鼠傷寒沙門氏菌法（Ames試驗(yàn))——細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)

1、鼠傷寒沙門氏菌法（ames試驗(yàn))細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn) 1目的 鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)是以微生物為指示生物的遺傳毒理學(xué)體外實(shí)驗(yàn)，遺傳學(xué)終點(diǎn)是基因突變，用于檢測(cè)受試物能否引起鼠傷寒沙門氏菌基因組堿基置換或移碼突變。本辦法規(guī)定了地表水和廢水的樣品采集、預(yù)處理的辦法和鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)要求。 2原理 鼠傷寒沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)菌株為組氨酸缺陷型突變型，在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，在有組氨酸的培養(yǎng)基上可以正常生長(zhǎng)。誘變劑（mutagen)，又稱為致突變劑或致突變物，可使沙門氏菌組氨酸缺陷突變型回復(fù)突變?yōu)橐吧?，在無(wú)組氨酸培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)。故可按照在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上生成的菌落數(shù)量，推斷

2、受試物是否為誘變劑。對(duì)于間接誘變劑，可用經(jīng)多氯聯(lián)苯（pcb）誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿制備的s-9混合液作為代謝活化系統(tǒng)。 3樣品的采集 （1)儀器設(shè)備條件 采樣瓶為棕色、大口玻璃瓶，瓶蓋具聚四氟乙烯襯墊，或在樣品無(wú)腐蝕性條件下用法具鋁箔外襯的橡皮塞。 (2）樣品采集 用采樣瓶手工采集適量樣品，地表水和廢水樣品要徹低彌漫容器，密封，并于2h內(nèi)送至試驗(yàn)室，盡快舉行處理。 4地表水和廢水的樣品預(yù)處理 （1)儀器設(shè)備條件 分液漏斗。 貯水器，具下口的玻璃容器。 樹(shù)脂柱玻璃管，高不低于10cm，柱管直徑與柱長(zhǎng)比為1：4-1：10之間。 輸液泵。 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或kd濃縮器。 高純氮?dú)狻?(2）試劑 ：符合gb668

3、2-1192試驗(yàn)室用水規(guī)格?？捎萌ルx子水經(jīng)全玻璃蒸餾器蒸餾制得。 10mol/l溶液。 (1：1)溶液。 lmol/l溶液。 lmol/l溶液。 、，不低于分析純級(jí)，應(yīng)在玻璃容器中重蒸餾后方能用法。 (dmso)。 xad-2或等效的大孔樹(shù)脂：樹(shù)脂應(yīng)經(jīng)純水及甲醇漂洗后，在索氏提取器中分離用甲醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮提取8h，去除有機(jī)物。凈化后的樹(shù)脂浸于甲醇中，置4冰箱備用。 (3）樣品制備 1)有機(jī)物的分別提?。?有機(jī)物分別提取前的樣品預(yù)處理，將采樣瓶于4靜置24h，使非水液相、水相、沉積固相分別。水相按下述原則處理：地表水中懸浮物的量低于5時(shí)可挺直舉行有機(jī)物的大孔樹(shù)脂提??；懸浮物的量高于5

4、地表水及廢水舉行有機(jī)物的液一液提取。 有機(jī)物的液一液提?。喝《?500m1的水樣分放到二個(gè)2000ml分液漏斗中。用10mol/l氫氧化鈉將ph值調(diào)至11。向每個(gè)分液漏斗中加入150m1二氯甲烷，振蕩2min，注重放氣。靜置起碼10min，使有機(jī)相與水相分層，分出有機(jī)相。再各用100m1二氯甲烷提取二次。將三次提取液合并在l000ml燒瓶中。如有機(jī)相與水相間的乳化層多于溶劑層的1/3，可離心以達(dá)到兩相的分層。用（1：1）硫酸溶液將水相的ph值調(diào)至2以下。用二氯甲烷150ml、100m1、l00ml分三次舉行溶劑提取。將這三次提取的有機(jī)相也并入1000m1燒瓶中。 有機(jī)物的大孔樹(shù)脂分別提取：將

5、凈化后的樹(shù)脂連同丙酮一起裝入樹(shù)脂柱，樹(shù)脂上、下端分離墊、蓋玻璃棉。排去柱中丙酮，用純水洗柱三次（注重每次不能把試劑排空）。使水樣流經(jīng)樹(shù)脂柱，流速為1-2倍柱體積min，水樣量不超2000倍柱體積，用真空泵抽去柱中水，然后用4-8倍柱體積85：15的正己烷、丙酮和8個(gè)柱體積二氯甲烷分離三次浸柱以洗脫有機(jī)物。浸泡時(shí)光為每次10min。然后徐徐滴流，將洗脫液收集至燒瓶中。 提取液濃縮：用法旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或kd濃縮器，將獵取的提取液或洗脫液濃縮。濃縮液50供分量分析或化學(xué)分析，余50繼續(xù)濃縮至lml。 溶劑置換：于40水浴，用氮?dú)饬鲗饪s的提取液吹干。加入適量dmso溶解提取物，并稀釋備用。 樣品量計(jì)算結(jié)

6、果的表示：樣品預(yù)處理所得水相體積或經(jīng)樹(shù)脂柱水樣的體積以l表示。有機(jī)提取物的分量以mg表示。結(jié)果應(yīng)換算至原水的水樣量。 5.鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn) （1)儀器設(shè)備 潔凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫水浴，蒸汽壓力鍋，勻漿器等試驗(yàn)室常用設(shè)備。低溫高速離心機(jī)，低溫冰箱（-80）或液氮罐。 (2）培養(yǎng)基制備 除解釋外，培養(yǎng)基成分或試劑應(yīng)是化學(xué)純或分析純。避開(kāi)重復(fù)高溫處理，注重保存溫度和期限。 1)養(yǎng)分肉湯培養(yǎng)基：用作增菌培養(yǎng)。 牛肉膏2.5g 胰胨（或混合蛋白胨）5.0g 氯化鈉2.5g 磷酸氫二鉀（k2hpo4·3h2o)1.3g 蒸餾水至500ml 加熱溶解，調(diào)ph值至7.4，分裝后0.1

7、03mpa滅菌20min,4保存，保存期不超過(guò)6個(gè)月。 2)養(yǎng)分肉湯瓊脂培養(yǎng)基：用作基因型（rfa突變，r因子，paq1質(zhì)粒，auvrb）鑒定。 瓊脂粉1.5g 養(yǎng)分肉湯培養(yǎng)基l00ml 加熱溶化后調(diào)ph值為7.4,0.103mpa滅菌20min。 3）底層培養(yǎng)基，用于致突變實(shí)驗(yàn)。 v-b鹽貯備液，50× 磷酸氫鈉銨(nanh4hpo4)17.5g 檸檬酸（c6h8o7·h2o)l0.0g 磷酸氫二鉀（k2bpo4)50.0g 硫酸鎂（mgso4·7h2o)1.0g 加蒸餾水至100ml,0.103mpa滅菌20min。 待其他試劑徹低溶解后，再將硫酸鎂緩慢放入其

8、中繼續(xù)溶解，否則易析出沉淀。 40葡萄糖溶液： 葡萄糖40.0g 加蒸餾水至100ml,0.055mpa滅菌20min。 1.5瓊脂培養(yǎng)基： 瓊脂粉15g 蒸餾水930m1 溶化后0.103mpa滅菌20min。趁熱（80），以無(wú)菌操作加入： v-b鹽貯備液，50×20m1 40%葡萄糖溶液50m1 充分混勻，待涼至50左右時(shí)倒入培養(yǎng)皿，每皿（90mm)25m1,37培養(yǎng)過(guò)夜，以除去水分及檢查有無(wú)污染。 4）頂層培養(yǎng)基。 頂層瓊脂： 瓊脂粉0.6g 氯化鈉0.5g 加蒸餾水至100m100.103mpa滅菌20min。 0.5mmol/l組氨酸一生物素溶液： d-生物素（分子量244

9、)30.5mg l-鹽酸組氨酸（mw191.17)23.9mg 加蒸餾水至250ml,0.103mpa滅菌20min。 頂層培養(yǎng)基制備：加熱溶化頂層瓊脂，每l00ml頂層瓊脂中加0.5mmol/l組氨酸一生物素溶液10ml。混勻，分裝于滅菌試管，每管2ml，在45水浴中保溫。 5）鑒定菌株基因型用試劑： 0.8%氨節(jié)青霉素溶液（無(wú)菌配制）：稱取氨節(jié)青霉素40mg，用0.02mol/l氫氧化鈉溶液5m1溶解，保存于4冰箱。 0.8四環(huán)素溶液（無(wú)菌配制）：稱取40mg四環(huán)素，用0.02mol/l鹽酸5m1溶解，保存于4冰箱。 0.1結(jié)晶紫溶液：稱取結(jié)晶紫l0mg,溶于loml滅菌蒸餾水。 組氨酸-

10、d-生物素平板： l.5瓊脂培養(yǎng)基914ml v-b鹽貯備液20m1 40%葡萄糖溶液50ml l-鹽酸組氨酸（(0.4043g/100ml)10m1 d-生物素溶液（0.02mol/l)6m1 分離滅菌后，所有合并（(1000ml)，充分混勻，待涼至50左右時(shí)倒平皿。 6)氨節(jié)青霉素平板（保存ta97,ta98,ta100菌株的主平板）；氨芐青霉素一四環(huán)素平板（保存ta102菌株的主平板）。 1.5瓊脂培養(yǎng)基914ml v-b鹽貯備液，50×20ml 40%葡萄糖溶液50ml l-鹽酸組氨酸（(0.4043g/100m1）l0ml d-生物素溶液（(0.02mol/l)6ml 0.

11、8%氨節(jié)青霉素溶液3.15ml 0.8四環(huán)素溶液0.25ml（氨節(jié)青霉素-四環(huán)素平板） 分離滅菌或無(wú)菌制備，注入l000ml瓶中，充分混勻，待涼至50左右時(shí)倒平皿。 (3)代謝活化系統(tǒng)的制備 1)大鼠肝s-9的誘導(dǎo)和制備：選健康雄性成年sd或wistar大鼠，體重150g左右，周齡約5-6周。將多氯聯(lián)苯（aroclor1254或國(guó)產(chǎn)五氯聯(lián)苯）溶于玉米油中，濃度為200mg/ml，按500mg/kg體重一次腹腔注射，5d后斷頭處死動(dòng)物，取出肝臟稱重后，用在4預(yù)冷的0.15mol/l氯化鉀溶液沖洗肝臟數(shù)次。每克肝（濕重）加預(yù)冷的0.15mol/l氯化鉀溶液3m1，用消毒后的醫(yī)用剪刀剪碎肝臟，用勻漿

12、器（低于4000r/min,1-2min)在冰浴中制成肝勻漿。以上操作需注重?zé)o菌和局部4冷環(huán)境。 將肝勻漿在低溫0-4高速離心機(jī)，12000r/min離心10min。吸出上清液為s-9組分，分裝。保存于液氮或-80低溫。s9應(yīng)經(jīng)無(wú)菌檢查，蛋白含量測(cè)定（lowry法）及間接誘變劑鑒定其生物活性合格。 2)s-9混合液的配制： 0.4mol/l氯化鎂-1.65mol/l氯化鉀：稱取mgc12·6h2o8.1g,kcl12.3g加蒸餾水稀釋至100m1。0.103mpa20min滅菌或過(guò)濾除菌。 0.2mo1/l磷酸鹽緩沖液（ph7.4)，每500m1由以下成分組成： 磷酸氫二鈉（na2h

13、po414.2g/500ml)440ml 磷酸二氫鈉（nah2po4·h2o13.8g/500ml)60m1 調(diào)ph值至7.4,0.103mpa20min滅菌或過(guò)濾除菌。 10%s9混合液的配制：每10ml由以下成分組成，臨用時(shí)配制。 滅菌蒸餾水3.8m1 磷酸鹽緩沖液（(0.2mo1/l,ph7.4)5.0m1 1.65mo1/l氯化鉀-0.4mol/l氯化鎂溶液0.2m1 葡萄糖-6-磷酸鈉（mw305.9,0.05mo1/l)40mo1 輔酶11(mw765.4,0.05mol/l)50mo1 肝s9液1.0m1 混勻，置冰浴待用。在4以下，其活性可保存4-5h。當(dāng)日用法，剩余

14、的s-9混合液廢棄。 (4）受試生物 1)實(shí)驗(yàn)菌株：采納四株鼠傷寒沙門氏突變型菌株ta97、ta98、ta100和ta102。ta97、ta98可檢測(cè)移碼型誘變劑；ta100可檢測(cè)堿基置換型誘變劑；ta102檢測(cè)移碼型和堿基置換型誘變劑。 2)增菌培養(yǎng)：取滅菌的25m1三角燒瓶，加入養(yǎng)分肉湯l0ml，從實(shí)驗(yàn)菌株母板上刮取少量細(xì)菌，接種至肉湯中。37振蕩培養(yǎng)10h，存活細(xì)菌密度可達(dá)（(1-2)×109/m1。 (5）菌株鑒定和保存 四種標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)菌株必需舉行基因型鑒定、自發(fā)回變數(shù)鑒定，以及對(duì)鑒別性誘變劑的反應(yīng)的鑒定，合格后才干用于致突變實(shí)驗(yàn)。 1)菌株基因型鑒定： 組氨酸養(yǎng)分缺陷鑒定（組

15、氨酸需求實(shí)驗(yàn)）：加熱溶化底層培養(yǎng)基兩瓶各l00ml。一瓶l00ml加l-鹽酸組氨酸溶液（0.50g/100ml)lml和d-生物素溶液（0.5mmol/l)0.6ml;一瓶l00ml加d-生物素溶液（0.5mmol/l)0.6m1。充分混勻，待涼至50左右時(shí)各倒平皿四塊，即分離為組氨酸一生物素平板和生物素平板。取組氨酸一生物素平板和生物素平板各一塊，將實(shí)驗(yàn)菌株在此兩組培養(yǎng)基上劃線接種，經(jīng)37培養(yǎng)24-48h，觀看生長(zhǎng)狀況。此四種菌株應(yīng)在組氨酸一生物素平板上生長(zhǎng)，而在無(wú)組氨酸的生物素平板上不能生長(zhǎng)。 深粗糙型（rfa）鑒定（結(jié)晶紫抑菌實(shí)驗(yàn)）：深粗糙型突變的細(xì)菌，缺失脂多糖屏障，因此分子量較大的物

16、質(zhì)能進(jìn)入菌體。 鑒定辦法：用移液器吸0.1結(jié)晶紫溶液20l，在肉湯平板表面涂成一條帶，待結(jié)晶紫溶液干后，在與結(jié)晶紫帶方向垂直劃線接種四種實(shí)驗(yàn)菌株。經(jīng)37培養(yǎng)24-48h，觀看生長(zhǎng)狀況。此四種菌株在結(jié)晶紫溶液滲透區(qū)浮現(xiàn)抑菌，證實(shí)實(shí)驗(yàn)菌株有rfa突變。 uvrb缺失的鑒定（紫外線敏感實(shí)驗(yàn)）：uvrb缺失即切除修復(fù)系統(tǒng)缺失。 鑒定辦法：取受試菌液在養(yǎng)分肉湯瓊脂平板上劃線。用黑紙籠罩培養(yǎng)皿的一半，然后在15w的紫外線滅菌燈下，距離33cm照耀8s。37培養(yǎng)24h。對(duì)紫外線敏感的三個(gè)菌株(ta97、ta98、ta100）僅在沒(méi)有照耀過(guò)的一半生長(zhǎng)，而菌株ta102在沒(méi)有照耀過(guò)的一半和照耀過(guò)的一半均能生長(zhǎng)。

17、 r因子和paq1質(zhì)粒的鑒定：四個(gè)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株均帶有r因子，具有抗氨芐青霉素的特性。ta102菌株含paq1質(zhì)粒具有抗四環(huán)素的特性。 用結(jié)晶紫抑菌實(shí)驗(yàn)的辦法，在二個(gè)肉湯平板上分離滴加氨節(jié)青霉素溶液20l（濃度為lmg/ml,溶于0.02mol/lnaoh）和四環(huán)素溶液20l（濃度為0.08mg/ml，溶于0.02mol/lhcl)，并在肉湯平板表面涂成一條帶，待溶液千后，垂直劃線接種四種實(shí)驗(yàn)菌株。經(jīng)37培養(yǎng)24-48h，觀看生長(zhǎng)狀況。四個(gè)菌株生長(zhǎng)應(yīng)不受氨芐青霉素抑制，證實(shí)它們都帶有r因子。ta102菌株生長(zhǎng)應(yīng)不受四環(huán)素抑制，證實(shí)帶有paq1質(zhì)粒。 2)自發(fā)回變數(shù)測(cè)定：取已溶化并在45水浴中保溫

18、的頂層培養(yǎng)基一管（2ml)，加入測(cè)試菌菌液0.1m1，快速混勻，倒在底層培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使頂層培養(yǎng)基勻稱分布在底層上，平放固化。翻轉(zhuǎn)平板于37培養(yǎng)48h，觀看結(jié)果。計(jì)數(shù)回變菌落數(shù)。每株的自發(fā)回變率應(yīng)落在表5-4-1所列正常范圍內(nèi)。 3）對(duì)鑒別性誘變劑的反應(yīng)：實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)不同誘變劑的反應(yīng)不同，應(yīng)當(dāng)在有和沒(méi)有代謝活化的條件下鑒定各實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)誘變劑的反應(yīng)?？砂聪率龅狞c(diǎn)實(shí)驗(yàn)或平皿摻入實(shí)驗(yàn)的辦法舉行。 4）菌株保存： 鑒定合格的菌種應(yīng)加入dmso作為冷凍庇護(hù)劑，保存在-80或液氮（-196),或者冰凍干燥制成干粉，4保存。 主平板保存：作主平板保存時(shí)，將菌落劃線接種于主平板上，孵育24h后保存于4冰箱中

19、。ta97、ta98、ta100菌株保存在氨節(jié)青霉素主平板上，可用法二個(gè)月。ta102菌株的氨節(jié)青霉素一四環(huán)素主平板上，可保存二周。應(yīng)按時(shí)從保存的主平板上移菌，制備新的主平板。 (6）實(shí)驗(yàn)程序 1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)：受試物最低劑量為每平皿0.1g，最高劑量為5mg，或浮現(xiàn)沉淀的劑量，或?qū)?xì)菌產(chǎn)生最小毒性劑量。普通選用4-5個(gè)劑量，舉行劑量一反應(yīng)關(guān)系討論，每個(gè)劑量應(yīng)有三個(gè)平行平板。溶劑可選用水、二甲基亞砜（每皿不超過(guò)0.4ml）或其他溶劑。每次試驗(yàn)應(yīng)有同時(shí)舉行的陽(yáng)性對(duì)比和陰性（溶劑）對(duì)比。 2）辦法和步驟：試驗(yàn)辦法有平板摻入法和點(diǎn)試法。普通先用點(diǎn)試法作預(yù)實(shí)驗(yàn)，以了解受試物對(duì)沙門氏菌的毒性和可能的致突變性

20、，平板摻入法是標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)辦法。 平板摻入法：在底層培養(yǎng)平皿上寫上記號(hào)。取已溶化并在45水浴中保溫的頂層培養(yǎng)基一管（2ml)，依次加入受試物溶液0.1m1，測(cè)試菌菌液0.05-0.2m1（需活化時(shí)加10%s-9混合液0.5m1)，快速混勻，倒在底層培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使頂層培養(yǎng)基勻稱分布在底層上。平放固化后，將平板翻轉(zhuǎn)，置37培養(yǎng)48h觀看結(jié)果。 點(diǎn)試法：在底層培養(yǎng)平皿上寫上記號(hào)。取己溶化并在45水浴中保溫的頂層培養(yǎng)基一管（2ml)，加入測(cè)試菌菌液0.05-0.2ml（需活化時(shí)加10%s-9混合液0.5ml)，快速混勻，倒在底層培養(yǎng)基上，傾斜平皿使頂層培養(yǎng)基勻稱分布在底層上，平放固化。取無(wú)菌濾紙圓片

21、（直徑6mm)，當(dāng)心放在已固化的頂層培養(yǎng)基的適當(dāng)位置上，用移液器取適量受試物（如10l），點(diǎn)在紙片上，或?qū)⑸倭抗腆w受試物結(jié)晶加到紙上或瓊脂表面，將平板翻轉(zhuǎn)，置37培養(yǎng)48h觀看結(jié)果。 6質(zhì)量保證應(yīng)對(duì)水樣預(yù)處理和鼠傷寒沙門氏菌致突變實(shí)驗(yàn)舉行質(zhì)量控制。 設(shè)置陰性對(duì)比，即用純水代替水樣，完成樣品制備全過(guò)程。用所得濃縮物作為陰性溶劑對(duì)比。 設(shè)置陽(yáng)性對(duì)比，用適當(dāng)劑量的陽(yáng)性對(duì)比物經(jīng)受樣品制備全過(guò)程。 致突變實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)鑒定合格，試驗(yàn)應(yīng)設(shè)置平行樣。 7數(shù)據(jù)與報(bào)告 （1)數(shù)據(jù)處理 結(jié)果以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表達(dá)。利用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)辦法處理數(shù)據(jù)。 (2）結(jié)果評(píng)價(jià) 點(diǎn)試法：凡在點(diǎn)樣紙片周圍長(zhǎng)出一圈密集的his+回變菌落者

22、，該受試物即為誘變劑。如只在平板上浮現(xiàn)少數(shù)散在的自發(fā)回變菌落，則為陰性。如在濾紙片周圍見(jiàn)到抑菌圈，解釋受試物具有細(xì)菌毒性。 摻入法計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上的回變菌落數(shù)。如在背景生長(zhǎng)良好條件下，受試物每皿回變菌落數(shù)等于或大于陰性對(duì)比數(shù)的2倍，并有劑量一反應(yīng)關(guān)系；或起碼某一測(cè)試點(diǎn)有重復(fù)的并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的陽(yáng)性反應(yīng)，即可認(rèn)為該受試物對(duì)鼠傷寒沙門氏菌有致突變性。當(dāng)受試物濃度達(dá)到抑菌濃度或5mg/皿仍為陰性者，可認(rèn)為是陰性。 報(bào)告的實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)是兩次以上自立試驗(yàn)的重復(fù)的結(jié)果。假如受試物對(duì)四種菌株（加和不加s-9)的平皿摻入實(shí)驗(yàn)均得到陰性結(jié)果，可認(rèn)為此受試物對(duì)鼠傷寒沙門氏菌無(wú)致突變性。如受試物對(duì)一種或多種菌株（加或不加s-9)的平皿摻入實(shí)驗(yàn)得到陽(yáng)性結(jié)果，即認(rèn)為此受試物是鼠傷寒沙門氏菌的致突變物。 (3）實(shí)驗(yàn)的說(shuō)明和評(píng)價(jià) 細(xì)菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)利用原核細(xì)胞，在某些方面不同于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如攝取、代謝、染色體結(jié)構(gòu)和dna修復(fù)過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)的體外代謝活化系統(tǒng)不行能徹低模擬哺乳動(dòng)物體內(nèi)代謝條件。因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)受試物在哺乳動(dòng)物致突變性和致癌性強(qiáng)度不提供挺直的資料。 雖然在本實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性結(jié)果的化合物無(wú)數(shù)是哺乳動(dòng)物致癌物，但其相關(guān)并