各種緩沖液的配制方法-

1、各種緩沖液的配制方法Na2HPO4-檸檬酸鈉緩沖液PHLNa2HPO4 (ml)L檸檬酸鈉 (ml)PHLNa2HPO4 (ml)L檸檬酸鈉 (ml)Na2HPO4。2H2O，分子量= L溶液含L檸檬酸. H2O，分子量= L溶液含L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（L）PHL檸檬酸（ml）L檸檬酸鈉（ml）PHL檸檬酸（ml）L檸檬酸鈉 (ml)檸檬酸. H2O，分子量= L溶液含L檸檬酸鈉. 2H2O，分子量=；L溶液含 g/L醋酸緩沖液（L，18）PHLNaAC(ml)LHAC(ml)PHLNaAC(ml)LHAC(ml) H2O,分子量= L溶液含L（1）醋酸鹽溶液的配制：醋酸醋酸鈉緩沖液&#

2、160;    取醋酸鈉,加冰醋酸20ml，再加水稀釋至250ml,即得。           醋酸醋酸鈉緩沖液    取無(wú)水醋酸鈉20g,加水300ml溶解后，加溴酚藍(lán)指示液1ml及冰醋酸6080ml，至溶液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至1000ml，即得。 醋酸醋酸鈉緩沖液    取2mol/L醋酸鈉溶液13ml與2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含銅1mg的硫酸銅溶液,再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液   

3、    取醋酸鈉18g,加冰醋酸,再加水稀釋至1000ml,即得。     醋酸醋酸鈉緩沖液        取醋酸鈉,加水50ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至，再加水稀釋至100ml，即得。     醋酸醋酸鈉緩沖液      取醋酸鈉，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀釋至500ml，即得。用醋酸和醋酸鈉配制的緩沖溶液的PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)（在此，C(HAc)指醋酸的濃度，C(N

4、aAc)指醋酸鈉的濃度,Ka是醋酸的解離常數(shù)=*10-5（乘10的-5次方），PKa=-lgKa=，將PH=代入，可得C(NaAc)/C(HAc)= 通常我們配制時(shí)會(huì)使C(HAc)=L，或是C(HAc)=L等。若是配制C(HAc)=L，則C(NaAc)=L 稱(chēng)量醋酸鈉固體質(zhì)量為82*=46克 量取冰醋酸體積為*1000/=。 將稱(chēng)好的醋酸鈉和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、攪拌均勻即可。 當(dāng)然若想配制其它的濃度，也可照公式計(jì)算即可，通常緩沖溶液不能配的太稀，否則緩沖能力要下降，太濃的話又浪費(fèi)試劑。苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖液PHLNaOH(ml)L苯二甲酸氫鉀（ml）加水至(ml)L苯二

5、甲酸氫鉀溶液：稱(chēng)取在硫酸干燥器中干燥過(guò)24小時(shí)的苯二甲酸氫鉀溶于水中，稀釋至500ml。磷酸緩沖液（L）PHLNa2HPO4 (ml)LNaH2PO4 (ml)PHLNa2HPO4 (ml)LNaH2PO4 (ml)58Na2HPO4 .2 H2O ,分子量=， L溶液含LNaH2PO4 . 2 H2O ,分子量=， L溶液含LNaH2PO4 . H2O,分子量=， L溶液含LNa2HPO4 .12 H2O,分子量=， L溶液含L磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法 PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH

6、 PBS緩沖液（）：NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L稱(chēng)7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至，最后加蒸餾水定容至1 L。保存于4冰箱中即可。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01 M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制： 0.2M Na2HPO4：稱(chēng)取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M Na

7、H2PO4：稱(chēng)取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各種濃度PB(pH=的配制：先配 0.2M PB (pH=，100ml)：取19ml L的 NaH2PO4， 81ml L 的 Na2HPO4, 即可。然后 只需將0.2M PB (pH=按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋 即可，如：0.1M PB（PH=） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB （PH=）：取50ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB （PH=）：取100ml 0.2 M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的話，加入

8、NaCl 至%（g/100ml）即可。另：其它各種另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml） 92 8 90 10 85 15 51 49 45 55 38 62 33 67 28 72 23 77 19ml 81ml 16 84 13 87 7 93 0.01M 磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱(chēng)取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至，最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa

9、)高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4冰箱中。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時(shí)候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。 PH H2O 1000 1000 1000 1000 NaCl Na2HPO4 NaH2PO4 根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過(guò)晝夜的時(shí)間后，PH值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過(guò)偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注

10、意了，PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問(wèn)題。每次使用前最好用試紙測(cè)一下過(guò)夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。 PBS緩沖液 稱(chēng)取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO412H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆?。PBST緩沖液 取300l Tween-20 加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋?zhuān)敲矗趧偱浜脻饪s液時(shí)，PH在左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用

11、氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。 十倍稀釋以后，PH自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次 的PBS配方詳細(xì)1. NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L 2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS

12、)的配制： 甲液：L Na2HPO4溶液 ：稱(chēng)取磷酸氫二鈉9.465g 7.099g,加蒸 餾水至1000ml ; 乙液：L KH2P04溶液: 稱(chēng)取磷酸二氫鉀, 9.07g 6.803g,加蒸餾水至1000m1。 將甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見(jiàn)下表: pH 甲液ml 乙液mI 你要配制pH=的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。硼酸緩沖液（L硼酸鹽）PHL硼砂（ml）L硼酸（ml）PHL硼砂（ml）L硼酸（ml）硼砂,分子量=,L溶液=L硼砂含L硼酸，分子量=,L溶液含L硼砂易失去結(jié)晶水，必須在帶塞得瓶中保存；硼砂溶液也

13、可以用半中和的硼酸溶液代替鹽酸-氯化鉀緩沖液PHLHCl(ml)LKCl(ml)加水至(ml)PHLHCl(ml)LKCl(ml)加水至（ml）100100100100100100100100100100100100LKCl溶液：溶氯化鉀于水中，稀釋至500ml苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖液PHLHCl (ml)L苯二甲酸氫鉀（ml）加水至（mi）PHLHCl (ml)L苯二甲酸氫鉀（ml）加水至（mi）100100100100100100100100100L苯二甲酸氫鉀溶液：稱(chēng)取在硫酸干燥器中干燥過(guò)24小時(shí)額苯二甲酸氫鉀溶于水中，稀釋至500ml磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液PHLNaOH(ml)L磷酸二氫鉀(ml)加水至（ml）PHLNaOH(ml)L磷酸二氫鉀(ml)加水至（ml）100100100