Agilent氣質(zhì)聯(lián)用儀軟件定量方法圖示

1、實驗室練習6： 數(shù)據(jù)定量分析在這個實驗中,您將建立具有三個濃度級別的校正數(shù)據(jù)庫,并將其保存為方法的一部分。該方法用于未知物的定量計算。在這個實驗中：· 獲取所需信息以設置校正方法· 建立一個5 個濃度級別的含內(nèi)標的校正數(shù)據(jù)庫· 定量一個未知化合物對以下化合物進行定量：內(nèi)標目標化合物Tributyl phosphateAcetamide,N-phenylphenacetincaffein積分精確定量的重要因素之一是正確積分。1) 通過選擇File/LoadDataFile調(diào)用C:MSDCHEM1DATAVOADATA CLWV020.D 文件，選擇 Method /

2、 Load Method 調(diào)用DEFAULT.M 方法。2) 選擇Chromatogram / Select Integrator 及 RTE Integrator 單擊 OK。OK 對積分來說只是臨時選擇?，F(xiàn)在讓我們對 caffein 設定積分參數(shù)。3) 選擇 Chromatogram / Extract Ion Chromatograms 完成圖1 所示的需要輸入的項目（注意時間范圍）單擊 OK。圖 14) 現(xiàn)在編輯 RTE 的缺省積分參數(shù)。選擇 Chromatogram / MS Signal Integration Parameters 完成圖 2 所示的要輸入的項目。須知當欲在最小峰

3、面積 (minimum peak area) 中添入大于100 的數(shù)之前 必須選中Area Counts 選項框。 圖 25) 單擊 OK 接受所做的改變。 現(xiàn)在 通過選擇 Chromatogram / Integrate 用這些參數(shù)做 積分。注意離子 194被積分，而離子67沒有被積分。讓我們降低最小面積來解決這一問題。6) 選擇 Chromatogram / MS Signal Integration Parameters 完成圖 3 中所示的各項內(nèi)容。圖 37) 單擊 Save 和 OK輸入積分文件名字 VOLATILE.P，單擊 OK。圖 48) 在積分參數(shù)框中單擊OK 返回離子質(zhì)量色

4、譜。在Chromatogram / Integrate 用降低后的最小峰面積參數(shù)做 積分。注意此時離子67 和194都被積分了?，F(xiàn)在我們建立并保存了積分參數(shù)，它將被用于定量數(shù)據(jù)庫。9) 選擇 Chromatogram / Draw Chromatogram 查看當前數(shù)據(jù)文件的 TIC 圖。建立校正曲線：無論SCAN 和SIM 方式，用提取離子質(zhì)量色譜做校正和定量比用總離子流色譜峰要好，因為能提高信噪比。用提取離子定量比用TIC 精度更高。TIC 則用于開始設置校正參數(shù)時確定保留時間。1) 選擇 Calibrate / Set Up Quantitation.。2) Quantitation D

5、atabase Globals 對話框會顯示出來。完成圖 5 中所需填入的內(nèi)容。圖 5注意標有NOTICE 處用了 RTE 積分參數(shù)文件。 3) 完成后單擊 OK。Edit Compounds 框（圖 6）會顯示出來：圖 64) 單擊 Insert Above，圖 7 會顯示出來：圖 7注意:必須首先輸入內(nèi)標。所有在內(nèi)標之后輸入的化合物都用它定量，直到遇到下一個內(nèi)標。5) 將7-13 分鐘范圍內(nèi)的色譜圖放大在窗口中。對準窗口2 中10.7分鐘處雙擊鼠標右鍵。在屏幕上會出現(xiàn)什么信息？_注意保留時間(箭頭在X 軸的位置)被填寫在QuantSetup 窗口。同時所指定保留時間的質(zhì)譜顯示在窗口1。6)

6、 輸入化合物名稱。填入化合物名稱。第二個化合物是 Tributyl phosphate 大約在10.7分鐘。注意如果使用氘代內(nèi)標時區(qū)分定量，化合物是靠信號而不是保留時間，因為內(nèi)標和要定量的化合物共流出，因此峰會重疊。ISTD 選項被選中。7) 將箭頭移到窗口 將箭頭放在M / Z93 上同時擊鼠標左右鍵。 會發(fā)生什么？_8) 用同樣方法輸入一個或幾個特征離子。對于 Tributyl phosphate ，特征離子是 135 。9) 全部輸入之后，在Quant Setup 窗口底部擊 Save 鍵 。這就完成了需要在定量數(shù)據(jù)庫中添加單個化合物的任務。10) 重復以上步驟，把表1 中每個化合物輸入

7、定量數(shù)據(jù)庫。（注意 Tributyl phosphate 已經(jīng)輸入了。）化合物名稱內(nèi)標近似的保留時間目標離子特征離子Tributyl phosphateYes10.799155、211Acetamide,N-phenyl8.593135phenacetin11.1108109、179、137caffein12.2194109、67表 111) 最后一個化合物輸入并保存之后, 在定量設置欄目擊Exit。Edit Compounds 畫面（圖 9）再次顯現(xiàn)。注意此時化合物的列出順序。定量化合物永遠在內(nèi)標之后（不管保留時間?。┯?個化合物列于表中。如有遺漏，點擊遺漏的化合物，然后單擊InsertAb

8、ove.。當定量設置欄再次出現(xiàn)時輸入化合物名字，保留時間，目標 / 特征離子。然后單擊 Save 并單擊 Exit。一旦4個化合物全部輸入，單擊 Exit 退出編輯化合物對話框（圖 9）。12) 系統(tǒng)提示目前的文件尚未定量。單擊Yes 對文件定量。我們已經(jīng)添加了化合物信息，現(xiàn)在要添加校正信息。13) Update Calibration 對話框（圖 8）如下：圖 814) 在 Update Calibration 選項框中，為該校正級別輸入一個標識。缺省值是數(shù)字（如 “1”）但也可以輸字母（如 “Low”）。為該級別輸入化合物濃度 (20) 注意已經(jīng)填入了ISTD 濃度。我們在哪里輸入過這個量

9、？_15) 單擊 Do Update 鍵。定量更新程序會提取指定離子并對其進行RTE 積分。該信息存放在定量數(shù)據(jù)庫中。Edit Compounds 畫面（圖 9）顯示出來。圖 916) 單擊 View 鍵查看三頁定量信息。在第3 頁對錯誤的值進行編輯。17) Next 鍵用來查看第二個化合物的條目。單擊 OK 離開該畫面，而單擊Exit 退出Edit Compounds 面板回到數(shù)據(jù)分析。現(xiàn)在我們擁有了含一個級別的校正數(shù)據(jù)庫。下一步是為校正數(shù)據(jù)庫添加第二個濃度級別。建立多濃度級別校正數(shù)據(jù)庫1) 調(diào)用數(shù)據(jù)文件 C:MSDCHEM1DATAVOADATACLWV050.D.。 2) 選擇 Cali

10、brate / Update / Update One Level / OK 系統(tǒng)將提示該數(shù)據(jù)文件未定量，單擊Yes 進行定量。 3) 下一步進入Update Calibration 對話框。將濃度改為 50，將校正級別改為2，單擊 Do Update 自動為數(shù)據(jù)庫插入新濃度級別。4) Exit 退出edit compounds 界面。從這一標準校正曲線更換保留時間和離子比例，會改寫原來用光標輸入的和這一標準的微小差別。 5) 選擇Calibrate / Update / Update One Level / OK 填寫圖 10 所示各項內(nèi)容，單擊Do Update。圖 106) 按照1) 至

11、 5) 步驟輸入下列濃度級別。不必再次輸入保留時間和離子比例。數(shù)據(jù)文件和化合物濃度列于表 2 中：數(shù)據(jù)文件濃度濃度級別號CLWV100.D100ppm3CLWV150.D150ppm4CLWV200.D200ppm5表 2內(nèi)標濃度與前兩個標樣相同 (50 ppm)。7) 5 個濃度級別輸入之后，單擊 View 以便檢查濃度是否正確。8) 選擇第一個化合物，單擊Plot 看它的標準曲線，包括其校正因子和相關系數(shù)。出現(xiàn)什么信息？_由于畫內(nèi)標化合物的曲線是無意義的，您不可能畫出內(nèi)標化合物的校正曲線，為什么內(nèi)標化合物曲線是無意義的？_9) 在Compound 窗口單擊 Next（如必要擊 OK 保存更

12、改）畫面，化合物 #2 以校驗該化合物的第二個濃度級別的數(shù)據(jù)。在Plot 窗口單擊Print 打?。ㄟ@是獲得方法文件的較好途徑）。10) 打印之后擊 OK，改變線性擬合方式取得最佳平均響應因子 (Avg of Response Factors)，再做曲線。反復用 Linear Regr，F(xiàn)orce (0,0) 擬合包括原點在內(nèi)的各點，加以比較。重新設置擬合方式Avg of Response Factors。對本次分析何種擬合方式更可靠，為什么？_11) 查看過三頁化合物信息之后，選 OK 然后 Exit 退出該窗口。該校正數(shù)據(jù)庫當前存儲在計算機RAM 中，所以下一步是使其永久保存于硬盤中。校正

13、數(shù)據(jù)庫作為方法的一部分保存。 12) 選擇 Method / Save Method.。13) 為新方法命名為 CLASSVOA.M。建立了新方法，原來的方法 (DEFAULT.M) 未改變。我們常用現(xiàn)有的方法作為模板建立新方法。方法自動存儲在缺省地址 C:MSDCHEMnMETHODS 這里 n 是儀器編號。使用自動定量設置AutoQuant Setup（自動定量設置）提供了一種給定量數(shù)據(jù)庫創(chuàng)建化合物列表的半自動方法。下列指南可引導您使用 AutoQuant Setup（自動定量設置）的全部步驟。該指南使用化學工作站隨附的演示文件。在該指南中使用 default.m 和 evaldemo.d

14、 之前，請先復制一份。1. 在 Data Analysis（數(shù)據(jù)分析）中，加載示范方法 C:MSDCHEM1METHODSDEFAULT.M 和示范數(shù)據(jù)文件 C:MSDCHEM1DATAEVALDEMO.D。2. 在 Spectrum / Select Library（譜圖/選擇譜庫）下選擇 DEMO.L。3. 選擇 Calibrate / AutoQuant Setu（校準/自動定量設置）。4. 出現(xiàn) Quantitation Database Globals（全局定量數(shù)據(jù)庫）對話框時，進行如下更改：校準標題 鍵入 AutoQuant Tutorial使用 RTEINT 選中該對話框來使用

15、RTE 積分器（不選則使用化學工作站積分器）。單擊 OK（確定）。5. 出現(xiàn) Dodecane（十二烷）的 Choose Compound Name（選擇化合物名稱）對話框時，單擊 Skip（跳過)。為了示范，您可以先跳過這個化合物，以后再把它添加到數(shù)據(jù)庫中。6. 接下來出現(xiàn) Biphenyl（聯(lián)苯）。保持缺省名稱，單擊 Add（添加）。7. 接著出現(xiàn) 4-Chlorobiphenyl（4-氯聯(lián)苯）。保持缺省名稱，單擊 Add（添加）。8. 接著出現(xiàn) Methyl palmitate（十六酸甲酯）。要將它指定為內(nèi)標，單擊 ISTD（內(nèi)標）。單擊 ISTD 同時把化合物添加到數(shù)據(jù)庫中。9. 當軟

16、件提示 Quantitate now?（現(xiàn)在定量？）時，單擊 Yes（是）。文件量化后，出現(xiàn) Update Calibration（更新校準）對話框。10. 選擇 Add New Level（添加新校準級），輸入如下內(nèi)容：Calib Level ID = 50Cmpd Conc = 50ISTD Conc = 50然后單擊 Do Update（執(zhí)行更新）。11. 顯示 Edit Compounds（編輯化合物）對話框時，注意十六酸甲酯處于列表頂端的正確位置，在其名稱旁邊有一個星號說明它是內(nèi)標。12. 單擊 Exit（退出）關閉對話框，或單擊 View（查看）檢查第 1 頁、第 2 頁和第 3

17、頁中的各化合物參數(shù)。13. 要了解怎樣向定量數(shù)據(jù)庫中插入化合物，請選擇 AutoQuant Setup（自動定量設置）。14. 選擇 Insert Compounds in Database（在數(shù)據(jù)庫中插入化合物），單擊 OK（確定）。15. 出現(xiàn) Quantitation Database Globals（全局定量數(shù)據(jù)庫）對話框時，不要更改參數(shù)。單擊 OK（確定）。軟件會再次開始鑒定峰。出現(xiàn) Choose Compound Name（選擇化合物名稱）對話框。16. 對話框中出現(xiàn) Dodecan（十二烷）時，保持缺省名稱并單擊 Add（添加）。出現(xiàn) Edit Compound（編輯化合物）對話

18、框。17. 選中 Biphenyl（聯(lián)苯），選擇一個插入點并單擊 Insert Above（插入上文）。18. Choose Compound Names（選擇化合物名稱）對話框中留存的 3 個化合物已經(jīng)存在定量數(shù)據(jù)庫中，因此單擊 Skip（跳過）。跳過這 3 個化合物后，軟件將問您是否 Stop Now?（現(xiàn)在停止?）單擊 Yes（是）。這一特點在對大量化合物進行數(shù)據(jù)庫操作時非常有用。19. 系統(tǒng)問您是否希望定量數(shù)據(jù)庫時，單擊 Yes（是）。20. 出現(xiàn) Update Calibration（更新校準）對話框時，選擇 Recalibrate（重新校準）并對 Responses（響應）和 Retention Times（保留時間）字段選擇替換。單擊 Do Update（進行更新）。21. 出現(xiàn) Edit Compounds（編輯化合物）對話框時，單擊 View（查看）并檢查數(shù)據(jù)庫中 4 個化合物中每個化合物的第 3 頁。注意您加入的