HAS快速脫鈣液的研制和應(yīng)用

1、    HAS快速脫鈣液的研制和應(yīng)用        水楊酸溶液具有松解膠原、溶解脂肪的作用1，臨床上常用于疣和雞眼病的治療。由于骨組織中的主要成分是無(wú)機(jī)鹽和膠原，故我們?cè)囼?yàn)將水楊酸（salicylic acid）與鹽酸(hydrochloric acid)、醋酸(acelic acid)制成快速脫鈣液（簡(jiǎn)稱HAS液），用于鈣化和骨組織標(biāo)本的快速脫鈣，結(jié)果顯示其具有脫鈣作用迅速，組織結(jié)構(gòu)保存良好，切片染色清晰的優(yōu)點(diǎn)。我們對(duì)HAS液的研制及應(yīng)用進(jìn)行總結(jié)，現(xiàn)介紹如下。一、材料與方法

2、1HAS液的配制：取36%38%的鹽酸8 ml，99%醋酸5 ml，水楊酸10 g，蒸餾水87 ml，按鹽酸、醋酸、水楊酸的順序依次加入蒸餾水中攪拌混合使成混懸液。2標(biāo)本：我院1996年7月1998年6月，2年內(nèi)骨髓穿刺標(biāo)本22例，骨肉瘤髖關(guān)節(jié)離斷術(shù)后送檢下肢12例，股骨頭無(wú)菌壞死的股骨頭8例。（1）骨髓穿刺標(biāo)本：呈短柱狀，長(zhǎng)條形，長(zhǎng)0.40.8 cm，直徑0.20.3 cm；（2）骨肉瘤標(biāo)本：取腫物邊緣骨組成，體積（1.01.5）×(0.50.8）×（0.30.4）cm3；（3）股骨頭無(wú)菌性壞死標(biāo)本：取病損處股骨頭橫截面，體積同上；（4）長(zhǎng)管骨：髖關(guān)節(jié)離斷術(shù)后送檢的下肢，

3、取無(wú)病變的股骨或脛骨橫截面，體積同上。3. 方法與步驟：將待脫鈣標(biāo)本置于有HAS液的塑料容器內(nèi)，容器體積是HAS液量的3倍，HAS液量不少于待脫鈣標(biāo)本總體積的10倍。（1） 室溫脫鈣：將待脫鈣標(biāo)本置于HAS液中，室溫條件下每隔30分鐘檢查脫鈣效果，以注射針頭輕松穿入標(biāo)本為完全脫鈣標(biāo)準(zhǔn)。（2） 微波內(nèi)脫鈣：應(yīng)用sharp3A65型，最大功率850 W，將待脫鈣標(biāo)本置入500 ml HAS液中，入微波內(nèi)加熱高檔（850 W）5分鐘，達(dá)100。骨髓穿刺標(biāo)本繼續(xù)留機(jī)10分鐘，其他標(biāo)本留置30分鐘為一循環(huán)，檢查脫鈣效果，按脫鈣情況決定是否重復(fù)以上操作。 二、結(jié)果1骨髓穿刺標(biāo)本：室溫0.51小時(shí)可達(dá)脫鈣效

4、果；微波內(nèi)一個(gè)循環(huán)即可。2其余病變骨：室溫下326小時(shí)均可達(dá)脫鈣效果。3HAS 液與Jenkins液室溫下脫鈣比較：取骨肉瘤標(biāo)本12例，其中股骨11例，脛骨6例分別置入HAS液和Jenkins液中室溫下脫鈣，定期觀察脫鈣效果，記錄達(dá)完全脫鈣的時(shí)間，數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)（表1）。統(tǒng)計(jì)顯示兩種脫鈣液的標(biāo)本脫鈣時(shí)間差異有非常顯著性。 表1兩種脫鈣液脫鈣時(shí)間比較標(biāo)本例數(shù)h，±st值P值HAS液Jenkins液骨肉瘤127.5±3.737.0±11.48.52<0.005股骨頭無(wú)菌性壞死813.7±9.242.7±17.44.17<0.002 5長(zhǎng)

5、管骨1717.2±8.949.5±23.65.280.0054HAS液脫鈣標(biāo)本染色：HAS液脫鈣后的標(biāo)本，無(wú)須流水沖洗，可直接入自動(dòng)脫水機(jī)與當(dāng)日取材的其它軟組織標(biāo)本同步固定、脫水、透明、浸蠟、切片，HE染色顯示組織結(jié)構(gòu)完整，染色清晰（1-4）。1骨髓惡性淋巴瘤標(biāo)本HAS液微波內(nèi)脫鈣1個(gè)循環(huán)HE ×4002顱骨轉(zhuǎn)移癌標(biāo)本HAS 液微波內(nèi)脫鈣1個(gè)循環(huán)，免疫組化標(biāo)記細(xì)胞角蛋白LSAB法 ×1003骨化纖維瘤標(biāo)本，用HAS液微波內(nèi)脫鈣1個(gè)循環(huán)HE ×1004骨瘤標(biāo)本，用HAS液微波內(nèi)脫鈣2個(gè)循環(huán)HE ×100三、討論骨組織或鈣化標(biāo)本中固有難溶

6、于水的羥磷灰石成分而使標(biāo)本堅(jiān)硬，不能直接用于制作切片，以往的脫鈣液常用Jenkins液，使羥磷灰石轉(zhuǎn)化為可溶于水的酸式磷酸鹽、氯化鈣等，使標(biāo)本軟化。但是醋酸具有溶解膠原1，可能脫鈣和溶解膠原同時(shí)進(jìn)行妨礙鈣離子析出。HAS液中加入水楊酸后，由于水楊酸具有松解膠原和溶解脂肪的作用2。使強(qiáng)酸較容易穿透組織，而且轉(zhuǎn)化的可溶性鈣鹽也較易析出，故HAS液可顯著加快脫鈣作用。應(yīng)用微波輻射可加速組織內(nèi)分子運(yùn)動(dòng)2 ，加速升溫（水楊酸溶于熱水和醇，水溶液化學(xué)作用大于醇溶液）到100更好發(fā)揮作用，而且微波還可以破壞蛋白質(zhì)的交聯(lián)，使組織間隙通暢，有利于鈣鹽析出。HAS液100條件下脫鈣不影響染色效果，我們自1996年7月以來(lái)已應(yīng)用該液處理各種骨組織或鈣化標(biāo)本470例，顯示有明顯縮短脫鈣時(shí)間，組織結(jié)構(gòu)保存完整，染色清晰的優(yōu)點(diǎn)，100快速脫鈣縮短了標(biāo)本在酸性溶液中的滯留時(shí)間，減少了酸性溶液對(duì)染色效果的影響。HAS液具有快速脫鈣，組織結(jié)構(gòu)保存完整，染色清晰的特點(diǎn)，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。作者單位：250021 濟(jì)南，山東省立醫(yī)院病理科參考文獻(xiàn)1葉松柏.消毒防腐藥，藥理學(xué)北京：