《植物組織培養(yǎng)》復(fù)習(xí)題.doc

1、植物組織培養(yǎng)復(fù)習(xí)題名詞解釋：1、外植體：由活植物體上切取下來(lái)以進(jìn)行培養(yǎng)的那部分組織或器官。2、愈傷組織：指在人工培養(yǎng)基上由外植體長(zhǎng)出來(lái)的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁 細(xì)胞。3、脫分化：已分化的細(xì)胞在一定因素作用下重新恢復(fù)分裂機(jī)能并改變?cè)瓉?lái) 的發(fā)展方向而沿著一條新的途徑發(fā)育的過(guò)程。4、再分化：脫分化的細(xì)胞團(tuán)或組織經(jīng)重新分化而產(chǎn)生出新的具有特定結(jié)構(gòu) 和功能的組織或器官的一種現(xiàn)象。5、胚狀體：指在組織培養(yǎng)過(guò)程中，由植物體細(xì)胞所形成的類(lèi)似于合子胚的 結(jié)構(gòu)。它具有根、莖結(jié)構(gòu)，能夠一次性形成再生植株。6、N6培養(yǎng)基：是1974年朱至清等為水稻等單子葉植物的花藥培養(yǎng)而設(shè) 計(jì)的。其特點(diǎn)是成分較簡(jiǎn)單，KNO3和(NH4)

2、2SO4含量高。7、母液：為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對(duì)兒十種化學(xué)藥品進(jìn)行稱量，將培 養(yǎng)基中的各種成分，按原量10倍、100倍或1000倍稱量，配成濃縮 液，這種濃縮液叫做母液。這樣，每次配制培養(yǎng)基時(shí)，取其總量的 1/10、1/100. 1/1000,加以稀釋，成培養(yǎng)液。8、器官發(fā)生途徑：從器官外植體誘導(dǎo)愈傷組織，經(jīng)愈傷組織細(xì)胞的分化 再生成植株的方式。上，然后將砧木、接穗一起在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。10、 初代培養(yǎng)：是指接種后外植體最初的幾代培養(yǎng)，獲得外植體的無(wú)性 系。11、 繼代培養(yǎng)：是指初代培養(yǎng)獲得的無(wú)根芽苗、愈傷組織、胚狀體、原球 莖等轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，進(jìn)行擴(kuò)大繁殖的過(guò)程。12、 種質(zhì):指親代

3、通過(guò)生殖細(xì)胞或體細(xì)胞傳遞給子代的遺傳物質(zhì)。13、 消毒：是指殺死病原微生物，但并不一定殺死細(xì)胞芽飽的方法。方法。填空題：1、根據(jù)所培養(yǎng)的植物材料的不同，把組織培養(yǎng)分為5種類(lèi)型：愈傷組織培 養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、莖尖分生組織培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。2、初代培養(yǎng)建立的無(wú)性繁殖系包括：莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。3、莖尖培養(yǎng)的一般方法是固體培養(yǎng)法和紙橋培養(yǎng)法。4、不定芽產(chǎn)生的途徑有外植體上直接產(chǎn)生和由外植體誘導(dǎo)的愈傷組織上 產(chǎn)生。5、生物脫毒的方法有莖尖分生組織脫毒法、愈傷組織脫毒法和微體嫁接離 體培養(yǎng)脫毒法。6、植物基因轉(zhuǎn)化的方法有農(nóng)桿萌介導(dǎo)法、基因槍轉(zhuǎn)化法和聚乙二醇介導(dǎo)法。7、種質(zhì)保存的方法

4、有原地保存和異地保存。8、常用培養(yǎng)基有MS培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基和懷特培養(yǎng)基等。9、植物組織再生的途徑有胚狀體途徑和細(xì)胞途徑。10、 葉培養(yǎng)時(shí)葉片腹面向上放置利于芽的分化。問(wèn)答題：1、MS培養(yǎng)基的基本成分。答:糖的作用：提供碳源(能源)；%1活性炭作用：吸附有害物質(zhì)、不易褐化、有利生根等；%1 PH 值 5.6-5.8 左右；%1激素種類(lèi)及其作用：a.生長(zhǎng)素類(lèi)：誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂和根的分化；b.細(xì)胞分裂素類(lèi)：促進(jìn)植物細(xì)胞的分裂和不定芽形成打破頂端優(yōu)勢(shì)形成叢 生芽，有利于芽的增值，常用于繼代培養(yǎng)和增值培養(yǎng)；c. 2,4.D、NAA:誘導(dǎo)愈傷組織；d.IBA:誘導(dǎo)生根；e.細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例高時(shí)，產(chǎn)

5、生芽；比例低時(shí)，產(chǎn)生根。2、培養(yǎng)基的配置過(guò)程？答：(1)母液的量取及培養(yǎng)基的配制：根據(jù)需要配置的營(yíng)養(yǎng)基體積，計(jì) 算所需藥品及水的用量，稱取所需的蔗糖、瓊脂放于燒杯中；量取一定 量的去離子水或者是自來(lái)水，一般是培養(yǎng)基量的80%-90%,加入到搪瓷鍋或 不銹鋼鍋內(nèi)并加熱，然后吸取母液；母液的吸取量應(yīng)根據(jù)母液擴(kuò)大倍數(shù) 和每次配置營(yíng)養(yǎng)基的量，計(jì)算出每次吸取母液的量；按照大量元素、微 量元素、鐵鹽、有機(jī)物、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的順序編號(hào)置于操作臺(tái)上，按 順序量取各種母液放于另一燒杯中；水開(kāi)后，加入蔗糖和瓊脂，不斷 攪 拌，防止粘鍋底，直至瓊脂全部溶解位置。；將量取好的各種母液倒入 上述已加熱的鍋中，不斷攪拌

6、，使其均勻溶解；為了精確定容，可先 在 標(biāo)準(zhǔn)溫度下定容，然后在培養(yǎng)基熬煮好的溫度下找到對(duì)應(yīng)的刻度，并以此 刻度進(jìn)行定容。(2)調(diào)整培養(yǎng)基的pH值：用酸度計(jì)測(cè)試，準(zhǔn)確度高，X寸精密實(shí)驗(yàn)等研 究工作有利；用精密pH試紙，可用于育苗和生產(chǎn)工作。(3)培養(yǎng)基的分裝：要趁熱分裝，一般每瓶40mL或100mL左右；用棉 塞或封口膜等封口，用線繩或橡皮筋捆扎，及時(shí)做好標(biāo)記。(4)培養(yǎng)基的滅菌和保存：用高壓滅菌鍋在Ll1.2kg/cn?條件下維持15 20min即可滅菌；讓培養(yǎng)基自然冷卻至凝固后置于10。(2以下保存，含生 長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基在45。(2黑暗處保存更為理想。應(yīng)注意培養(yǎng)基應(yīng)在2 周內(nèi)用完。3、常

7、用滅菌技術(shù)。答：物理滅菌：(1)熱力滅菌：最常用的方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌法。 干熱滅菌的對(duì)象是不含水、耐高溫、新器皿工具、污染器皿和用具等。 濕熱滅菌的穿透力強(qiáng)、滅菌時(shí)間短，也是最常用的一利方法。常采用間 歇滅菌和加壓滅菌法。a.間歇滅菌的對(duì)象是不耐高溫(100度)物品或有機(jī)溶 劑;b.高壓滅菌時(shí)溫度121。o維持20mino(2)輻射滅菌：常用紫外線/紫外燈滅菌，應(yīng)注意避免直接在燈下操作。(3)過(guò)濾滅菌：濾膜孔徑為0.45或0.20微米。0.45微米濾膜可過(guò)濾酶系或小量液體培養(yǎng)基；0.20毫米濾膜除去病毒以外的所有微生物?；瘜W(xué)滅菌：常用的化學(xué)滅菌劑有含氯化合物：常用的為漂白粉、0.1 %

8、氯 化汞、次氯酸鈉，用于物體或外植體滅菌；過(guò)氧化物：36%雙氧水，0.2%過(guò)氧乙酸；醇類(lèi)：7o %乙醇，用于外植體、皮膚、器皿等；季胺 鹽類(lèi)：0.10.5%新潔爾溶液，用于污染物表面；酚類(lèi)：35%石炭峻或 煤 酚皂，用于噴灑房間或處理污染物表面；醛類(lèi)：常用甲醛、戊二醛熏 蒸房間。4、花粉培養(yǎng)的意義？答：自交作物育種中，加速純化和提高選擇效率;%1在異交作物中快速獲得純系；%1提高突變育種的效率；%1獲得異緣附加系、代換系和易位系。5、花藥培養(yǎng)取材的時(shí)間及預(yù)處理與滅菌？答：取材的關(guān)鍵在于選取花粉處于合適的發(fā)育期的花藥，花粉發(fā)育時(shí)期觀 察，從一個(gè)花蕾中，取下一枚花約，觀察其發(fā)育期，其余花弱可供接種

9、用;材料的預(yù)處理，選取花粉處于合適發(fā)育期的花蕾，將花蕾在低溫下處理310天；花蕾滅菌，將經(jīng)過(guò)冷處理的花蕾在70%酒精浸漬兒秒，然后用10%漂白粉20min或0.1 %升汞lOmin,最后用無(wú)菌水沖洗干凈即可。6、外植體的表面消毒方法？答：一般消毒方法：取材后將老的組織去掉，自來(lái)水沖洗，洗衣粉水洗（簡(jiǎn) 單殺菌），自來(lái)水沖洗，70%酒精處理（10-30秒），消毒劑處理（升汞5 一 12分鐘），滅菌蒸餡水沖洗3-5遍。材料內(nèi)部所帶雜菌的處理：二次滅菌；加入抗生素，注意抗生素的用 量，高濃度容易造成培養(yǎng)物的死亡；取生長(zhǎng)期旺盛的生長(zhǎng)點(diǎn)部位作為起 始培養(yǎng)的外植體；取被內(nèi)生菌污染的培養(yǎng)物的莖尖不停的轉(zhuǎn)接。7

10、、 試管苗的特點(diǎn)？答：葉片角質(zhì)不發(fā)達(dá)，無(wú)表皮毛或僅有少量的表皮毛，葉片上出現(xiàn)大量的 水孔，氣孔數(shù)量和大小超過(guò)普通幼苗。因此，再生植株不能馬上適應(yīng)外界自然條件，必須有一個(gè)移植馴化、煉苗的過(guò)程。試管苗的移植馴化主要包 括基質(zhì)的選擇、煉苗和苗期管理等環(huán)節(jié)。8、 無(wú)病毒植株的鑒定方法？答：血清鑒定法：利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理來(lái)鑒定，這種方法 需要有特定病毒的抗體。%1生物鑒定法（敏感植物鑒定法）：利用對(duì)植物病毒特別敏感的品種或品 系，進(jìn)行接種鑒定。有些植物對(duì)病毒極為敏感，一旦感染病毒就會(huì)在其葉片乃至全株上表現(xiàn)特有的病斑，每種病毒都有自己的敏感植物。%1電子顯微鏡鑒定法:直接觀察經(jīng)脫毒培養(yǎng)的葉片,

11、檢查是否有病毒質(zhì)粒的存在，是一種既準(zhǔn)確又科學(xué)的方法。9、 玻璃化的產(chǎn)生的原因及如何處理？答：玻璃化是指芽苗的莖、葉腫脹，呈半透明水浸狀態(tài)，葉片反卷，脆而 易斷。產(chǎn)生的原因：培養(yǎng)基中的細(xì)胞分裂素含量過(guò)高，滲透勢(shì)較低；瓶?jī)?nèi)濕 度過(guò)大；透氣性差。解決方法：提高培養(yǎng)基的滲透勢(shì)（加蔗糖、瓊脂或干燥劑等）；降低 培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素水平和鉉態(tài)氮含量；增加容器的通風(fēng)、光照，降低 培養(yǎng)溫.度。10、褐化的產(chǎn)生的原因及如何處理？答：褐化是指接種后外植體（尤其是切口處）表面變褐，甚至培養(yǎng)基也變 褐的現(xiàn)象。產(chǎn)生的原因：植物的種類(lèi)；外植體的年齡；培養(yǎng)基的成分：細(xì)胞分 裂素和無(wú)機(jī)離子濃度過(guò)高；培養(yǎng)條件：光照過(guò)強(qiáng)、溫度過(guò)高

12、、培養(yǎng)時(shí)間 過(guò)長(zhǎng)。解決辦法：選擇合適的外植體，選擇年幼的植株，選擇處于生長(zhǎng)旺盛期 的植物材料，調(diào)節(jié)合適的培養(yǎng)條件。如降低細(xì)胞分裂素含量、無(wú)機(jī)鹽水 平、降低濕度和光照等；連續(xù)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)。對(duì)容易褐變的外植體，接種后, 每隔12.24h轉(zhuǎn)一次，經(jīng)7-10d的連續(xù)轉(zhuǎn)移，可使褐變現(xiàn)象得到控制或大為 減輕；加入抗氧化劑。培養(yǎng)基中加入半胱氨酸、抗壞血酸等可有效的避 免褐化或減輕褐變現(xiàn)象。11、莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒的原理？答：取材大小為0.1 0.2mm。原理：植物細(xì)胞分裂和細(xì)胞繁殖之間存在相互競(jìng)爭(zhēng)，在迅速分裂的植物 細(xì)胞中試正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，而在植物細(xì)胞伸長(zhǎng)期間是病毒核蛋白合 成占優(yōu)勢(shì)。%1生長(zhǎng)點(diǎn)分生組織是活躍分裂細(xì)胞，其分裂速度比病毒DNA復(fù)制速度快， 股采用旺盛分裂的生長(zhǎng)錐離體培養(yǎng)，就有可能脫除植物病毒。12、 莖尖培養(yǎng)的意義（用途）？答：無(wú)性系快速繁殖；培養(yǎng)無(wú)病毒苗；%1品種改良；%1理論基礎(chǔ)研究。13、 高壓滅菌的步驟。答：加水：水超過(guò)支架1cm；%1裝鍋：將包扎好的試管或三角瓶直立放在內(nèi)筒中，不要裝得過(guò)緊、過(guò)滿；%1蓋嚴(yán)鍋蓋：先將軟管對(duì)好內(nèi)筒插孔，蓋嚴(yán)鍋蓋，對(duì)角旋轉(zhuǎn)旋鈕；%1加熱：插上電爐插頭或推上電閘加熱；%1排放冷空氣：汽鍋內(nèi)壓力上