箱；冰箱；重蒸水；眼科鑷子；刀