快速液相色譜法與常規(guī)高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯及有關物概要

1、快速液相色譜法與常規(guī)高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯及有關物作者：張斗勝 李進 許明哲 王晨 姚蕾 相秉仁 胡昌勤 【摘要】 目的 比較分 析快速液相色譜法(UFLC)與常規(guī)液相色譜法(HPLC)測定克林霉素磷酸酯含量及 有關物質。方法UFLC法色譜柱采用 Waters C18雜化柱(50mnK 4.6mm2.5 卩 m),流速 1.5ml/min ; HPLC法色譜柱采用 Apollo C18作者：張斗勝 李進 許明哲 王晨 姚蕾 相秉仁 胡昌勤【摘要】目的比較分析快速液相色譜法(UFLC)與常規(guī)液相色譜法(HPLC)測定克林霉素磷酸酯含量及有關物質。方法UFLC法色譜柱采用 Waters

2、C18雜化柱(50mnX 4.6mm 2.5 卩 m),流速 1.5ml/min ; HPLC法色譜柱采用 Apollo C18(250mrX 4.6mm 5 卩 m),流速 1.0ml/min。兩方法均以 0.1mol/L 磷酸二氫 鉀(85%的磷酸調pH3.5):乙腈：甲醇(700 : 150： 150)為流動相，檢測波長 210nm結果 在UFLC法中，克林霉素磷酸酯在0.011.5mg/ml呈良好線性， r=0.9999 ;最低檢測限為20ng；最低定量限為60ng；精密度RSD為0.41%。與 HPLC法相比，該法測定克林霉素磷酸酯含量快速、準確、靈敏度高；但測定有 關物質，其專屬性

3、、準確性不如 HPLC法，雜質檢出數(shù)目少且部分雜質分離不完 全。結論UFLC法可準確、快速、高效測定克林霉素磷酸酯含量，適合在工作 量較大的檢測項目如制劑含量、含量均勻度及溶出度中應用；但經(jīng)簡單方法轉 換建立的UFLC方法通常難以勝任對藥物復雜體系如有關物質的分析?！娟P鍵詞】 物質快速液相色譜法； 高效液相色譜法； 克林霉素磷酸酯； 有關ABSTRACT Objective To compare and analyze the UFLC and HPLC method for determination of the content of clindamycin phosphate and i

4、ts related substances.Methods UFLC: a Waters C18 hybridcolumn was used, the flow rate was 1.5ml/min; HPLC: a Apollo C18 Column was applied, the flow rate was 1.0ml/min; 0.1mol/L potassium dihydrogen phosphate (pH was adjusted to 3.5 by 85% phosphoric acid) : acetonitrile : methanol (700 : 150: 150,

5、V/V) as mobile phase; the detective wavelength was 210nm. ResultsThe linear range ofclindamycin phosphate was 0.011.5 mg/ml, r=0.9999; the LOD was20ng and the LOQ was 60ng, and RSD was 0.41%. The accuracy of UFLC method in determination the content of clindamycin phosphate was good,and it was more s

6、en sitive and rapid tha n HPLC, but in determ in ati on of related substa nces, it had a poor performa nee.Con clusi onTheUFLC method was proved to be simple, accurate, rapid and high efficie nt, so it could be applied to rapid an alysis of the content of cli ndamyci n phosphate in preparati ons tha

7、t n eed detect the test items such as content, uni formity of dosage un its, dissoluti on and so on, however this UFLC method was not suitable for determ in ati on of the related substa nces in the comp onen ts.KEY WORDS Ultrafast liquid chromatographymethod; HPLC;Cli ndamyci n phosphate;Related Sub

8、sta nces快速液相色譜（ultrafast liquid chromatography , UFLC）是一種新的快速 分析技術，它與超高效液相色譜 （ultraperforme nee liquid chromatography , UPLC的最大區(qū)別是其不需要系統(tǒng)超高壓（485830bar），在略高于普通液相色 譜壓力極限（345bar）下即可實現(xiàn)高流速、高分辨率分析，適用于要求高通量、 高效率的分析工作，在藥物分析領域前景廣闊1, 2。目前，國內外已有 UFLC分析藥物的報道24。本文以克林霉素磷酸酯注射液為研究對象，借 鑒藥品標準中收載的HPLC法5, 6，建立了克林霉素磷酸酯 U

9、FLC分析方 法，并與常規(guī)HPLC法分析克林霉素磷酸酯含量及有關物質的情況進行了比較。 結果表明：UFLC法能準確測定克林霉素磷酸酯含量，適用于工作量較大的檢測 項目如制劑含量、含量均勻度及溶出度等的快速測定；但對有關物質的分析， 經(jīng)簡單方法轉換建立的UFLC方法，雜質分離的數(shù)目少，部分雜質間的分離度變 差，其分離特性不如常規(guī)的HPLC法。1 儀器與試藥島津液相色譜儀（LC20AT泵，SIL20AC自動進樣器，SPD M20A檢測器經(jīng)改裝適應快速分離，LC Solution色譜工作站）與Waters Allianee 色 譜分離單元（2690泵，996PDA監(jiān)測器，Millinium 2.3色

10、譜工作站）?？肆置顾亓姿狨φ掌罚ㄅ?30486200502,含量79.0%），克林霉素對照品（批號130422200402,含量86.5%），林可霉素對照品（批號130432200407,含量86.2%）;克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液和克林霉素磷酸酯氯化鈉注射液均由 中國藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純，水為雙蒸水， 乙腈、甲醇為色譜純。2 方法與結果2.1 供試品溶液與對照品溶液的制備（1）供試品溶液取克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液和克林霉素磷酸酯氯化鈉注射液用流動相稀釋成0.3mg/ml的溶液，分別稱為溶液（A）和溶液（B）。另 取上述兩供試品溶液同法稀釋成 3.0mg/m

11、l的溶液，作有關物質分析供試液。(2) 對照品溶液 分別取克林霉素磷酸酯、克林霉素和林可霉素對照品 適量，精密稱定；加流動相溶解定量稀釋制成含上述三種對照品各約 0.3mg/ml 的混合溶液。2.2 實驗方法參考文獻5, 6。UFLC分析采用 Waters XTerraTM MS C18雜化柱 (50mnK4.6mm 2.5 卩 m),常規(guī) HPLC分析采用 Apollo C18(250mmX4.6mm 5卩m)色譜柱。流動相為0.1mol/L磷酸二氫鉀緩沖鹽(85%磷酸調pH3.5):乙 腈：甲醇(700 : 150： 150)(需用0.22卩m濾膜過濾)；檢測波長210nm流速分 別為1.

12、5ml/min(UFLC)和1.0ml/min(常規(guī)HPLC)柱溫25C;供試品濃度 0.3mg/ml(含測),3.0mg/ml(有關物質)；進樣體積分別為2卩l(xiāng)(UFLC)和 10卩l(xiāng)(常規(guī)HPLC)2.3 結果(1) 色譜行為取供試品溶液(A)，分別用UFLC法和常規(guī)HPLC法進行測定,其典型的色譜圖見圖 1 。從圖1可知，克林霉素磷酸酯在 UFLC測定中的保留時間(tR)約 4.3min , 56min即可完成分析；在常規(guī) HPLC法中，主峰的tR約14.8min。 UFLC法在測定時間上較HPLC法快4倍多，且主峰峰型對稱，理論板數(shù)達 7000 左右，高于常規(guī)HPLC理論板數(shù)(約3000)。(2) 方法學驗證線性范圍和最低檢測限精密稱取克林霉素磷酸酯對照品約 30mg置10ml 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻；精密吸取適量，用流動相稀釋成0.1、0.3、0.6、1.0、1.5 和 3.0mg/ml