木質(zhì)素生物降解過程中木質(zhì)素介體反應系統(tǒng)的研究進展

1、綜述評論木質(zhì)素生物降解過程中木質(zhì)素-介體反應系統(tǒng)的研究進展 YA N W C閆文超,黃 峰*,高培基(山東大學微生物技術國家重點實驗室,山東濟南250100摘 要: 對木質(zhì)素降解酶作用過程中介體物質(zhì)研究進展進行評述,包括漆酶/介體系統(tǒng)(L M S在生物漂白、脫木質(zhì)素、和環(huán)境污染治理方面的研究應用情況及其動力學研究進展。關鍵詞: 木質(zhì)素酶系統(tǒng);漆酶/介體系統(tǒng);生物漂白;木質(zhì)素降解中圖分類號:T Q 351.013;O 636.2 文獻標識碼:A 文章編號:0253-2417(200301-0083-06ADV ANCES OF CU RRENT IN V EST IGAT IONS ON MED

2、IAT ORSYST EM FOR LIGN IN BIO -DEGRA DAT ION OF LIGN INYAN Wen -chao,H UANG Feng,GAO Pe -i ji(State key Lab o f M icrobial Technology ,Shandong Univer sity ,Ji nan 250100,ChinaAbstract:Advances of current inv estigations on mediator systems for bio -degradation of lignin are reviewed,includ -ing app

3、lication researches of laccase -mediator -system (L M Son bio -bleaching ,bio -delignification,pollution tr eat -ment,and kinetic studies o f L M S.Key words:lignolytic systems;laccase mediator system(LM S;bio -bleaching ;delignification木質(zhì)素是一種具有復雜而不規(guī)則的三維網(wǎng)狀結構的高聚物。它的結構基本單元是苯基丙烷,靠多種不同的碳-碳鍵和醚鍵連接而形成一種生物大

4、分子物質(zhì),它是水不溶性的。植物木質(zhì)化組織中含木質(zhì)素20%30%。木質(zhì)素與纖維素和半纖維素之間具有物理或化學結合,使植物的機械強度提高。白腐真菌以及某些細菌可將木質(zhì)素徹底降解,使有機碳變成無機碳返回自然界碳循環(huán)圈。木質(zhì)素的含量僅次于纖維素,到目前為止尚未被很好的利用。很久以來人們對于用真菌在制漿造紙工業(yè)中進行木質(zhì)素降解和生物漂白方面做了許多實驗和努力,然而要想得到令人滿意的木質(zhì)素降解,必須經(jīng)過長時間的培養(yǎng),這與現(xiàn)有的制漿和漂白工藝不相容。而且,與傳統(tǒng)的化學漂白或酶處理比較起來,對活的有機體的控制也很不方便。使用木質(zhì)素酶系統(tǒng)替代真菌培養(yǎng)進行制漿漂白,被認為是技術上可行的,它的應用不需要對現(xiàn)有的工藝

5、流程做大的改動。收稿日期:2001-07-26作者簡介:閆文超(1979-,男,貴州貴陽人,碩士研究生,從事木質(zhì)素降解機理研究。*通訊聯(lián)系人第23卷第1期M ar.20031 木質(zhì)素降解酶系統(tǒng)1.1 主要的木質(zhì)素降解酶目前發(fā)現(xiàn)的最主要的木質(zhì)素降解酶是木質(zhì)素過氧化物酶(LiP、錳過氧化物酶(MnP和漆酶(lac -case,但其它的酶類如纖維二糖醌氧化還原酶、纖維二糖脫氫酶、乙二醛氧化酶、葡萄糖氧化酶(葡萄糖1-氧化酶和葡萄糖2-氧化酶、藜蘆醇氧化酶和一些酯酶也參與了木材的自然腐爛這一復雜的過程。1.2 關于木質(zhì)素酶/介體系統(tǒng)20世紀80年代相繼發(fā)現(xiàn)木質(zhì)素過氧化物酶和錳依賴過氧化物酶,使木質(zhì)素降

6、解酶類研究引起廣泛興趣,研究發(fā)現(xiàn)包括漆酶在內(nèi)的木質(zhì)素降解酶因尺寸太大而似乎不能透過細胞壁,酶只有在廣泛的脫木質(zhì)素之后才能進入到木材纖維的S2層1。對于木材中孔徑大小的測量是對這些觀察的很好的支持2。這似乎表明木質(zhì)素生物降解過程中,酶與木質(zhì)素之間需要電子傳遞介體物質(zhì)參與作用。很長一段時間以來,很多人認為單一的木質(zhì)素酶就可以對木質(zhì)素進行降解作用。但是,使用單一的M nP 3、漆酶和LiP 4或LiP 5進行紙漿漂白卻觀察不到廣泛的卡伯值的降低和漿白度的提高。說明一些活性成分的丟失和單一的酶不能模仿完整的木質(zhì)素生物降解系統(tǒng)。使用特別的設備將培養(yǎng)液用膜過濾以除去菌絲,發(fā)現(xiàn)濾液能使硫酸鹽漿脫木質(zhì)素6。表

7、明對于漂白來說,真菌與纖維的接觸不是必須的,而是真菌在生長過程中產(chǎn)生一些氧化酶和一些低分子質(zhì)量的化合物共同導致了一個緩慢的、連續(xù)的木質(zhì)素降解過程。通過大小排阻色譜和木質(zhì)素降解酶免疫標記實驗發(fā)現(xiàn),活性成分可能是小分子物質(zhì)而不是酶78。次級代謝產(chǎn)物藜蘆醇(VA在木質(zhì)素降解培養(yǎng)中的發(fā)現(xiàn),使人們進一步假設一個小的可以擴散的氧化劑(即陽離子自由基在木質(zhì)素的氧化過程中是一個很重要的因子。1995年,一個由藜蘆醇間接介導的LiP 對酚的氧化機制被提出9。但是許多木質(zhì)素降解菌不分泌LiP 而只分泌M nP 10,這說明還存在其它的機制。比較LiP 、辣根過氧化物酶(HRP和漆酶對各種甲氧基苯的氧化發(fā)現(xiàn),它們對

8、非酚型物質(zhì)的氧化都是由陽離子介導的,并且以一種相似的方式產(chǎn)生醌類物質(zhì)和甲基醇而對非酚型物質(zhì)進行氧化11。能夠支持介體假說的一個很好例子是M nP,它將Mn 2+氧化成M n 3+,M n 3+再作為可擴散的氧化劑對有機底物進行單電子氧化。值得注意的是,LiP 在有丙二酸和草酸存在的情況下也能使Mn2+氧化生成Mn 3+。在有適當?shù)姆有偷孜锎嬖跁r,各種漆酶也能使Mn 2+氧化生成M n 3+12。用T rametes versicolor 突變株進行實驗發(fā)現(xiàn)13,不產(chǎn)生或只產(chǎn)生低活力的漆酶和MnP 的突變株不能使?jié){漂白或脫木質(zhì)素;通過控制產(chǎn)酶條件,改變漆酶與MnP 比活進行的實驗發(fā)現(xiàn),提高漆酶活

9、性同時降低M nP 活性,只有脫木質(zhì)素被提高而甲醇產(chǎn)量和白度沒有改變;降低漆酶的活性而提高MnP 的活性則導致木質(zhì)素脫除率降低,白度提高較低;隨著漆酶活性提高而M nP 活性不變,可以提高木質(zhì)素脫除而對白度和甲醇產(chǎn)量沒有影響;與親本相比,一株只分泌60%活性的漆酶和70%活性的MnP 的菌株木質(zhì)素脫除效果最好,甲醇產(chǎn)量和白度沒有改變;添加純化的M nP 只能部分的恢復漂白作用。說明漂白脫木質(zhì)素不僅僅取決于M nP 和漆酶。這為介體假說提供了證據(jù)。一些螯合劑、羥自由基和藜蘆醇已被假設為自然發(fā)生的介體,但是關鍵的化學物質(zhì)似乎還沒有發(fā)現(xiàn)和定性。雖然對起關鍵作用的化合物的化學本質(zhì)、種類和數(shù)量的了解還不

10、確切,但很明顯的是木質(zhì)素的自然降解過程依賴于酶和介體存在。確定這些物質(zhì)可以指導進行人工模擬木質(zhì)素的自然降解過程,從而有望有效解決目前的制漿造紙工業(yè)與環(huán)境的沖突等問題。通過優(yōu)化篩選介體化合物,漆酶介體系統(tǒng)在脫木質(zhì)素方面已達到可與無元素氯漂白漿相似的效果。近幾年來利用漆酶介體體系在有氧存在的情況下,已經(jīng)取得了較好的木質(zhì)素脫除效果。2 漆酶/介體系統(tǒng)及其運用漆酶首次被發(fā)現(xiàn)是在1883年14。真菌漆酶是在19世紀90年代年被發(fā)現(xiàn)的。漆酶廣泛地分布于84 林 產(chǎn) 化 學 與 工 業(yè)第23卷高等植物和真菌,如:Agar icus ,Podospora,Rhiz octonia,Pholiota,Pleur

11、otus,Neurospora,A sp ergillus,Fusar ium ,Schinus r igidop or us ,Botry tis ,Schizop hyllum ,Cer rena,Phlebia(syn.Mer ulius,Pyr iculari-a ,Py cnop or us ,Junghuhnia,L entinus ,Ar millar ia,Monocillium ,Fomes,R ussula,L ep topor us 等。具有酚氧化酶活性的漆酶類型在細菌中很少發(fā)現(xiàn),目前為止只在Str ep tomyces galbus 15和Az osp irillum

12、lip o f erum 16中有發(fā)現(xiàn)。漆酶能氧化 -和p -聯(lián)苯酚、氨基苯酚、多酚、多胺、木質(zhì)素化合物、抗壞血酸、一些無機離子和芳香胺。在真菌脫木質(zhì)素中,漆酶具有催化脫羧、脫甲基和脫甲氧基作用。漆酶被許多能夠與銅接合位點相互作用的陰離子如疊氮化物、氰化物、氰硫基和氟化物所抑制。因為這些試劑能置換漆酶活性位點上的銅,從而可逆地抑制了酶的活性。關于漆酶的性質(zhì)、基因及其克隆人們已經(jīng)作了大量的研究并取得了很多的成果,對于漆酶介體的分離、參與木質(zhì)素自然降解過程的化合物的研究則越來越受到關注。已有研究結果認為,有效的介體是一些帶有N -OH 基團的N -雜環(huán)物,如1-羥基苯并三唑等。N -OH 基團是介

13、體的關鍵組成部分。某些過渡金屬絡合物能作為漆酶的介體,介導漆酶對紙漿進行脫木質(zhì)素和漂白17。2.1 漆酶/介體系統(tǒng)的動力學研究研究漆酶/介體系統(tǒng)的動力學,有助于我們對漆酶/介體系統(tǒng)作用機理的研究。以2,2 -聯(lián)氮-二(3-乙基并噻唑-6-磺酸(ABTS作為介體,研究漆酶催化的氧氣對藜蘆醇的氧化發(fā)現(xiàn)此反應為假一級反應。反應的速率常數(shù)取決于介體與底物的比值,當介體與底物的摩爾比為0.15時達到最大值。介體在此反應中參與了競爭反應。當介體與底物的摩爾比值低于0.15時,介體主要作為漆酶的激活劑。隨著ABTS 濃度的增加,它會與原始底物競爭漆酶的活性中心,抑制漆酶對藜蘆醇的氧化,從而增加了氧化介體對藜

14、蘆醇的氧化作用18。以ABTS 作為介體,研究漆酶催化藜蘆醇氧化反應的耗氧量發(fā)現(xiàn),需氧量動力曲線由兩個階段組成。在起始階段,藜蘆醇主要被氧化成相應的陽離子。此時耗氧量曲線呈現(xiàn)出假零級反應速率規(guī)律。耗氧量與ABTS 的濃度有關,每摩爾ABTS 消耗0.25mol 的氧氣。在后一階段,藜蘆醇主要被氧化成藜蘆醛。耗氧量曲線呈現(xiàn)出假一級反應速率規(guī)律。耗氧量與藜蘆醛產(chǎn)量之間成線性關系。每形成一摩爾藜蘆醛消耗氧氣0.42mol 19。比較了ABTS 和1-羥基苯并三唑(HBT在氧化2,4-二甲氧基芐醇(DM BA為2,4-二甲氧基苯甲醛(DMA過程中的情況發(fā)現(xiàn),以ABT S 作為介體時,介體系統(tǒng)的反應明顯

15、地分為兩個階段。根據(jù)反應動力學曲線,氧化劑是ABTS 雙陽離子(ABTS dication而不是酶。氧化態(tài)的ABT S 在氧化底物時反過來又會被還原為ABTS 。而以HBT 作為介體的漆酶/介體系統(tǒng)在此反應中不能明顯地分為兩個階段,其耗氧量動力曲線在整個過程中都表現(xiàn)出零級反應規(guī)律。HBT 被氧化為氧化態(tài)H BT,再作為氧化劑氧化底物。因此氧化態(tài)HBT 的形成是反應速率的決定步驟。DMA 的產(chǎn)生也遵循零級反應規(guī)律。增加HBT 的濃度,形成每摩爾苯甲醛所需的氧量降低。表明當HBT/底物比值高時,會出現(xiàn)另一種反應途徑。當H BT/底物比值低時,氧化態(tài)H BT 是作為單電子氧化劑而且能夠被可逆還原為H

16、BT 。但是HBT/底物比值高時,氧化態(tài)HBT 是作為三電子氧化劑而且最后被不可逆地還原為苯并三唑(BT20。研究漆酶/N -羥基,N -乙?；桨?NHAA系統(tǒng)使卡伯值降低的耗氧量動力學研究表明,在起始階段(0.51h,NHAA 介導的木質(zhì)素脫除以很高的速率進行。然而在這之后,由于介體的低穩(wěn)定性導致木質(zhì)素脫除速率的降低。當以HBT 作為介體時(與以NHAA 作為介體時相比,發(fā)現(xiàn)反應2h 以后,木質(zhì)素的脫除程度更高了。與NHAA 相比,氧化介體的產(chǎn)生是決定HBT 介導的漆酶對漿的漂白速率的限制性步驟21。在pH 值為4.5的乙酸鹽緩沖溶液中,在反應溫度45 和一個大氣壓的情況下,研究漆酶/介體

17、系統(tǒng)對松木硫酸鹽AQ 漿脫木質(zhì)素的動力學發(fā)現(xiàn),在漿濃度為10%,介體劑量為每克漿0.1mmol H BT,酶劑量為每克漿10U 時,卡伯值的降低動力學曲線遵循假二級反應規(guī)律。在開始的8h 之內(nèi),氧消耗的動力學曲線遵循假一級反應規(guī)律,在后來的824h 之內(nèi)為假零級反應22。2.2 漆酶/介體系統(tǒng)漂白脫木質(zhì)素作用研究關于漆酶/介體系統(tǒng)能對硫酸鹽漿進行漂白的首次報道是在1992年。起初使用ABTS 作為介體,第1期閆文超,等:木質(zhì)素生物降解過程中木質(zhì)素-介體反應系統(tǒng)的研究進展85此后,人們在尋找經(jīng)濟可行的漆酶/介體組合方面進行了大量的研究工作,并且發(fā)現(xiàn)了幾種至少與ABTS 一樣有效的氮族化合物。漆酶

18、/介體系統(tǒng)漂白研究中常用的介體有以下幾種:ABT S 、HBT 或HOBT 、NHA(N -羥基乙酰苯胺、NHB(N -羥基丁酰苯胺、NNPH(N -亞硝基-N -羥基苯胺、VA 等。漆酶/介體系統(tǒng)的生物漂白被認為是通過氧、漆酶、介體和木質(zhì)素之間的氧化循環(huán)來完成的。溶液中的氧首先氧化酶,氧化的酶再氧化介體,氧化的介體擴散到漿中氧化木質(zhì)素。在這個反應中,理論上除了水和木質(zhì)素降解產(chǎn)物之外沒有其它的產(chǎn)物。介體在脫木質(zhì)素中的作用是產(chǎn)生自由基。ABTS 介導的漆酶對具有芐基氫不同結構的木質(zhì)素非酚型和酚型模型化合物的作用后,發(fā)現(xiàn)具有芐基氫結構的木質(zhì)素非酚型模型化合物能發(fā)生有限的 位脫氫氧化,氧化的結果主要

19、生成芳香醛。但具有C 和C 雙鍵的化合物卻不能發(fā)生 位脫氫氧化。ABT S 形成陽離子基對酚型化合物進行氧化作用,而氧化非酚型木質(zhì)素模型化合物的則是雙陽離子。用HBT 作為介體,漆酶/H BT 系統(tǒng)處理過的漿與對照相比,脫木質(zhì)素作用較為顯著。沒有介體存在時,漆酶不能使?jié){進行脫木質(zhì)素作用,也不能對纖維中的木質(zhì)素進行聚合或解聚作用,而只能對其發(fā)生輕微的化學改變23。加入木聚糖酶能促進H BT 介導的漆酶/介體系統(tǒng)的脫木質(zhì)素作用24。漆酶/NHA 對葦漿殘余木質(zhì)素的作用后,殘余木質(zhì)素在反應后甲氧基、酚羥基減少,醇羥基和羰基增多,木質(zhì)素結構的苯環(huán)結構也發(fā)生了開環(huán)反應25。以HBT 作為介體,研究漆酶作

20、用后的殘余木質(zhì)素結構發(fā)現(xiàn),羧基增加而自由酚基減少。說明氧化作用是硫酸鹽漿殘余木質(zhì)素脫除的主要機制。同時還發(fā)現(xiàn)殘余木質(zhì)素的脫甲基化作用。在漆酶漂白過程中,HBT 被迅速地轉化為HT 。然而漆酶與HBT 反應還會使HBT 轉化為BT 。BT 與漆酶結合沒有脫木質(zhì)素作用。因此,BT 的產(chǎn)生大大限制了脫木質(zhì)素作用26。研究還發(fā)現(xiàn),鍵裂解能和介體的極性特點對漆酶介體漂白系統(tǒng)的反應速率有影響26。用N -亞肼三唑(N -hydrox ybenzotriazole作為介體對漆酶作用后的木質(zhì)素進行分析發(fā)現(xiàn),此系統(tǒng)氧化木質(zhì)素結構中的酚型成分,使木質(zhì)素發(fā)生脫甲基化作用并使羧基顯著增加。但是,N -亞肼三唑在生物漂

21、白條件下是不穩(wěn)定的,與漆酶單獨作用或是在有漿存在的情況下都會轉變成苯并三唑,在有漿存在的情況下這種轉變發(fā)生的更快。而且苯并三唑?qū)ζ崦复呋拿撃举|(zhì)素作用沒有活性。因此對于脫木質(zhì)素來說N -亞肼三唑向苯并三唑的轉變是有害的27。分別使用HBT 、NHA 和VA 作為介體,研究漆酶對高卡伯值硫酸鹽漿的作用發(fā)現(xiàn),在脫木質(zhì)素方面漆酶/VA 系統(tǒng)的作用超過了漆酶/H BT 系統(tǒng)和漆酶/NHA 系統(tǒng)。三個系統(tǒng)均使?jié){的白度降低。推測白度的降低可能與醌型結構的出現(xiàn)有關。漆酶/VA 系統(tǒng)與氧脫木質(zhì)素相比,值得注意的是前者對漿粘度的損壞小于后者28。比較了漆酶/HBT 和漆酶/NHAA 對漿的作用效果后發(fā)現(xiàn),在特定

22、的條件下漆酶/HBT 的脫木質(zhì)素能力大于漆酶/NHAA 。同樣,二者在脫木質(zhì)素的同時,也使?jié){的白度降低29。在漿濃度為10%、反應溫度40 和常壓下反應8h,介體NHAA 和漆酶的最適用量分別為0.1mmol 和10IU 。升高溫度能提高反應速率,但是卻降低漆酶的穩(wěn)定性。氧壓的增加能增強試劑的穿透能力,從而提高木質(zhì)素的降解效率24。付時雨等研究發(fā)現(xiàn),漆酶用量為2.5U /g 漿,NHA 用量為1%,pH 值為5.0,酶處理時間2h,反應溫度50 ,氧氣壓力0.3M Pa 時,可以獲得較好的脫木質(zhì)素效果30。漆酶介體系統(tǒng)除了具有降解作用外,對酚型化合物還有聚合行為。漆酶/介體系統(tǒng)在起始階段對酚型

23、化合物進行聚合作用,然后再對先前產(chǎn)生的聚合物進行降解。從以上的研究可以看出,漆酶介體系統(tǒng)能有效的對漿進行脫木質(zhì)素作用。但是,對漿的白度有損害。堿抽提可以使酶處理漿白度恢復。木質(zhì)素被氧化所得降解產(chǎn)物與漆酶/介體之間發(fā)生副反應強烈地抑制漆酶/介體系統(tǒng)對木質(zhì)素的脫除,用堿抽提降解掉降解所得的木質(zhì)素片斷能有效地恢復漆酶/介體系統(tǒng)對漿木質(zhì)素的脫除。用木聚糖酶對漿進行預處理能顯著地提高漆酶/介體系統(tǒng)的脫木質(zhì)素效率31。經(jīng)漆酶/介體處理后,木質(zhì)素結構對堿抽提更敏感。2.3 漆酶/介體系統(tǒng)與環(huán)保漆酶/介體系統(tǒng)能對酚型污染物進行脫毒和脫色。近幾年,這方面的專利已經(jīng)被報道。一些專利技術已被采用或被改進。在3種主要

24、的木質(zhì)素降解酶中,唯一可以大量獲得的是漆酶。因此,漆酶/介體86 林 產(chǎn) 化 學 與 工 業(yè)第23卷系統(tǒng)在處理多環(huán)芳烴(PAH方面具有很大的潛力。漆酶能對工業(yè)染料進行脫色。在有介體HBT 存在的情況下,漆酶的脫色能力有所提高。H BT 介體來自于白腐菌(Pycnop or us cinnabarinus 的漆酶脫色作用的最適pH 值和最適溫度分別為4.5和65 32。漆酶能在體外氧化PAH ,如:蒽、苊、苯并芘、二氫苊、芘等。加入介體H BT 能顯著的提高漆酶對苊、二氫苊、蒽、苯并芘的氧化。但對其它種類的PAH 沒有多大的影響,并且在漆酶/介體系統(tǒng)中部份PAH 被聚合33。在有不飽和脂類和HB

25、T 存在的情況下,菲會被漆酶共氧化。在反應過程中,脂肪酸氫過氧化作用的發(fā)現(xiàn)表明反應涉及脂類的過氧化作用。漆酶對脂類的過氧化要求有HBT 而不依賴于Mn 2+或H 2O 234。T .versicolor 產(chǎn)的漆酶在以HBT 為介體時,能氧化二氫苊酮和苊,培養(yǎng)一定時間后,這兩種化合物被完全代謝,主要的代謝產(chǎn)物為1,2-二氫苊二酮和1,8-苯二甲酸酐35。漆酶對染料的分解機理依染料的結構而有所不同,有些染料能直接作為漆酶的底物因此能直接被漆酶氧化,如蒽醌類染料,然而其它一些染料由于不是漆酶的底物而需要小分子代謝產(chǎn)物或介體的存在才能被氧化,如偶氮類和靛藍類染料。蒽醌類染料能夠介導偶氮類和靛藍類染料的

26、降解,即可以作為漆酶底物的染料能夠促進非漆酶底物的染料的降解36。3 結束目前的制漿造紙工業(yè)與環(huán)境存在著沖突,化學品大量的使用與木質(zhì)素等形成毒性物質(zhì)排放到環(huán)境中造成環(huán)境污染。用生物的方法及其與化學物理的方法相結合進行制漿、漂白和預處理,不僅能提高漿的品質(zhì)而且能減輕環(huán)境的壓力。目前對于參與木質(zhì)素自然降解過程的介體的研究還不具有工業(yè)應用可行性,隨著研究的深入,木質(zhì)素降解酶/介體系統(tǒng)的作用機理將會被闡明,同時將為大規(guī)模的工業(yè)化應用打下堅實的基礎。參考文獻:1M ESSNER K ,SREBOT N IK E.Biopulping :an overview of developments in an

27、envir onmentally safe paper -making technolo -gyJ.FEM S M icrobiol Rev,1994,13:351-364.2FL OU RN OY D S,K IRK T K ,HIGHL EY T L.Wood decay by brow n -rot fungi:chang es in pore structure and cell w all vo-l umeJ.Holzforschung,1991,45:383-388.3PA ICE M G,REID I D,BOU RBO NN AIS R,et al.M anganese per

28、ox idase pro duced by T r ametes versicolor during pulpbleaching,demethylates and delig nifies kraft pulpJ.Appl Env iron M icrobiol,1993,59:260-265.4KA NT EL INEN A ,HORT L IN G B,RAN UA M ,et al.Effects of fung al and enzymatic tr eatments on isolated lignins and onpulp bleachability J.Holzfo rschu

29、ng,1993,47:29-35.5ARBEL OA M ,de L eseleuc J,Go ma G ,et al.An ev aluation o f t he potential of lignin peroxidases to improv e pulpsJ.T appiJ,1992,7:215-221.6KO NDO R ,KU RA SHIK I K ,SAKA I K.In vitro bleaching o f hardwood kraft pulp by ex tracellular enzymes ex cr eted fromwhite rot fungi in a c

30、ultiv atio n system using membrane filterJ.Appl Env iron M icrobiol,1994,60:921-926.7SR EBO T N IK E,M ESSN ER K.Accessibility of sulfite pulp to lig nin per oxidase and mar ker proteins with respect to enzy -matic bleachingJ.J Biotechnol,1990,13:199-210.8GOO DEL L B,JELL ISON J.Immunological charac

31、eterizat ion of fung al enzymes and biolog ical chelators involved in ligno ce-llulose deg radationJ.Biodeterioration Res,1990,(3:361-375.9CHU N G N,AU ST S D.Veratryl alcoho-l mediated indirect ox idation of phenol by lignin per oxidaseJ.Arch Biochem Bio -phys,1995,316:733-737.10ORT H A B,ROYSE D J

32、,T I EN M.U biquity of lignin -deg rading perox idases among various w ood -degr ading fung iJ.A pplEnviron M icrobiol,1993,59:4017-4023.11K ERST EN P J,KAL YAN ARAM AN B,HM MM EL K E,et al.Comparison o f lig nin perox idase,horseradish peroxidaseand laccase in the ox idation of methox ybenzenesJ.Bi

33、ochem J,1990,268:474-480.12AR CHIBA LD F,ROY B.Production of manganic chelates by laccase fro m the lignin -deg rading fung us T r ametes (cor iolus 第1期閆文超,等:木質(zhì)素生物降解過程中木質(zhì)素-介體反應系統(tǒng)的研究進展8788 林 產(chǎn) 化 學 與 工 業(yè) 第 23 卷 ver sicolor J . Envir on M icrobiol, 1992, 58: 1 496 1 499. 13 A DDL EMA N K , DU M ON CEAU

34、 X T , PAI CE M G, et al. Pro duction and characterization of T rametes versicolor mutants unable to bleach har dwood kraft pulp J . Appl Environ M icrobiol, 1995, 61: 3 687 3 694. 14 Y OSHI DA H. Chemistry of lacquer( urishi par t l J . J Chem So c( T oky o , 1883, 43: 472 486. 15 K U ZNET SOV V D,

35、 FIL IP POVA S N , RY BAKO VA A M . T he nature of the bro wn pigment and the composition of phe nol ox idases in Strep tomy ces galbus J . M ikrobiolog ia, 1984, 53: 251 256. 16 GI VAU DAN A, EFFOSSE A, FAU RE D, et al. Po lyphenol ox idase from A z osp irillum lip of er um isolated from the rhi zo

36、shere: evidence for a laccase in non motile strains of A z osp ir illum lip of er um J . FEM S M icrobiol Lett, 1993, 108: 205 210. 17 BOU RBO NN AIS R, RO CHEF ORT D, PA ICE M G , et al. T ransition metal complex es: A new class of laccase mediators for pulp bleaching J . T appi J, 2000, 83( 10 : 6

37、8. 18 BA LAK SHI N M Y, CHEN C L , G RA T ZL J S, et al. K inetic studies on ox idation of v er atr yl alcohol by laccase -mediator system. P art 1. Effects of mediator concentration J . Holzforschung , 2000, 54( 2 : 165 170. 19 BA LAK SHI N M Y, CHEN C L , G RA T ZL J S, et al. K inetic studies on

38、ox idation of v er atr yl alcohol by laccase -mediator system. P art 2. T he kinetics of diox yg en uptake J . Holzfo rschung , 2000, 54( 2 : 171 175. 20 P OT T HA ST A , R OSENA U T , F ISCHER K. Ox idation of benzyl alcohols by the laccase mediator system( L M S compr ehensive kinetic descr iption

39、 J . Holzforschung , 2001, 55( 1 : 47 56. 21 BA LAK SHI N M , CHEN C L, GRAT ZL J S, et al. Biobleaching of pulp w ith diox yg en in laccase mediator system fect of variables on the reaction kinetics J . Journal of M olecular Catalysis B Enzymat ic, 2001, 16( 3 4 : 205 215. 22 BALA KSHI N M . et al.

40、 Biobleaching of pulp with diox ygen in the laccase mediator system. P ar t 1. K inetics of delig nification J . Holzforschung, 2000, 54( 4 : 390 396. 23 P OPPI U S L EV L IN K, WAN G W, TA M M IN EN T , et al. Effects of laccase/ HBT treatment on pulp and lignin structures C . Proceedings of the A

41、CM W orkshop on Role Based A ccess Co ntrol, 1997, 1: F 3 1/ F3 5. 24 N ELSON P J, CHIN C W J, V IIK RI L , et al. U se of a laccase mediato r stage in bleaching eucaly pt kraft pulps J . Appita Jour nal, 1998, 51( 6 : 451 455. 25 付時雨 . 漆酶 助劑體系降解葦漿殘余木質(zhì)素的研究 J . 纖維素科學與技術 , 2001, 19( 2 : 8 -16. 26 SEA

42、LEY J, RA GAU SK AS A J. Residual lig nin studies of laccase delignified kraft pulps J . Enzyme and M icrobial T echno logy, 1998, 23( 7 8 : 422 426. 27 SEA LEY J, RA GAU SK AS A J. Investigation of laccase/ N hy drox ybenzotriazole delignificatio n of kr aft pulp J . Journal of Wood Chemistr y and

43、T echnolog y, 1998, 18( 4 : 403 416. 28 CHA KAR F S. Fundamental delignification chemistr y of laccase mediator systems on hig h lignin content kraft pulps D . DA I B, 2002, 62( 7 : 3 195. 29 CHAK AR F S, RAGA U SKA S A J. Effects of ox idat ive alkaline extr action stag es after laccase/ HBT and laccase/ NHAA treatments an N MR study of residual lignins J . Journal of W ood Chemistr y and T echnolog y,