果糖二磷酸鈉的紫外吸光光度法測定

1、收稿日期:2004-02-20作者簡介:占達(dá)東(1963-,男,海南海口人,瓊州大學(xué)化學(xué)系副教授,從事分析化學(xué)研究.基金項(xiàng)目:瓊州大學(xué)科研資助項(xiàng)目,批準(zhǔn)號:2003.第11卷第2期瓊州大學(xué)學(xué)報(bào)2004年4月28日V ol.11N o.2Journal of Qiongzhou University Apr.28.2004果糖二磷酸鈉的紫外吸光光度法測定占達(dá)東,李開鴻(瓊州大學(xué)化學(xué)系,海南,五指山572200摘要:研究了紫外吸光光度法測定果糖二磷酸鈉含量的方法.果糖二磷鈉在鹽酸介質(zhì)中對紫外光有吸收,其最大吸收波長在292nm ,果糖二磷酸鈉濃度在0120g ml 1范圍內(nèi)服從比耳定律.對注射用果

2、糖二磷酸鈉的含量進(jìn)行了測定,結(jié)果滿意.關(guān)鍵詞:吸光光度法;果糖二磷酸鈉;測定中圖分類號:O656文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1008-6722(200402-0038-02果糖二磷酸鈉(FDP 是存在于人體內(nèi)的細(xì)胞代謝物,能調(diào)節(jié)葡萄糖代謝中多種酶系的活性.外源性的果糖二磷酸鈉,能通過激活磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性,使細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷和磷酸肌酸的濃度增加,促進(jìn)鉀離子內(nèi)流,有益于缺血、缺氧狀態(tài)下細(xì)胞的能量代謝和葡萄糖的利用,從而可使缺血心肌減輕損傷.有關(guān)果二磷酸鈉含量的測定法有三類:一種是利用果糖二磷酸鈉中果糖基團(tuán)的特異顯色反應(yīng),即定糖法1;第二種以測定果糖二磷酸鈉中二個磷酸根的量來推算果糖二磷

3、酸鈉的含量,即定磷法2;第三種是酶法25,果糖二磷酸在醛縮酶的催化作用下分解為磷酸二羥丙酮(DAP 和3-磷酸-D -甘油醛(G AP ,其中G AP 在磷酸丙糖異構(gòu)酶的作用下,異構(gòu)成DAP ;DAP 在甘油磷酸脫氫酶的作用下,又能氧化還原輔酶I (NADH ,自身被還原成甘油-3-磷酸。NADH 在339nm 處有一顯著的吸收峰,因此,測定體系中NADH 的減少量,便能測出體系中果糖二磷酸的含量。定磷法和酶法的測量過程較復(fù)雜;文獻(xiàn)1報(bào)道的定糖法,是在測試液中加入顯色劑間苯二酚或蒽酮試劑,反應(yīng)生成有色物質(zhì),并測其吸光度,但在以上試驗(yàn)中加入了有污染的間苯二酚等.用紫外吸光光度法在鹽酸條件下直接測

4、定果糖二磷酸鈉還未見報(bào)道.果糖二磷酸鈉在鹽酸介質(zhì)中發(fā)生反應(yīng)生成羥甲基糠醛類物質(zhì),通過對產(chǎn)物的吸收光譜進(jìn)行掃描,發(fā)現(xiàn)在波長292nm 處有最大吸收.果糖二磷酸鈉濃度在0120g ml -1范圍內(nèi)服從此耳定律.本法只加入鹽酸,不加入其它顯色物質(zhì),樣品無需預(yù)處理,方法簡便、快速、靈敏,無污染。1試驗(yàn)部分1.1試劑與儀器果糖二磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)深溶液:稱取0.1000g 果糖二磷酸鈉(生化試劑溶于二次蒸餾水,并定容到100ml ,果糖二磷酸鈉濃度為1mg ml -1.濃鹽酸(分析純.果糖二磷酸鈉粉針.所有試驗(yàn)用水均為二次蒸餾水.T U -1201紫外可見分光光度計(jì)(北京通用公司1.2試驗(yàn)方式在具塞比色管中加入

5、適量的1mg ml-1的果糖二磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入4ml 濃鹽酸,用二次水定容到10ml.在沸水浴中加熱8min ,取出用流水冷卻.用1cm 比色皿,以試劑空白為參比,于波長292nm 處測定其吸光度.2結(jié)果與討論2.1吸收曲線按試驗(yàn)方法用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行吸收光譜掃描,測出最大吸收波長在292nm.本試驗(yàn)選定292nm 為測量皮長.2.2鹽酸的影響按試驗(yàn)方法改變鹽酸的濃度進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果表明,不加入鹽酸時,吸光度為0;當(dāng)鹽酸的加入量為4ml ,吸光度達(dá)到最大值;鹽酸的濃度再增大時,吸光度降低(見圖1.故鹽酸的用量以4ml 為宜.2.3溫度及加熱時間的影響對不同反應(yīng)溫度進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果表明,在70

6、以下不反應(yīng),溫度升高,吸光度也升高;在100的水浴中加熱7min , 吸光度圖1鹽酸的影響達(dá)到最大;100的水浴中加熱710min ,吸光度變化較平緩(見圖2 .試驗(yàn)選定加熱時間為8min.圖2加熱時間的影響2.4放置時間對穩(wěn)定性的影響用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行60min 的時間掃描,結(jié)果發(fā)現(xiàn)吸光度在60min 內(nèi)吸光度緩慢減小,但減小幅度較小.試驗(yàn)選定在冷卻后盡快完成測定.2.5工作曲線的繪制吸取1mg ml -1的果糖二磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml ,按試驗(yàn)方法測定吸光度,繪制工作曲線,可得果糖二磷酸鈉含量在0120g ml -1范圍內(nèi)服從比耳定律.其

7、線性方程為:A =0.7301c +0.0167,相關(guān)系數(shù)為r=0.9990.對80g ml -1果糖二磷酸鈉進(jìn)行11次測定,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 為1.06%.2.6干擾物質(zhì)試驗(yàn)按照試驗(yàn)方法進(jìn)行了干擾試驗(yàn),結(jié)果表明:果糖、蔗糖、一磷酸果糖對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較大的影響;5倍的葡萄糖、維生素C 、PO 43-、Na +等對本方法沒有干擾.3樣品分析按使用說明將注射用果糖二磷酸鈉針粉5g 溶于附帶的50ml 注射用水中,制成待測液.在上述試驗(yàn)條件下,取適量的待測液進(jìn)行測定,并按1方法進(jìn)行比較試驗(yàn).樣品中的果糖二磷酸鈉含量檢測結(jié)果見表1.從試驗(yàn)結(jié)果可見該方法具有很好的選擇性和較高的靈敏度,適用于果糖二磷酸

8、鈉針粉中的果糖二磷酸鈉含量測定.表1樣品分析結(jié)果示標(biāo)值測定值定糖法1(mg ml -1(mg ml -1(mg ml 1試樣10099.498.2參考文獻(xiàn)1杜振寧,吳梧桐.1,6-二磷酸果糖的快速測定方法J .中國生化藥物雜志.1993,2:59.2張龍翔,張庭芳,李令媛.生化實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)M.北京:高等教育出版社,1988.18.3王蕾,孫志浩.果糖-1,6-二磷酸的酶法測定J .工業(yè)微生物.1994,24(4:16.4吳燕,陽菊香,胡隆梅.酶法測定1,6-二磷酸果糖的含量J 衡陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2000,11:68.5應(yīng)漢杰,顧海紅,趙谷林等.用酶法測定血漿中1,6-二磷酸果糖含量J .分析測

9、試學(xué)報(bào).2000,19(4:43.Determination of Sodium Fructose 21,62DiphosphateB ased on SpectrophotometryZH AN Da 2dong ,LI K ai 2hong(Department of Chemistry ,Qiongzhou University ,Wuzhishan Hainan 572200China Abstract :A new fructose -1,6-diphosphate s odium determination method based on UV -photometric method is described.S odium fructose -1,6-diphosphate abs orbs ultraviolet in hydrochloric acid.The abs orbance is measured at292nm.The linear range of the calibration curve is 0120g ml -1.This method has been used for the determination offructose -1