不同產(chǎn)地的蒲公英中咖啡酸和綠原酸含量比較

1、不同產(chǎn)地的蒲公英中咖啡酸和綠原酸含量比較馬杰，張淑慧，赫立恩，邱志宏，孫穎光（河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊市 050051）摘要 目的：測定不同產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸和綠原酸含量。方法：高效液相色譜法，色譜條件為：Sino Chrom ODS-BP C18柱（5µm, 4.6mm×250mm ），流動相為0.02mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液甲醇（7030），流速1.0ml·min-1 ，檢測波長323nm。結(jié)果：回歸方程：咖啡酸Y=2.59X+0.0049 ，r=0.9997，平均回收率(n=3)為99.1%，RSD為0.71%；綠原酸Y=1.60X

2、+0.00154，r=0.9995，平均回收率(n=3)為99.4%，RSD為0.96%。結(jié)論：東北產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸和綠原酸含量最高，河北產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸含量最低，湖北產(chǎn)地綠原酸含量最低。關(guān)鍵詞 不同產(chǎn)地；綠原酸；咖啡酸；高效液相色譜法 中圖分類號 R965.1 文獻(xiàn)標(biāo)示碼 B 文章編號Determination of Chlorogenic Acid and Caffeic Acid in Taraxacum from different habitatsMajie,Zhangshuhui,Hwlien,Qiuzhihong,Sunyingguang(Department of Phar

3、macy,Hebei General Hospital,Shijiazhuang 050051)ABSTRACT：OBJECTIVE To determine the content of caffeic acid and chlorogenic acid in Taraxacum from different habitats. METHODS HPLC analysis was performed on a Sino Chrom ODS-BP C18 column(5µm, 4.6mm×250mm)，0.02mol·L-1 phosphate buffer-m

4、ethonal(70: 30) as mobile phase. the flow rate was 1.0ml·min-1 and the detection wavelength at 323nm 。RESULTS caffeic acid Y=2.59X+0.0049，r=0.9997，the average recovery was 99.1%；chlorogenic acid Y=1.60X+0.0015，r=0.9995，the average recovery was 99.4%. CONCLUSION The method is appropriate for the

5、 determination of caffeic acid and chlorogenic acid.The content of caffeic acid and chlorogenic acid, The content of caffeic acid of Taraxacum(Hebei province) is the lowerest, The content of chlorogenic acid of Taraxacum(Hubei province) is the lowerestKEY WORD：different habitats；caffeic acid ；chloro

6、genic acid；HPLC 蒲公英（Taraxacum）為野生，均以全草入藥，我國約百種，產(chǎn)地分布華北、東北、華中和西南，蒲公英藥用資源極為豐富，目前最常用的有6個產(chǎn)地。蒲公英具有廣譜抗菌作用，其主要抗菌成分為咖啡酸和綠原酸 2。本文用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸和綠原酸含量。測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地蒲公英中的咖啡酸和綠原酸含量差別較大，說明制劑中使用地道藥材的必要性。1 儀器與試藥2695型高效液相色譜儀，2487型紫外檢測器，Empower色譜工作站，美國Waters公司；色譜柱Sino Chrom ODS-BP（4.6mm×250mm,5µm ），大連依

7、利特分析儀器有限公司；甲醇為HPLC級，美國Fisher公司；咖啡酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110885-200102），綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110753-200413）；藥材：河北、河南、湖北、東北、山東、內(nèi)蒙干燥蒲公英全草。2 方法與結(jié)果2.1色譜條件 色譜柱：Sino Chrom ODS-BP C18（5µm, 4.6mm×250mm ），流動相：0.02mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液甲醇（7030），流速：1.0ml·min-1 ，檢測波長：323nm，進(jìn)樣量：10l。2.2 溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品20m

8、g，置100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得0.2mg·mL-1咖啡酸對照品貯備液；精密稱取綠原酸對照品20mg，至100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得0. 2 mg·mL-1綠原酸對照品貯備液。取蒲公英藥材500g，加913倍量水，靜置30min，加熱煮沸1.5h，趁熱過濾，得濾液，藥渣再加6倍量水，加熱煮沸1h，趁熱過濾，棄去藥渣，得濾液，合并濾液，濃縮，經(jīng)過兩次醇沉、回流后，即得蒲公英膏子，膏子用微孔濾膜過濾兩次，再稀釋30倍，即得供試品溶液。2.3 線性關(guān)系的考察 分別精取濃度為20、40、60、80、100 µ

9、;g·mL-1的咖啡酸對照品溶液10µL ，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，以咖啡酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2.59X+0.0049，r=0.9997，在20100µg·mL-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（n=5）；分別精取濃度為10、20、30、40、50 µg·mL-1的綠原酸對照品溶液10µL ，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，以綠原酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=1.60X+0.0015，r=0.9995，在1050g·mL-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（n=5）。2.4 精密度試驗 取高、中、低3個濃度的對

10、照品溶液，在上述色譜條件下，每個濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量10L，計算精密度：咖啡酸RSD1.226%、綠原酸RSD 1.774%。2.5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，在室溫下放置，分別在0、1、3、5、7h測定咖啡酸和綠原酸的峰面積，結(jié)果表明咖啡酸和綠原酸在7h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為0.84%和1.65%。2.6 加樣回收試驗 分別精密吸一定量的對照品溶液，依次加入精密吸取已知河北產(chǎn)地供試品，按供試品溶液制備項下處理，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，回收率結(jié)果見表1。表1 咖啡酸、綠原酸回收率試驗結(jié)果Tab1 Results of recovery test of Caffeic Acid and Ch

11、lorogenic Acid（n=3）品名 編號 樣品含量µg 對照品加入量µg 測得量µg 回收率% 平均值% RSD%1 0.144 0.256 0.392 97.97咖啡酸 2 0.144 0.342 0.483 99.69 99.10 0.71 3 0.144 0.427 0.587 99.21 4 0.040 0.126 0.165 99.01綠原酸 5 0.040 0.167 0.210 100.90 99.40 0.96 6 0.040 0.209 0.246 98.012.7 不同產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸、綠原酸含量測定 不同產(chǎn)地的蒲公英藥材按供試品溶液

12、制備項下處理后，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，用外標(biāo)法計算蒲公英中咖啡酸、綠原酸的含量，結(jié)果見表2，色譜圖見圖1。表2 不同產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸、綠原酸含量Tab2 The content of Caffeic Acid and Chlorogenic Acid in Taraxacum from different habitats編號 產(chǎn)地 咖啡酸含量（mgg-1） 綠原酸含量（mgg-1）1 河北 0.0665 0.03422 河南 0.0938 0.03393 湖北 0.1088 0.02654 東北 0.1351 0.04055 山東 0.0864 0.02906 內(nèi)蒙 0.1315 0.0313 A B圖1 色譜圖Fig1 HPLC chromatogramsA. 對照品 (reference substance) B.蒲公英藥材（Taraxacum）Lys. 咖啡酸（Caffeic Acid） kfs. 綠原酸（Chlorogenic Acid）4 討論中國藥典（2005年版）一部采用高效液相色