豬霍亂沙門氏菌的快速分離鑒定

1、豬霍亂沙門氏菌的快速分離鑒定 WORD文檔使用說明：豬霍亂沙門氏菌的快速分離鑒定 來源于PDFWORDPDF轉(zhuǎn)換成WROD 本W(wǎng)OED文件是采用在線轉(zhuǎn)換功能下載而來，因此在排版和顯示效果方面可能不能滿足您的應(yīng)用需求。如果需要查看原版WOED文件，請訪問這里豬霍亂沙門氏菌的快速分離鑒定 文件原版地址: 豬霍亂沙門氏菌的快速分離鑒定|PDF轉(zhuǎn)換成WROD_PDF閱讀器下載# 8#An i a lH usbandry& Ve terinaryM edicine m2007 Vol 39 No12 1豬霍亂沙門氏菌的快速分離鑒定徐引弟, 郭愛珍 , 賈愛卿, 劉維紅, 陳煥春(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)

2、微生物學(xué)國家重點實驗室及湖北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點實驗室, 湖北 武漢 430070)*摘要: 豬霍亂沙門氏菌是引起仔豬副傷寒的主要病原菌, 給養(yǎng)豬業(yè)造成重大危害。本文旨在建立一套細(xì)菌快速分離鑒定方法, 為該病流行病 學(xué)調(diào)查提供有效手段。從臨床初診為仔豬副傷寒的病豬采集糞便, 接種亞硒酸鹽亮綠增菌液增菌后, 劃線于 SS瓊脂培養(yǎng)基, 挑無色透明菌落純化。純 化菌落用美國 B I OLOG自動細(xì)菌鑒定儀 GN2腸桿菌鑒定板鑒 定, 同時用 常規(guī)生化 鑒定管鑒 定, 結(jié)果符 合豬霍亂 沙門氏菌 的生化特 征。 PCR 擴 增 inv A基因, 測序鑒定 PCR 產(chǎn)物, 結(jié)果與豬霍亂沙門氏菌參考序列同源性

3、達(dá) 99 以上。分離菌株接種小白鼠, 證明其對小白 鼠有致病性。用沙 門氏 % 菌屬標(biāo)準(zhǔn)血清檢測證實其抗原式為 6 , 7BcB1 , 5 符合豬霍亂沙門氏菌的抗原特征。應(yīng)用 以上方法從全國 各地病料中分 離鑒定了 40 多株豬霍 亂沙 , 門氏菌, 為豬霍亂沙門氏菌病的流行病學(xué)調(diào)查提供了依據(jù), 同時證明該方法切實可行。關(guān)鍵詞: 豬霍亂沙門氏菌; 細(xì)菌鑒定; PCR; 血清型 中圖分類號: S858128511 文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A 文章編號 : 052925130( 2007) 0220008204Ra p i iso l ti n a nd i en tifi a ti n o fS a m

4、one ll cho l ra e su is d a o d c o l a eXU Y in2d,i GUO A i2zhen , JI A i2qing L I W e i2hong CHEN H uan2chun A , U , (N ational Key Laboratory of Agricu ltural M icrob io logy& P rovincial K ey Laboratory of P reventive V eterinaryM edic in e , H uazhong Agricultura l University W uhan 430070

5、Ch in a) , , Abstr act: Sa lmonella cholera esuis ( S1cholera esuis) is the m a in pathogen of p iglet paratyphoid causing severe harm to p ig industry To es2 , .tab lish a rapid isola tion and identification procedure is of significance in S1 choleraesuis epide iologica l investigation. The feces w

6、as collected m fro diseased p iglets c lin ica lly d iagnosed as paratyphoid, inocu lated on Sod ium Se len ite brilliant green SS m edium, then streaked on SS m ed i m 2 um. The colorless and transparent colon ies were pur ified and Gra m2sta ined. The purified strain was identified to be S1Cholera

7、 esu is with GN2 m icroplate ofAm er ican B I OLOG autom ated identification syste m, as we ll as the routine bioche ical tubes The gene inv was a plified with m . A m PCR and sequenced. There was over 99% ho ology at nuc leotide leve l between pub lished sequence ofS1cholera esuis and th is isola t

8、e The i m . 2 solate was viru lent to m ice and the serotype was con fir ed to be 6, 7BcB1, 5, m ted to understand the epidem iology of S1 cholera esu is in fection in China . ; K ey w ord s S1 cholera esu is bacter ia l identifica tion; PCR; serotype : 豬霍亂沙門氏 菌 ( Sa lm onella cholera esuis) 是引 起 2

9、4月 齡仔豬副 傷寒的 主要 病原。仔 豬副傷 寒 (簡稱 仔 副 ) 臨床 上 以急性敗血癥、慢性壞死性腸炎、頑固性下痢為 特征, 引 起斷 奶仔豬大批發(fā) 病, 當(dāng) 并發(fā) 或繼 發(fā)感 染其 他疾 病或 治療 不及 時 時, 死亡率較高, 造成重大損失。本病可一年四 季發(fā)生, 多與 豬瘟混合感染, 導(dǎo)致發(fā)病率與死亡率增 高。在臺 灣, 豬霍 亂沙 門氏菌已證明對人具有高度侵 襲性, 導(dǎo) 致人發(fā)熱及菌血癥等全 身性感染癥狀 1 。此外, 當(dāng) 前 流行 的豬 霍 亂沙 門 氏菌 的多 重 耐性嚴(yán)重, 對人類健 康 的潛 在威 脅 很大 2 。本 文 通過 從湖 北 某大型養(yǎng)豬場發(fā) 生仔 豬副 傷寒

10、 的仔 豬中 分離 鑒定 豬霍 亂沙 門收稿日期: 2006205210 基金項 目: 中 國 教 育 部 留 學(xué) 回 國 人 員 科 研 基 金 ( 教 外 司 留 2004 176號 )。 作者簡介: 徐引弟 ( 19742), 女, 博士。 * 通訊作者。*typical antigen pattern of S1 cholera esuis M ore than 40 .S1 cholera esu is stra ins were isolated from the d iseased piglets ind ica ting that the above procedure was

11、 practica l and the da ta could be contribu2 ,氏菌, 建立了一套系統(tǒng)快速的分離鑒定方法, 進(jìn)一步應(yīng)用于 其 他臨床病例的細(xì)菌分離鑒定, 為流行病學(xué)的研究奠定了基 礎(chǔ)。1 材料與方法11 1 材料 病料: 病豬來自于 2005年 10月實驗室收診 的湖北省某 大 型豬場典型仔豬副傷寒患病斷奶仔豬, 無菌采集糞便。 標(biāo)準(zhǔn)血清: 沙門 氏菌 屬標(biāo) 準(zhǔn)血 清購 自蘭 州 生物 制品 研 究 所, 批號: 200402011 。 標(biāo)準(zhǔn)菌 株: 豬霍亂沙 門氏菌弱毒 株 C500株 由中國獸藥 監(jiān) 察所饋贈, 鼠傷寒 沙門 氏菌弱 毒株 CSO22 ( PhO

12、- /PhQ- ) 由 美國 Un iversity of Pennsylvan ia D ieter 1M1Schifferli博士饋贈。 試驗動物: B ALB /C 小鼠購自 湖北省 預(yù)防醫(yī) 學(xué)科學(xué) 院 SPF 實驗動物中心。 主要儀器及試劑: 全自動細(xì)菌鑒定儀購 自美國 BIOLOG 公畜牧與獸 醫(yī)2007年第 39卷第 2期# 9#司, 選用 GN2腸桿 菌鑒 定板。常規(guī) 生化 鑒定 管、亞硒 酸鹽 增 菌培養(yǎng)基、 SS瓊 脂、麥康 凱瓊脂、三糖鐵 瓊脂、HE 瓊脂 均購 自杭州天和微生物試劑有限公 司。柱式 回收試劑盒購自上海生 工生物公 司, 引 物 合 成 由 上 海 生 工

13、生 物 公 司 完 成, 連 Takara公司。 11 2 致病菌的分離純化 將仔 豬 糞 樣 接 種 于 亞 硒 酸 鹽 亮 綠 增 菌 液, 板, 37 e 振 搖 ( 250 r /m in)增菌培養(yǎng) 18 24 h; 劃線轉(zhuǎn)接于 SS瓊脂培 養(yǎng)基平 37 e 培養(yǎng) 18 24 h 后, 挑取細(xì) 小、無色 透明、光 滑、圓 37 e 鑒別培養(yǎng) 18 24 h。 整的菌落, 在 SS瓊脂平板 上進(jìn)一 步純化 培養(yǎng)。純化 的可 疑菌 落接種麥康凱、三糖鐵、 HE瓊脂, 11 3 致病菌的鑒定 11 311 鏡檢 從 SS瓊脂平皿培養(yǎng)物 上挑取單 個無色 透明菌 落, 涂 片革 蘭氏染色, 鏡

14、檢。 11 312 生化鑒定 參照 B I OLOG 全自動細(xì) 菌鑒 定 儀 GN2腸 桿菌 鑒定 操作 說 明, 簡述如下: 取幾個菌落于試管液體中, 用調(diào)整好的濁 度計 制備透光 率 為 61% 混 濁 度 的菌 懸 液, 用 定 量連 續(xù) 接 種 器 于 GN2鑒定 板中 每孔 接種 150 LL菌 懸液。 37 e 培養(yǎng) 16 24 h 后, 用分析儀讀取結(jié)果并用相 應(yīng)軟件解釋。 11 313 常規(guī)生化鑒定 對于純化 好 的 可疑 菌 落按 使 用說 明 做 以下 生 化 試 驗 3: 糖發(fā)酵包括葡 萄糖、乳 糖、麥芽 糖、甘露 醇、蔗糖、 衛(wèi)矛醇, 吲哚試驗, MR 試 驗, V2P

15、 試 驗, 枸 櫞 酸利 用, H 2 S 尿素 酶 , 測定, 硝酸鹽還原, 鳥氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸脫羧 酶、精氨 酸雙水解酶試驗, 明膠液化。 11 314 PCR 鑒定 4只接種 200 L L 觀 察死亡 情況。根 據(jù)預(yù) 試驗 結(jié)果 進(jìn)行 正式 分 , 組接種, 觀察發(fā)病死 亡情況, 根據(jù) R eed2 uench 法計算 LD50。 M 死亡小鼠心血接種 SS培養(yǎng) 基培 養(yǎng), 用 11 3方 法鑒 定。對照 小 鼠用 01 2 mL生理鹽水腹腔接種。 11 5 血清型鑒定 按沙門氏菌屬診斷血清使用說明書進(jìn)行, 取分離鑒定好 的 菌落接種 SS瓊 脂, 37 e 培養(yǎng) 18 24 h

16、 于潔 凈玻 片上 滴 10 , 2 m in內(nèi) 呈 LL血清, 取少量菌苔與血清混勻, 輕輕搖動玻片,dNTPs 、Taq酶、 p MD218T克隆載體試劑盒、限 制性內(nèi) 切酶、均購 自大現(xiàn)明顯凝集者為陽性, 呈均勻混濁著為陰性, 陽性時以生理 鹽 水作對照試驗。先用 O 抗原 多價 血清 及單 因子 血清 鑒定 其 O 抗原, 必要時以 V i血清鑒定其 V i ( 莢膜 ) 抗原, 然后以 H 血 清鑒定其 H ( 鞭毛 ) 抗 原。2 結(jié)果21 1 分離純化 經(jīng)增菌、 SS瓊脂 純化 等步驟 從糞 便中 分離 到細(xì) 小、無 色 透明、光滑、圓整、中心為黑色的菌落, 麥康凱培養(yǎng)基上為 無

17、 色透明、光滑 菌落, HE 瓊 脂上 為藍(lán) 綠色、 中心 黑色 的 菌落, 三糖鐵斜面上紅色底面黃色產(chǎn)氣產(chǎn) H 2 S 。涂片、 革蘭氏染色 鏡 檢為革蘭氏陰性短小桿菌。 21 2 生化鑒定 分離純化的菌落經(jīng) BIOLOG自動鑒定儀鑒 定得到明顯的 結(jié) 果, 100% 符合 豬霍 亂沙 門 氏菌 的特 征 ( 95種 生 化 反應(yīng) 未 列 出 ), 對照菌 C500、 CSO22的鑒定結(jié)果均與該菌 的生化特征 相 同。常規(guī)生 化 鑒 定 結(jié) 果 也 符 合豬 霍 亂 沙 門 氏 菌 的 生 化 特 征 (表 1)。 表 1 豬霍亂沙門氏菌生化鑒定結(jié)果反應(yīng)底物 結(jié)果 + + + 反應(yīng)底物 枸櫞

18、酸鹽 尿酶 H2 S 硝酸鹽還原 鳥氨酸脫羧酶 賴氨酸脫羧酶 苯丙氨酸脫羧酶 精氨酸雙水解酶 明膠液化 結(jié)果 + + + + + + -根據(jù)文獻(xiàn)報道及參 照 GenBank M90846鼠傷 寒沙門 氏菌葡萄糖 麥芽糖 甘露醇 乳糖 蔗糖 衛(wèi)矛醇 吲哚 MR VPinvA基因序 列設(shè) 計引 物, 擴增 片段 大小 為 580 bp 。上 游引 物 為: P1 : 5c2CAG GAT ACC TAT AGT GCT GC23c 下游引物為: , P2: 5c2CGC ACC GTC AAA GGA ACC GT23c。用接種環(huán)挑 取單 菌落 LB 37 e 震搖 過夜。反 應(yīng)體系 ( 50 L

19、L): 10 Taq Buffer 5 LL, 2 Lmol/L dNTP s 1 LL, 50 Lm ol/L P1 P2各 1 LL, Taq 、 酶 1 LL, 無菌水 36 LL, 菌 液 1 LL。以 C500、 CSO22株 為陽 性對照, 本室分離鑒定的副嗜 血桿菌、大腸桿菌、鏈球菌、金 黃色葡萄球 菌、波 氏桿 菌、巴 氏桿 菌等 非沙 門氏 菌為 陰性 對 照。反應(yīng) 條 件 為: 94 e 30 s 57 e 、 94 e 變 性 4 m in, 然 后 進(jìn) 入 35 個 循 環(huán): 30 s 72 e 、 30 s 最 后 72 e 延伸 10 m in , , 21 3P

20、CR 鑒定 從分離 菌 株 中 擴增 出 大 小 為 580 bp 的片 段, 與 標(biāo) 準(zhǔn) 菌8 e 保存。 018% 瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。 PCR 產(chǎn)物鑒定: PCR 擴增 產(chǎn)物 用柱 式 試劑 盒回 收, 連 接 pMD218T 載體, 轉(zhuǎn)化 DH 5A感受 態(tài)細(xì) 胞, 涂布 Amp 平皿 ( 100 L g/mL), 37 e 培 養(yǎng) 12 16 h 挑菌 37 e 振 搖 ( 250 r /m in) , 培養(yǎng) 12 16 h。小量 制備 質(zhì)粒, 酶切 鑒定, 陽 性 質(zhì)粒 送大 連 Takara 公司測序, 測序結(jié)果用 B last軟件進(jìn)行同源性比較。 11 4 小白鼠毒力試驗

21、取分離鑒定好的 菌落, 培養(yǎng) 過夜, 用 無菌 生理鹽 水 10 倍 稀釋, 平板計 數(shù)。每個 稀釋 度腹腔 注射 4 只 Ba lb /C 小 鼠, 每CSO22及 C500大小一致, 其他非沙門 氏菌 (資料 未顯示 ) 及 無菌水中 均未 擴 增出 相應(yīng) 片 段 (圖 1)。 回收 PCR 產(chǎn)物 后 與 p MD218T載體連接, 酶切 鑒定證 明構(gòu) 建正確 ( 圖 2) 。分離 菌 及標(biāo)準(zhǔn)菌測序結(jié)果用 B last軟件 進(jìn)行同 源性比 較, 分離 菌與 參 考序列 ( GenBank access ion M90846)、 參 考菌 CS022、 C500 : 同源性均達(dá) 99 以上,

22、 與 C500僅一個 堿基不同和一個堿 基缺 % 失, 同源性最高達(dá) 991 6% , 與參考序列 M 90846 三個堿基不 同 和一個 堿 基 缺 失, 標(biāo) 準(zhǔn) 菌 CS022 與 參 考 序 列 M90846 完 全 一致。# 10#An i a lH usbandry& Ve terinaryM edicine m2007 Vol 39 No12 1系統(tǒng)通過檢測微生物利用不同碳源過程中產(chǎn)生的 酶與四唑類物 質(zhì) (如 TTC TV) 發(fā) 生的 顏色反 應(yīng)和 濁度差 異, 運用 獨有 的 、 顯型排列技術(shù)分析每種微生物的特征指紋圖譜, 在大量試驗 和 數(shù)學(xué)模型基礎(chǔ)上, 建立起指紋圖

23、譜與微生物種類相對應(yīng)的數(shù) 據(jù) 庫。檢測時通過智 能軟 件 將待 鑒定 微生 物的 圖譜 與數(shù) 據(jù)庫 參 比, 即可得出檢測結(jié)果。該方法操作、讀取分析結(jié)果全部實 行 自動化, 簡單 快速 而準(zhǔn) 確, 擁 有龐 大的 細(xì)菌 資料 庫, 可 鑒 別 2 000多種細(xì)菌, 有 95種生化 試驗, 并 能初步定型, 克服了常 規(guī)生化鑒定 的不 全面、操 作繁 瑣、讀 取結(jié) 果人 為因 素大 等 弊 端, 因此本試驗的鑒定結(jié)果準(zhǔn)確可靠 5M. DNA 大小標(biāo)準(zhǔn)參照; 1. 豬霍亂沙門氏菌 C500 ; 2. 鼠傷寒沙門氏菌 CSO22 ; 3. 無菌水對照; 4 9. 分離株的 PCR 產(chǎn)物。6。常規(guī)的生

24、化鑒定 方法也證實了該方法的準(zhǔn)確性。 同時本研究建立了一種快速鑒定 沙門氏菌屬 的 PCR 方法。 致病性沙門氏菌感染機體的第一步是內(nèi)化入腸道上皮細(xì)胞 , 位 于沙門氏菌染色體 63 m in處的毒力島 1 ( SP I 21) 含有由 15 個 基因組成的一組基因族 inv2s pa, 其產(chǎn)物介導(dǎo)沙門氏菌內(nèi)化 , 其 中 invA基因是內(nèi)化 過程 最重 要的 一個 基因, inv 非極 性突 變 A 株的內(nèi)化能力比野生株低約 500倍, 但對吸附無明顯影響 , 小 白鼠口服 invA突變株 毒力明 顯下 降。 inv 和 inv 基因 是沙 門 A E 氏菌的持家 基因 ( house ke

25、eping gene) 。自 R ahn 等 1992年 建 立并證明擴增 invA基因可以作為檢測 沙門氏菌 的特異 方法后, 以擴增 invA的基礎(chǔ)上建立了 各種 PCR 方 法, 并證實 從各種 病 料中能特異性 檢測出 沙門 氏菌 710圖 1 沙門氏菌的 P C R 鑒定。 本文 通過 優(yōu)化 引物, 建立了擴增 inv 基 因 的 PCR 檢 測 方 法, 能 準(zhǔn) 確 擴增 沙 門 氏 菌 A inv 基因, 而非沙門氏菌擴增結(jié)果為陰 性, 說明 該方法具有較 A 好的特異性。測序結(jié)果證明所擴增的 inv A基因序列正確。 由于沙門氏菌血清型較多, 至 少有 2 500種, 而 對人

26、和 溫 血動物致病的血清型絕大多數(shù)分屬于 A2F 群, 在 疾病中經(jīng)常出M 1 DNA 大小標(biāo)準(zhǔn)參照 (DL2000); . 1 3 分離株、 C500與 C SO22的 inv 基因質(zhì)粒經(jīng) B amH? + H ind . A ? 雙酶切; 4 6 分離株、 C500與 CSO22 的 inv . A基因質(zhì)粒經(jīng) B amH? 酶切; M 2 DNA 大小標(biāo)準(zhǔn)參照 ( DL15000)。 .現(xiàn)的不足 50種, 因此血 清型鑒 定仍然 十分必 要。本文 鑒定 的 沙門氏菌血清型符合豬霍亂沙門氏菌的血清型, 并通過以上 一 系列鑒定方法, 證實分離株是豬霍亂沙門氏菌。繼續(xù)用所建 立 的鑒定方法及程

27、 序進(jìn) 行臨床 病料 的分菌, 結(jié)果分 離鑒 定出 40 多株豬霍亂沙門氏菌, 占臨床分 離豬沙門氏 菌血清 型的 60% 。 這些結(jié)果為進(jìn)一步開展豬霍亂沙門氏菌病的流行 病學(xué)調(diào)查及控 制我國豬群沙門氏菌提供了重要資料。圖 2 含 invA基因的質(zhì)粒載體 ( pMDTinvA) 的酶切鑒定 21 4 小白鼠毒力試驗 根據(jù)接種小 鼠的 發(fā)病 與死 亡情 況, 計 算出 所分 離菌 LD50 為 30 CFU。心血接 種 SS瓊脂獲得 純粹、細(xì)小、無色 透明、光 滑、圓整中 心黑 色菌 落, PCR 鑒定 為沙 門 氏菌, 對照 小鼠 不 發(fā)病。 21 5 血清型鑒定 用 A2F 群多價 血清 進(jìn)

28、行 玻板 凝集 試驗, 證 實 分離 株為 陽 性, O 因子血清凝集試 驗為 O6 與 O7 陽 性, 其 余 O因 子血 清 均為陰 性, V i抗 原 為陰 性。H 1 相為 H c 陽性, H 2相 為 1 5 , 陽性, 其余 H 因子為陰性, 抗原 式為 6, 亂沙門氏菌的典型抗 原特征。 7BcB1 5, 符合 豬霍 ,參考文獻(xiàn):1 C h iu C H, C huang C H, Ch iu S, et Sa l onella enterica serotype m C holeraesu is infect ions in ped iatric patients J. Ped

29、 iatrics 2006, , 117( 6 ): e119321196 . 2 賈愛卿, 郭愛珍, 劉維紅, 等. 致病性豬 源鼠傷寒 沙門氏菌 的 耐藥特征鑒定及耐藥性消除研究 J. 微生物 學(xué)報, ( 5): 7892795. 3 Ju liet P M, Lynne B, Peter F R. Analys is of m icrob ial comm un ity fun ct ion al d ivers ity u sing so le2carbon source u tilizat ion profiles cri2 2a t ique J. FEMSM icrob io E

30、 colo 2002 42 ( 3): 1214 , , . 4 R odrigu ez2Lazaro D, H ernandezM, Es teve T, et a. A rap id and d i2 l rect real t i e PCR2based m ethod for iden tificat ion of Sal on ella spp m m J. JM icrob iolM ethods 2003 54( 3): 3812390 , , . 2006, 463 討論本文采用 B I OLOG 全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌 鑒定。該畜牧與獸 醫(yī)2007年第 39卷第 2期#

31、11#豬胸膜肺炎放線桿菌 ZY株 T fbA基因的 克隆及序列分析陸春萌 , 李明義 , 劉新文 , 范偉興( 1. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 山東 泰安 271018 ; 266032 ; 266032) 2 青島易邦生物工程有限公司, 山東 青島 . 3 國家動物流行病學(xué)中心, 山東 青島 .1 2 2 3*摘 要: 對豬胸膜肺炎放線桿菌 (A ct inobacillu s p leuropn eumoniae, App) 生物 I型 ZY (App21) 株 T fbA 基因進(jìn)行克隆和序列測定, 結(jié)果表明: ZY 株T f 基因全長 1 782 bp, 編碼 594 個氨基酸殘基組成的多肽; 對

32、 App Z 株與 AP37 ( App21 ) 株、AP213 (App25) 株和 AP205 ( App27 ) 株的 T f bA Y bA 基因進(jìn)行分析比較, 結(jié)果表明三型 TfbA的核苷酸的同源性分 別為 99 8% 、 741 4 和 721 2% ; 氨基酸 的同源性 分別為 9917% 、 641 1% 和 58 6% 。 1 % 1 系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析結(jié)果表明, ZY株與 AP37株的親緣關(guān)系最近。分析組成 TfbA蛋白 N2 端重疊的 16 聚體多肽發(fā)現(xiàn)了 3個有轉(zhuǎn) 鐵蛋白結(jié)合活 性的 區(qū)域, 長度為 13 或 14個氨基酸。第 1 和第 3個區(qū)域在 App21 App2

33、5 App27 型間變異較大, 同源性很低, 第 2個區(qū)域在 App21 型和 App25 型兩者 、 、 之間同源性高, 幾乎相同。關(guān)鍵詞: 豬胸膜肺炎放線桿菌 ZY 株; T fbA基因; 進(jìn)化樹分析 中圖分類號: S852161 文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A 文章編號: 052925130( 2007) 0220011203C l n i g a nd se que nce a na lys i o f T fbA ge ne o fAc ti oba c ill s o n s n u p l u ropne um on i e ZY s tra in e aLU Chun2 meng , L I

34、M ing2yi, LI X in 2 U wen , FAN W ei2xing ( 1. Shandong Agricultu ra l University T aian 271018, China; ,1 2 2 3 *2 YEBI B ioengineering Co Ltd ofQ ingdao Q ingdao 266032 Ch in a . O . . , , ; 3 Ch in a A ni a l Ep izoot io logy Center Q ingdao 266032, China) . m , Abstr act: T fbA gene of Actinobac

35、 illus pleuropneum oniae ( App) ZY stra in was cloned and sequenced The results showed that T fbA gene .ofAc tinobacillus pleuropneumoniae ( App) ZY strain was 1782 bp which encoded a prote in of 594 am ino ac ids TfbA gene of ZY stra in exh ib2 . ited 9918% 、 741 4 、 7212% nuc leotide sequence iden

36、tity and 9917% 、 6411% 、 581 6% a ino ac id sequence identity with othe r App % m stra ins . e AP 37 ( App21), AP213 ( App25) and AP 205 ( App27). Phylogenetic tree analysis of TfbA gene showed the c losest re lationsh ip , i . between ZY stra in and AP37 strain. The ana lys is of ove rlapping 162m

37、er peptides compr is ing the a ino2te r ina l ha lf of the T f m olecule re m m bA 2 vea led three do a ins of 13 or 14 a ino acids in length with transferr in2binding activity The first and third dom a ins we re un ique to the T f m m . bA收稿日期: 2006203212 作者簡介: 陸春萌 ( 19762), 女, 碩士。 * 通訊作者。 5Fang C W, M ark R, Jeff J F. Characterizat ion of rh izosphere m i ry