臨床常見細(xì)菌的手工鑒定和結(jié)果判斷概要

1、臨床常見細(xì)菌的手工鑒定和結(jié)果判斷一. 細(xì)菌的鑒定步驟1 1、鑒定的概念：將一個(gè)未知的菌株按其生物學(xué)特性，經(jīng)過(guò)與所有 已知菌種進(jìn)行比較后劃歸到一個(gè)已知菌種的分析過(guò)程。2 2、對(duì)待鑒定的菌種要明確已經(jīng)獲得純化培養(yǎng)或者該菌種在血平板 上生長(zhǎng)良好，有單個(gè)菌落可以進(jìn)行生化試驗(yàn)。（我們這里一般都 是預(yù)先純化培養(yǎng)）3 3、對(duì)待鑒定的菌種進(jìn)行革蘭染色，觀察形態(tài)（Gc,Gc, Gb,Gb, GcGc, GbGb）, 做觸酶，氧化酶實(shí)驗(yàn)，然后按科，屬，種逐步鑒定。要注意對(duì)待 鑒定的菌種選擇一個(gè)合適的鑒定系統(tǒng)，臨床常見細(xì)菌的快速簡(jiǎn)單 的鑒定系統(tǒng)我們都已經(jīng)設(shè)計(jì)好，參考鑒定質(zhì)控單。4 4、按鑒定質(zhì)控單的要求填寫好病人姓

2、名，年齡，性別；標(biāo)本類型， 標(biāo)本編號(hào)，送檢日期等。另外最重要的是要填寫好該菌種的菌落 形態(tài)以及有無(wú)溶血。5 5、復(fù)習(xí)革蘭染色，觸酶實(shí)驗(yàn)，氧化酶實(shí)驗(yàn)。.革蘭染色：是細(xì)菌鑒定過(guò)程中最常用最基本最重要的染色 方法。首先要將待鑒定的細(xì)菌涂片，固定（目的：殺死細(xì)菌，改變 細(xì)菌對(duì)染料的通透性）。第一步：以結(jié)晶紫初染（染色液I）第二步：以盧戈氏碘液媒染（染色液H）第三步：用 95%95%醇脫色（染色液皿）第四步：最后用稀釋復(fù)紅復(fù)染（染色液W）.觸酶實(shí)驗(yàn)（H H2Q實(shí)驗(yàn)）:a.a.原理：具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌能催化雙氧水生成水和初 生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。b.b. 方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在潔凈

3、的玻片上涂開， 滴加3%3%氧化氫數(shù)滴，觀察結(jié)果（立即有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng) 性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性）。要注意不能在血平板上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 這樣易出現(xiàn)假陽(yáng)性；另外陳舊菌落要是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可能會(huì)導(dǎo)致假 陰性結(jié)果；還有不能在接種針或環(huán)上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。c.c. 陽(yáng)性對(duì)照用金黃色葡萄球菌，陰性對(duì)照用鏈球菌；試劑要 避光置4 4C冰箱保存。d.d. 應(yīng)用：絕大多數(shù)含細(xì)胞色素的需氧和兼性厭氧細(xì)菌觸酶實(shí) 驗(yàn)陽(yáng)性，鏈球菌屬陰性。臨床常見細(xì)菌鑒定實(shí)驗(yàn)中我們一般用 于區(qū)別葡萄球菌屬（+ +）,微球菌屬（+ +）,鏈球菌屬（）。 .氧化酶實(shí)驗(yàn)（KovacKovac 實(shí)驗(yàn)）：a.a.原理：氧化酶又稱細(xì)胞色素酶，是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)

4、的最終呼吸酶。酶并不直接與試劑（1 1 醯酸四甲基對(duì)苯二 胺）起反應(yīng)，而是首先使細(xì)胞色素 c c 氧化，然后氧化型細(xì) 胞色素 c c 使對(duì)苯二胺氧化，出現(xiàn)深蘭色反應(yīng)。b.b.方法（濾紙法，菌落法，試劑紙片法）：一般我們采用濾紙法，取白色潔凈濾紙條，沾取菌落少許， 加試劑一滴，陽(yáng)性者立即呈粉紅色，繼而出現(xiàn)深蘭色。結(jié) 果讀取在 1 10 0秒鐘時(shí)為最佳，6060 秒內(nèi)讀取可靠。本實(shí)驗(yàn)避 免接觸含鐵物質(zhì)（假陽(yáng)性），也不能在含糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 的菌落進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（假陰性）。c.c.陽(yáng)性對(duì)照用銅綠假單胞菌，陰性對(duì)照用大腸埃希菌。d.d.應(yīng)用：奈瑟氏屬的菌種均陽(yáng)性，也用于區(qū)別假單胞菌 屬和腸桿菌，前者陽(yáng)性，后者

5、陰性。二.葡萄球菌屬的鑒定葡萄球菌屬主要的種有金黃色葡萄球菌， 表皮葡萄球菌，腐生葡萄 球菌。1.1. 形態(tài)與染色：葡萄球菌直徑 0.50.51.51.5 卩 m m 菌體圓形，呈單個(gè)， 成雙以及不規(guī)簇狀排列。染色呈紫色，為革蘭陽(yáng)性球菌。2.2. 與鏈球菌的區(qū)別：觸酶實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，而鏈球菌陰性；菌體形態(tài)鏈球菌小于葡萄球菌，呈成雙和鏈狀排列的卵圓形的革蘭陽(yáng)性球 菌。3.3. 與微球菌的區(qū)別：觸酶實(shí)驗(yàn)同為陽(yáng)性，但微球菌的菌體呈四聯(lián)狀，要大于葡萄球菌，微球菌葡萄糖氧化發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（操作方法同 甘露醇OFOF 試驗(yàn)）為氧化型；而葡萄球菌為發(fā)酵型。另外咲喃唑 酮（即痢特靈 5 50 0卩 g/g/片）敏感實(shí)驗(yàn)

6、微球菌為耐藥，而金黃色葡 萄球菌為敏感。4.4.葡萄球菌屬的種間鑒定:（1）.菌落色素與溶血毒素：金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃 色，檸檬色或者淡黃色，而其他葡萄球菌則在血平板上菌落 大多數(shù)為白色，也有部分為檸檬色或深黃色。.溶血毒素：金黃色葡萄球菌有a、B、Y、3溶血毒素, 各毒素的區(qū)別是對(duì)動(dòng)物紅細(xì)胞的溶血范圍、抗原性及溶血 時(shí)的溫度等。其中以a溶血毒素為主。而其他葡萄球菌大 多數(shù)不產(chǎn)生溶血毒素，只有表葡有極少能產(chǎn)生溶血毒素。.血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)：用與區(qū)別金黃色葡萄球菌邙日性），表 皮葡萄球菌（陰性），腐生葡萄球菌（陰性）。血漿凝固酶 是金葡菌所產(chǎn)生的，有結(jié)合凝固酶和游離凝固酶兩種。血漿 凝固酶

7、檢測(cè)有兩種方法，為玻片法和試管法，我們一般采用 玻片法。a.a. 操作方法：挑取少許金黃色葡萄球菌菌落在玻片上與血 漿乳化，結(jié)合凝固酶能作用于血漿中的纖維蛋白原，從而在 金黃色葡萄球菌表面發(fā)生凝集，所以我們?nèi)庋勰芸匆娔w 粒。玻片法主要由結(jié)合凝固酶作用產(chǎn)生；游離凝固酶是金黃 色葡萄球菌產(chǎn)生的胞外酶，能與血漿中的血漿凝固反應(yīng)因子（類似凝血酶的一種物質(zhì)）作用，形成復(fù)合物再使纖維蛋白 原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而發(fā)生凝集。試管法主要由游離凝固酶作 用產(chǎn)生。b.b. 注意事項(xiàng)：菌落不能太多，否則會(huì)影響結(jié)果觀察；凝固 酶陽(yáng)性要做自凝陰性對(duì)照（用生理鹽水代替血漿），只有在 陰性對(duì)照也不凝集才能認(rèn)為是真正的陽(yáng)性，

8、有一部分葡萄球 菌有自凝現(xiàn)象。.新生霉素敏感實(shí)驗(yàn)：金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌對(duì)新生霉素紙片（5 5 卩 g/g/片）敏感；而腐生葡萄球菌，微球菌則 對(duì)之耐藥。抑菌環(huán)直徑16mm16mm 即為新生霉素敏感。.甘露醇氧化發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：a.a. 操作方法：取兩支甘露醇微量生化管，在微量管內(nèi)接種待檢細(xì)菌，然后一支加兩滴石臘密封，另外一支則不加，放3 37 7C孵箱內(nèi) 181824h24h 后觀察結(jié)果。b.b. 結(jié)果觀察：微量生化管變黃色為陽(yáng)性，也就是能利用甘露 醇。若兩管都變黃色則說(shuō)明是發(fā)酵型；其中加石蠟管不變色， 沒加石蠟管變黃色則為氧化型；如果兩管都不變色則說(shuō)明該 細(xì)菌是不利用甘露醇（產(chǎn)堿型）。c.

9、c. 應(yīng)用： 金黃色葡萄球菌在需氧和厭氧的條件下都能利用甘 露醇 （即兩管都變黃色）；表皮葡萄球菌需氧部分產(chǎn)酸，厭 氧條件下不利用甘露醇（即沒加石蠟管有部分會(huì)變黃色，加 石蠟管不變黃色）；腐生葡萄球菌與表皮葡萄球菌類似。三. 微球菌屬的種間鑒定微球菌屬主要的種有易變微球菌，藤黃微球菌，玫瑰微球菌。鑒定生化見下表微球菌屬的種間鑒定易變微球菌藤黃微球菌玫瑰微球菌色素產(chǎn)生黃色黃色+粉紅色需氧葡萄糖產(chǎn)酸+硝酸鹽還原+一脲素酶d dd d+氧化酶一+/ / +（弱）新生霉素敏感S/RS/RS SR Rd d :不定 S S :敏感 R R :耐藥四. 鏈球菌屬1.1.形態(tài)和染色：鏈球菌的直徑為 0.50

10、.5 1.01.0 卩 m m 呈成雙和鏈狀排列的卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌，菌體小于葡萄球菌，無(wú)鞭毛， 沒有芽胞，但有些菌株會(huì)形成莢膜。肺炎鏈球菌呈矛頭狀，寬 端相對(duì)，尖端向外。2.2.根據(jù)鏈球菌在血平板上溶血現(xiàn)象的不同分為三種：甲型 （a- -）溶血，即菌落周圍出現(xiàn)較窄的草綠色溶血環(huán)；乙型（P- -）溶血，即菌落周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)； 丙型（丫- -）溶血，即菌落周圍無(wú)溶血環(huán)。3.3.根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)（C C 多糖抗原）的不同可分為 A A、B B、C C、D D、E E 、F F、G G、H H、K K、L L、M M、N N、0 0、P P、Q Q、R R、S S、T T 等 1818 個(gè)群，

11、對(duì)人 類有致病者 90%!90%!于 A A 群，偶見其他群鏈球菌致病。4.4.鏈球菌屬的種間鑒定.乙型溶血鏈球菌的鑒定：a.a.對(duì)桿菌肽（0.04U/0.04U/片）（抑菌圈直徑10mm10mm 敏感： A A 群鏈球菌（主要為化膿性鏈球菌）。b.b.對(duì)桿菌肽不敏感，膽汁七葉苷實(shí)驗(yàn)陰性，但馬尿酸 鈉水解實(shí)驗(yàn)、CAMCAM 實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性：B B 群鏈球菌（主要為無(wú)乳 鏈球菌）。c.c.對(duì)桿菌肽不敏感，膽汁七葉苷實(shí)驗(yàn)陰性，馬尿酸鈉水解實(shí)驗(yàn)陰性，CAMCAM 實(shí)驗(yàn)陰性：主要為馬鏈球菌、類馬 鏈球菌、獸疫鏈球菌；對(duì)三者的區(qū)別實(shí)驗(yàn)要加做海藻糖 和山梨醇實(shí)驗(yàn)。d.d.CAMPCAMP 實(shí)驗(yàn)：將能產(chǎn)生B- -

12、溶血的金黃色葡萄球菌在 血平板上劃一橫線接種， 再將待鑒定菌于金黃色葡萄球 菌3m3mn n處垂直種一短線，若在有 COCO 條件下培養(yǎng) 5 56 6 小 時(shí)，或無(wú) COCO 條件下培養(yǎng) 18182424 小時(shí)，在兩細(xì)菌連接處 出現(xiàn)一個(gè)半月型的加強(qiáng)溶血區(qū)即為 CAMCAM 實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。.甲型溶血鏈球菌的鑒定：a.a.草綠色鏈球菌：對(duì)桿菌肽敏感，對(duì)奧普托欣( OptoOpto chinchin )不敏感，膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)陰性，膽汁七葉苷實(shí)驗(yàn)陰 性，在高鹽中不生長(zhǎng)。主要有變異鏈球菌，輕型鏈球菌， 血鏈球菌，唾液鏈球菌等。b.b.肺炎鏈球菌：菌體呈矛頭狀，成雙排列，鈍端相對(duì)，尖端相背，較葡萄球菌，其他鏈球

13、菌略大；在血平板上 菌落細(xì)小、圓形、表面光滑、灰白色、半透明，開始時(shí)菌落呈扁平狀，以后中心塌陷，呈臍窩狀。與草綠色鏈球菌的主要區(qū)別是膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，對(duì)奧普托欣( OpOp tochintochin )敏感。奧普托欣(OptochinOptochin )含量為 5 5 卩 g/g/片， 抑菌環(huán)18m18mn n為敏感，15mn15mn 為不敏感，151518mn18mn 應(yīng)重 復(fù)實(shí)驗(yàn)。.腸球菌(D D 群鏈球菌)的鑒定：溶血不定，主要是a- -、丫 - -溶血；對(duì)桿菌肽不敏感，但其特異性實(shí)驗(yàn)是膽汁七葉苷實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性；若能在 6.5%NaCI6.5%NaCI 的心 浸液肉湯中生長(zhǎng)即為 D D 群腸球

14、菌，不能生長(zhǎng)為 D D 群非腸球 菌。.鏈球菌屬鑒定的系統(tǒng)生化結(jié)果判斷a a.1%1%美蘭牛乳b.b.膽汁七葉苷實(shí)驗(yàn)：變黑為陽(yáng)性。c.c.PH9.6PH9.6 肉湯實(shí)驗(yàn)：變渾濁為能在堿性環(huán)境中生長(zhǎng)邙日 性）。d.d.6.5%NaCI6.5%NaCI 心浸液肉湯： 由紫變黃為能在高鹽環(huán)境中 生長(zhǎng) （陽(yáng)性）。e.e.精氨酸雙水解酶實(shí)驗(yàn)：變紅色（對(duì)照不變色，仍為 黃色）為性五. 奈瑟氏菌屬和布蘭漢菌屬奈瑟氏菌屬主要有腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布蘭漢氏 菌屬只有卡他布蘭漢氏菌。兩者系需氧革蘭陰性球菌。奈瑟氏菌的生物學(xué)特性：革蘭陰性球菌，需氧，卵圓形或腎形，無(wú)動(dòng)力，氧化酶及觸酶均陽(yáng)性。培養(yǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)

15、要求高，能在巧克力平板或有豐富營(yíng)養(yǎng)的血平板上， 在 5 51 1 0%C0%C2環(huán)境中生長(zhǎng)。.鑒定過(guò)程：a.a.DNADNA 酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性為布蘭漢氏菌，陰性則為奈瑟氏菌。b.b.能在普通血平板上生長(zhǎng)的為其他奈瑟氏菌，在巧克力平板上生長(zhǎng)的主要為腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。c.c.能使麥芽糖氧化分解產(chǎn)酸的是腦膜炎奈瑟氏菌，不利用麥芽糖的是淋病奈瑟氏菌.幾種主要細(xì)菌對(duì)葡萄糖、麥芽糖、蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如下:氧化分解產(chǎn)酸菌種葡萄糖麥牙糖蔗糖淋病奈瑟氏菌+一腦膜炎奈瑟氏菌+粘液奈瑟氏菌+卡他布蘭漢菌DNADNA 酶實(shí)驗(yàn):a.a.方法：將待鑒定細(xì)菌點(diǎn)種于含 0.2%DNA0.2%DNA 勺 DNADN

16、A 瓊脂平 板上，培養(yǎng)后用 1mmol/LHCI1mmol/LHCI 覆蓋平板，菌落周圍出現(xiàn)透 明環(huán)者為陽(yáng)性。b.b.原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生 DNADNA 酶，可使 DNADNA 長(zhǎng)鏈水解成由幾個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸鏈；長(zhǎng)鏈DNADNA 可被酸沉淀，而水解后形成后的寡核苷酸鏈則可溶于酸，故在DNADNA瓊脂平板加鹽酸，可在菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。（腸桿菌科中只有沙雷氏菌和變形桿菌可產(chǎn)生 DNADNA 酶，陽(yáng)性球 菌中只有金葡菌能產(chǎn)生 DNADNAB。）六. 腸桿菌科腸桿菌科是一大群生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性桿菌，其中對(duì)人致病性較強(qiáng)的鼠疫耶爾森菌（現(xiàn)已基本沒有流行）和傷寒沙門菌；4 4 類常引起

17、腹瀉和腸道感染的細(xì)菌（埃希氏菌、志賀氏菌、沙門氏菌、耶 爾森氏菌）和 8 8 種常導(dǎo)致院內(nèi)感染的細(xì)菌（枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌 屬、腸桿菌屬、多源菌屬、沙雷菌屬、變形桿菌屬、普羅威登菌屬 和摩根菌屬）。另外還有很多細(xì)菌是腸道的正常菌群，但在一定條件 下也可致?。l件致病菌）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)于革蘭陰性桿菌首先要做氧化酶實(shí)驗(yàn)，陰性為腸桿菌科細(xì)菌；陽(yáng)性的為非發(fā)酵菌（我們實(shí)驗(yàn)室還沒有簡(jiǎn)單的系統(tǒng)鑒定方 法，一般要儀器上卡檢測(cè)）或弧菌科細(xì)菌。1 1.腸桿菌科的系統(tǒng)生化.KIAKIA 試驗(yàn)（克氏雙糖鐵）組成：乳糖/葡萄糖=10=10/1 1 （斜面/高層，其長(zhǎng)度最好是都是 2CM2CM結(jié)果判斷：斜面或高層變黃色

18、：陽(yáng)性；不變色（紅色）：陰性高層中出現(xiàn)裂隙：產(chǎn)氣陽(yáng)性高層中出現(xiàn)黑色（FeSFeS）:產(chǎn) H H2S S 陽(yáng)性.苯丙氨酸脫羧酶試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫羧酶使苯丙氨酸氧化脫羧后生成 苯丙酮酸，再與 10%10%勺 FeClFeCl3試劑產(chǎn)成深綠色反應(yīng)。（變 形桿菌屬、普羅威登菌屬和摩根菌屬為陽(yáng)性，其他為陰 性）.枸櫞酸鹽試驗(yàn)（碳源利用實(shí)驗(yàn)）在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基中細(xì)菌能利用的碳源只有枸櫞酸鹽， 分 解后生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性， pHpH 指示劑溴麝香草 酚藍(lán)由淡綠色變?yōu)樯钐m色，即為枸櫞酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性。 （埃 希氏菌屬，志賀氏菌屬，愛德華菌屬為陰性，其他為陽(yáng)性） 注意：接種時(shí)不能被糖，蛋白胨污染，要單獨(dú)

19、接種）.甲基紅（MRMR 試驗(yàn)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基的 pHpH 下降至 4.54.5 以下 時(shí)，加入甲基紅指示劑由桔黃色變桔紅色為弱陽(yáng)性； 變紅 色為陽(yáng)性。培養(yǎng)基成分：葡萄糖蛋白胨水試劑：甲基紅 0.1g0.1g，酒精 300ml300ml，水 200ml200ml主要用于大腸埃希菌（+ ）和產(chǎn)氣腸桿菌（）的鑒別；常與 V-V-P P實(shí)驗(yàn)聯(lián)合使用，一般情況下兩者結(jié)果正好相反， 但也有例外如奇變兩者同為陽(yáng)性。.MIUMIU （動(dòng)力靛基質(zhì)尿素）試驗(yàn)1.動(dòng)力：在半固體培養(yǎng)基中穿刺接種細(xì)菌培養(yǎng)后，若穿刺線周圍有細(xì)菌擴(kuò)散生長(zhǎng)， 則為動(dòng)力 （+）

20、 ;清晰則 為動(dòng)力 （一） 。2.靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再與試劑對(duì)位 二氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而呈紅色。3.尿素試驗(yàn)：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿，再使培養(yǎng)基中的指示劑（0.0.4%4%酚紅）變紅色即為陽(yáng)性。.硝酸鹽還原試驗(yàn)NONOT NQ-NQ-（大腸）NQNQ NHNH+NONOT N2（沙雷氏菌屬）試劑甲：對(duì)氨基苯磺酸試劑乙：a- -萘胺觀察結(jié)果時(shí)甲液和乙液要等量加入， 立即或 10min10min 內(nèi)出現(xiàn) 紅色為陽(yáng)性。若不變色，則要加入鋅粉：變紅色，說(shuō)明 硝還試驗(yàn)為真陰性仍不變色， 說(shuō)明硝還試驗(yàn)真

21、陽(yáng)性，但 原先還原產(chǎn)物不是 NQNQ。陰性結(jié)果出現(xiàn)時(shí)有三種可能：細(xì)菌不能還原硝酸鹽亞 硝酸鹽繼續(xù)分解生成氨或氮培養(yǎng)基不適合細(xì)菌生長(zhǎng) 腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽.氨基酸脫羧試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生脫羧酶分解氨基酸使其脫羧生成胺和COCO,雖然各種細(xì)菌所產(chǎn)生的脫羧酶不一定相同，但最后都能生 成胺（賴氨酸T尸胺，鳥氨酸T腐胺，精氨酸T精胺） 和 COCO。然后胺能使培養(yǎng)基變堿性，通過(guò)指示劑（溴甲 酚紫）由黃變紫即為陽(yáng)性。對(duì)照管（無(wú)氨基酸）為黃色。 注意：微量管接種好后要加石蠟，使培養(yǎng)基造成厭氧 環(huán)境。（生成的胺更穩(wěn)定，還能誘導(dǎo)氨基酸脫羧酶的產(chǎn) 生）對(duì)照管如果不顯黃色，則結(jié)果不能判斷。應(yīng)用：除傷寒沙門氏

22、菌，雞沙門氏菌外，其他沙門氏菌鳥 AAAA 賴 AAAA 均為陽(yáng)性；除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志 賀菌也菌為陽(yáng)性。.葡萄糖酸鹽試驗(yàn)微量管在培養(yǎng) 181824h24h 后，加班氏試劑，水浴煮沸 1010 minmin,由蘭色變黃綠色到磚紅色即為陽(yáng)性， 不變?yōu)殛幮浴? 1.腸桿菌的鑒定流程.根據(jù)苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)：（ + ）：變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬（）:埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，沙門氏菌屬，枸櫞酸 桿菌屬，愛德華菌屬；克雷伯菌屬，腸桿菌屬， 沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬。.苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)陰性，加做葡萄糖酸鹽實(shí)驗(yàn)（ + ）:克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞 菌屬a.a.動(dòng)力（一

23、）：克雷伯菌屬，屬內(nèi)種的鑒定主要 根據(jù)吲哚試驗(yàn)（肺克吲哚實(shí)驗(yàn)陰性，三個(gè)亞種鑒別 試驗(yàn) IMViCIMViC:肺炎 + + ,臭鼻+ d d,鼻硬結(jié) + ）b.b.動(dòng)力（ + ）, DNADNA 酶（ + ）:沙雷氏菌屬動(dòng)力（ + ）, DNADNA 酶（），枸櫞酸鹽（ + ）:腸 桿菌屬（主要是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者賴 氨酸陰性，而后中為陽(yáng)性）動(dòng)力（ + ）, DNADNA 酶（），枸櫞酸鹽（）：哈 夫尼亞菌屬（）：加做 IMViCIMViC （靛基質(zhì)- -甲基紅- - VP#VP#句櫞酸鹽）試驗(yàn)a.a.IMViCIMViC （I）:大腸埃希菌 （ H H2S S ）或 愛德華菌屬（HS

24、HS+）。b.b.IMViCIMViC+ + ）:枸櫞酸桿菌屬.苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，根據(jù)產(chǎn) HSHS 可分（ + ）:變形桿菌屬屬內(nèi)主要鑒定試驗(yàn)如下普變奇變產(chǎn)粘變潘尼氏尿素酶+鳥氨酸一+一一靛基質(zhì)+一一一麥芽糖一一+木糖+（）:普羅威登氏菌屬，摩根氏菌屬普羅威登氏菌屬：鳥氨酸：；枸櫞酸鹽：+ （屬 內(nèi)鑒定尿素酶及一些碳水化合物的產(chǎn)酸試驗(yàn)， 如甘露醇、阿拉伯糖、海藻糖等）摩根氏菌屬：鳥氨酸：+;枸櫞酸鹽：（只有一個(gè)種：摩氏摩根氏菌）.志賀氏菌屬和沙門氏菌屬這兩種菌屬在腸道選擇性培養(yǎng)基（SSSS 麥康凱）形成不發(fā)酵乳糖的透明或半透明的無(wú)色菌落， 但一些沙門氏能 產(chǎn) H H2S S就會(huì)形成中心黑

25、色的菌落，鑒定時(shí)在選擇性培養(yǎng)基 上挑選可疑菌落進(jìn)行鑒定。a a.志賀氏菌屬主要系統(tǒng)生化：KIAKIA: K/AK/A （只有福氏 6 6 型能產(chǎn)氣），H H2S S （）; MIUMIU +/-+/-;苯丙：；枸櫞酸鹽：。報(bào)告結(jié)果時(shí)要根據(jù)其血清學(xué)的結(jié)果鑒定到種，即A A 群（痢疾志賀氏菌）、B B 群（福氏志賀氏菌）、C C 群（鮑氏 志賀氏菌）、D D 群（宋氏志賀氏菌）；我國(guó)主要以 B B 群和 D D 群為主。b b.沙門氏菌屬主要系統(tǒng)生化：KIAKIA: K/AG,K/AG, H H2S S （ +/+/-）; MIU:MIU: + ;苯丙：；枸櫞酸鹽：。傷寒沙門氏菌的抗原結(jié)構(gòu)：菌體抗

26、原（0 0 抗原），鞭毛 抗原（H H抗原），包膜抗原（主要是 ViVi 抗原）根據(jù)系統(tǒng)生化鑒定到沙門氏菌屬后，在根據(jù)其抗原結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，用血清學(xué)凝集分到種即可報(bào)告結(jié)果。血清凝集步驟如下：A-FA-F 多價(jià) 0 0（ + ）:0 02, HaHa（ + ）: A A 群（甲型副傷寒沙門氏菌）0 04, HbHb （+ ）: B B 群（乙型副傷寒沙門氏菌）0 06、7, He,He, ViVi （ + ）: C C 群（丙型副傷寒沙門氏菌）0 09, Hd,Hd, ViVi （ + ）: D D 群（傷寒沙門氏菌）0 03、io, HehHeh（ + ）: E E 群0 0ii, HiHi （

27、+ ）: F F 群A-FA-F 多價(jià) 0 0 （）,做 ViVi 血清因子凝集：（ + ）濃菌液 沸水煮沸 30min30min,再用 A-FA-F 多價(jià) 0 0 血清定群；（）繼續(xù) 以 A-FA-F 以外的多價(jià) 0 0 血清凝集分型。血清凝集注意：確定 0 0 群后，一定要用 H H 因子再做凝集;最終結(jié)果要以凝到 H H 相后才能報(bào)告。七.非發(fā)酵革蘭陰性桿菌非發(fā)酵革蘭陰性桿菌是指一群不利用葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖、需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌。氧化酶試驗(yàn)一般陽(yáng)性，除不動(dòng)桿菌屬和嗜麥芽假單胞菌外。非發(fā)酵菌按下列試驗(yàn)進(jìn)行初步分屬菌屬?zèng)r觸酶氧化酶0-F0-F試驗(yàn)動(dòng)力MaCCMaC

28、C 生長(zhǎng)情假單胞菌屬+0/0/一+/ / 生長(zhǎng)+無(wú)色桿菌屬+0/0/一+/ / 生長(zhǎng)+不動(dòng)桿菌屬一0/0/一一生長(zhǎng)+產(chǎn)堿桿菌屬+一+生長(zhǎng)+摩拉菌屬+一一不生長(zhǎng)+金氏菌屬+F F（弱）一不定黃桿菌屬+F F（弱）不生長(zhǎng)+下面主要講一下銅綠假單胞菌：在血平板上形成的菌落大而扁平、 濕潤(rùn)、有金屬光澤，有生姜味的灰綠色或蘭綠色的菌落，并有明顯 的溶血環(huán)。常有色素產(chǎn)生（綠膿素，青膿素，紅膿素，黑膿素等）， 在 MHMH 平板上更加明顯。銅綠假單胞菌的最低鑒定標(biāo)準(zhǔn)：動(dòng)力+氧化酶+枸櫞酸鹽+氧化分解 GLUGLU 木糖不利用麥芽糖賴、鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)- 精氨酸雙水解酶試驗(yàn)+H H2S S。八.棒狀桿菌屬棒狀

29、桿菌屬是一群革蘭陽(yáng)性桿菌。菌體大小長(zhǎng)短不一，常一端 或兩端膨大呈棍棒狀。大多數(shù)存在于水和土壤中，其中有的是人和 動(dòng)物粘膜上的正常菌群，若是從無(wú)菌部位分離到棒狀桿菌，應(yīng)予以 鑒定（如宮頸拭子）。在血平板上能生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)不良好，菌落細(xì)小，濕潤(rùn)。鑒定：根據(jù)觸酶和有無(wú)溶血，可分：.HQ+,HQ+,無(wú)溶血：白喉、假白喉、潰瘍、干燥、假結(jié)核、馬棒、牛棒；.H H2Q Q ,有溶血：溶血棒、化膿棒、陰道棒.加做葡萄糖，麥芽糖，蔗糖產(chǎn)酸試驗(yàn)，結(jié)合和標(biāo)本類型，基本上可以鑒定到是哪一種棒狀桿菌。藥敏試驗(yàn)方法：一、K-BK-B 法：1 1、從孵育了 16-2416-24 小時(shí)的瓊脂平板上（血平板），挑出單個(gè)菌落，直

30、 接用生理鹽水制成 0.50.5 麥?zhǔn)蠁挝弧? 2、在 1515 分鐘內(nèi)，用無(wú)菌棉拭子蘸取調(diào)好的菌液，在液面上方管壁處 旋轉(zhuǎn)并用力擠壓幾次，以從中擠出過(guò)多的菌液。3 3、用棉拭子在無(wú)菌的 M-HM-H 培養(yǎng)基表面化線接種，再重復(fù)操作兩次， 每次將平板轉(zhuǎn)動(dòng) 6060 度，每次接種都應(yīng)保證接種物均勻分布，最后用 棉拭子涂抹平板的邊緣。4 4、將確定好的藥敏紙片分貼到平板表面。每個(gè)紙片都應(yīng)壓一下，以保證與平板表面完全接觸。每個(gè)紙片中心間距24mm24mm 紙片一旦與平板接觸，不應(yīng)再移動(dòng)。5 5、貼完紙片后，應(yīng)在 1515 分鐘內(nèi)放入 3535 度孵箱。嗜血桿菌屬，鏈球 菌屬放入3%-5%3%-5%勺

31、 CQ2CQ2 燭缸。6 6、孵育 2424 小時(shí)以后，測(cè)量各藥敏紙片抑菌圈直徑，與 NCCLSNCCLS 手冊(cè)比 較，作出結(jié)果判斷。說(shuō)明：細(xì)菌藥敏結(jié)果的判斷以 NCCLSNCCLS 為標(biāo)準(zhǔn)，所以藥敏試驗(yàn)的每一步 都應(yīng)嚴(yán)格按照 NCCLSNCCLS 操作，否則將失去意義。鏈球菌、奈瑟菌屬、流 感嗜血桿菌、除銅綠假單孢菌和不動(dòng)桿菌外的假單孢菌屬不用K-BK-B 法. .肺炎鏈球菌膠乳凝集測(cè)定法 1 1、在一干凈玻片上分別滴兩滴生理鹽水。2 2、從冰箱取出鑒定試劑 （SlidexSlidex pneumo-kitpneumo-kit） 于室溫。3 3、在其中一滴生理鹽水上滴加 R1R1 試劑，在另

32、外一滴上滴加 R2R2 試劑, 用攪拌棒混勻。4 4、輕輕晃動(dòng)玻片 2 2 分鐘，觀察結(jié)果。5 5、2 2 分鐘內(nèi)，女口 R1R1 出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性；女口 R1R1、R2R2 均未出現(xiàn)凝集為陰 性。注：R3R3 為陽(yáng)性對(duì)照。二、藥敏紙片的選擇1 1 、革蘭陰性桿菌（腸桿菌科）頭孢噻肟（CTX0CTX0 頭孢唑林（CZCZ 頭孢他定（CAZCAZ 氨芐西林（AMAM 哌拉西林（PIPPIP）阿米卡星（ANAN 頭孢噻吩（CFCF 環(huán)丙沙星（CIPCIP）頭孢他定/ /克拉維酸（ CAZ/CACAZ/CA 哌拉西林/ /三唑巴坦（ PIP/TZPIP/TZ 羧芐青霉素（ CBCB 亞安培南 頭孢匹肟

33、（ FEPFEP 頭孢克羅（ CECCEC頭孢呋辛（ CXMCXM 頭孢噻肟 / / 棒酸（ CTX/CACTX/CA慶大霉素（ GMGM奧格門丁（ AMX/CAAMX/CA2 2、銅綠假單孢菌/ / 不動(dòng)桿菌妥布霉素（ TMTM阿米卡星（ ANAN安曲南（ AZTAZT頭孢哌酮（ CFPCFP哌拉西林（ PIPPIP頭孢匹肟頭孢噻肟（ CTXCTX環(huán)丙沙星（ CIPCIP頭孢他定（ CAZCAZ左旋氧氟沙星（ OFLOFL） 亞安培南哌拉西林 / / 三唑巴坦3 3、金黃色葡萄球菌苯唑西林（ OXOX） 青霉素 G G（ P P） 頭孢唑林（ CZCZ） 阿米卡星（ ANAN）紅霉素（E E

34、）頭孢噻肟（CTXCTX 環(huán)丙沙星（CIPCIP）頭孢噻吩（CF）萬(wàn)古霉素 奧格門?。?AMX/CAAMX/CA 哌拉西林/ /三唑巴坦4 4 、腸球菌氨芐西林（ AMAM）萬(wàn)古霉素環(huán)丙沙星（ CIPCIP）慶大霉素（ GMGM）紅霉素（ E E）氧氟沙星（ OFLOFL）5 5、除肺炎鏈球菌外鏈球菌氨芐西林（ AMAM）頭孢噻肟（ CTXCTX）萬(wàn)古霉素紅霉素（ E E）氧氟沙星（ OFLOFL） 克林霉素 （CMCM）肺炎克雷伯菌產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸桿菌 ESBLsESBLs 的檢測(cè)MHMH 培養(yǎng)基上貼頭孢他定，頭孢他定/ /克拉維酸，頭孢噻肟/ /棒酸，安 曲南。如頭孢他定的抑菌圈22mm

35、22mm 安曲南27mm27mm 頭孢噻肟27mm27mm 意味可 能有 ESBESBL L護(hù)生。如頭孢他定 / /克拉維酸與頭孢他定， 頭孢噻肟/ /棒酸與頭孢噻肟的差值5mr5mrp則確證 ESBLESBL 護(hù)生。耐藥機(jī)制 。一代頭孢對(duì)普通變形桿菌、枸櫞酸桿菌、腸球菌、假單孢菌屬、沙雷氏菌屬、擬桿菌屬無(wú)效。第二代頭孢對(duì)假單孢菌屬、不動(dòng)桿菌屬、沙雷氏菌屬、腸球菌無(wú)效；腸球菌對(duì)頭孢類天然耐藥。氨基糖甙類抗生素阿米卡星與慶大霉素不完全交叉耐藥。 紅霉素類、 四環(huán)素類等抗生 素內(nèi)部有相互交叉耐藥。金黃色葡萄球菌耐萬(wàn)古霉素、 無(wú)乳鏈球菌耐青霉素和氨芐青霉素、 無(wú) 乳鏈球菌和 D D 群鏈球菌耐萬(wàn)古霉

36、素和替拉考寧為不可能的表型。 洋蔥伯克霍德菌對(duì)氨基糖甙類、亞安培南天然耐藥。 除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外， 替拉考寧耐藥的凝固酶陰性的葡 萄球菌不常見。金黃色葡萄球菌對(duì)復(fù)方新諾明耐藥為罕見表型。 氨芐青霉素對(duì)非發(fā)酵類不宜應(yīng)用。對(duì)于葡萄球菌，苯唑西林耐藥，青霉素敏感是不可能的。NCCLNCCL 關(guān)于細(xì)菌藥敏實(shí)驗(yàn)的說(shuō)明總評(píng)論：1 1、頭孢噻吩可以代表頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢克洛、和頭孢羥氨芐。但是，頭孢唑林、頭孢呋辛、頭孢泊肟、 頭孢丙烯應(yīng)單獨(dú)測(cè)試， 因?yàn)槟承?duì)這些藥物敏感的菌株對(duì)頭孢噻吩是 耐藥的。2 2、利福平不能單獨(dú)用于化療。腸桿菌科1 1、 對(duì)于沙門菌屬和志賀菌屬只

37、有氨芐西林、喹諾酮、和甲氧芐啶 / / 磺胺甲惡唑可用于常規(guī)試驗(yàn)與報(bào)告。 初此之外， 對(duì)于沙門菌屬和志賀 菌屬的腸道外分離株，應(yīng)測(cè)試并報(bào)告氯霉素和一種三代頭孢菌素。2 2、 克雷伯菌屬和大腸艾希菌的產(chǎn) ESBLSESBLS 株對(duì)青霉素、頭孢菌素類或 安曲南臨床治療可顯耐藥性， 盡管在體外藥敏試驗(yàn)對(duì)其中某些抗生素 敏感。對(duì)于所有產(chǎn) ESBLSESBLS 株，應(yīng)報(bào)告為耐所有青霉素類、頭孢菌素及 安曲南。3 3、隨著 3 3 代頭孢菌素的治療，腸桿菌屬、枸櫞酸菌屬和沙雷菌屬可 發(fā)展其耐藥性。 最易敏感的菌株在開始治療 3-43-4 天就可變?yōu)槟退帲?因 此要反復(fù)測(cè)試這些菌株。葡萄球菌1 1、青霉素敏

38、感的葡萄球菌對(duì) FDAFDA 批準(zhǔn)的用于葡萄球菌感染的其他青霉素類、 頭孢菌素和碳青烯類也是敏感的。 青霉素耐藥而苯唑西林敏 感的菌株對(duì)（3 -內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定的青霉素是耐藥的，但對(duì)其他（3 -內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定的青霉素、3- -內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合藥、相關(guān)的頭孢類和 卡巴陪南是敏感的。苯唑西林耐藥的葡萄球菌對(duì)現(xiàn)在可用的所有3- - 內(nèi)酰胺類抗生素是耐藥的。 因此僅測(cè)試青霉素和苯唑西林就可以推知 一大批3- - 內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性與耐藥性，不必常規(guī)測(cè)試其他青 霉素類、3- -內(nèi)酰胺類抑制劑復(fù)合藥、頭孢類和卡巴陪南類。2 2、絕大多數(shù)的 MRSMRS 對(duì)多種抗生素耐藥。包括3- -內(nèi)酰胺類、氨基糖 甙

39、類、大環(huán)內(nèi)酯類、克林霉素和四環(huán)素。觀察到多重耐藥應(yīng)該是對(duì)甲 氧西林可能耐藥的線索。3 3、長(zhǎng)期應(yīng)用喹諾酮類治療的過(guò)程中葡萄球菌可發(fā)展其耐藥性，因此 應(yīng)重復(fù)測(cè)試耐藥性。腸球菌1 1、對(duì)于腸球菌屬， 頭孢菌素、 氨基糖甙類（除了篩選高水平耐藥性） 、 克林霉素和甲氧芐啶 / / 磺胺甲惡唑在體外可能有活性，但臨床無(wú)效， 因此不能報(bào)告細(xì)菌對(duì)這些藥物敏感。2 2、青霉素敏感性可以用于不產(chǎn)B- -內(nèi)酰胺酶的腸球菌對(duì)氨芐西林、阿莫西林、?；逼S西林、氨芐西林 / / 舒巴坦、阿莫西林 / / 克拉維酸、 哌拉西林以及哌拉西林 / /三唑巴坦的敏感性3 3、氨芐西林是氨芐西林和阿莫西林類的代表藥。氨芐西林的

40、結(jié)果可 用來(lái)判斷不產(chǎn)（3- -內(nèi)酰胺酶的腸球菌對(duì)阿莫西林/ /克拉維酸和氨芐西 林/ /舒巴坦的敏感性。4 4、青霉素的結(jié)果可預(yù)測(cè)不產(chǎn)3- -內(nèi)酰胺酶的腸球菌對(duì)氨芐西林、阿 莫西林、氨芐西林 / /舒巴坦、阿莫西林 / /克拉維酸、哌拉西林 / /三唑巴 坦的敏感性。5 5、 對(duì)于血和腦脊液分離株需用頭孢硝噻吩3- -內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)，陽(yáng)性 提示對(duì)青霉素耐藥，同時(shí)對(duì)酰胺基、羧基和脲基青霉素耐藥。 細(xì)菌鑒別要點(diǎn)：1 1、革蘭陽(yáng)性球菌所有革蘭陽(yáng)性球菌第一步為觸酶試驗(yàn)。通常觸酶陽(yáng)性為葡萄球菌和微球菌， 陰性為鏈球菌科。 但不排除 例外，氣球菌為弱陽(yáng)性。糞腸球菌偶有陽(yáng)性。操作觸酶試驗(yàn)應(yīng)盡量避 免用鉑金取菌

41、環(huán)（針）在 H H2O O2上涂菌，而應(yīng)先涂菌，在滴 H H2O O,步驟 不能顛倒。因?yàn)殂K金可以和 HCHC2產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。H H2O O2必須新鮮，若 放置過(guò)久或暴露于光線下容易分解，必須保存于 4 4C冰箱。實(shí)驗(yàn)所用 菌須大量，不可挑到瓊脂，會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性。對(duì)觸酶陽(yáng)性的革蘭陽(yáng)性球菌，應(yīng)繼續(xù)做玻片法血漿凝固酶試驗(yàn)， 此為檢出葡萄球菌， 如陽(yáng)性一般為金黃色葡萄球菌； 如陰性應(yīng)做試管 法凝固酶實(shí)驗(yàn)確證， 玻片法僅為篩選實(shí)驗(yàn)。 血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)用血漿須 用兔或豬血漿， 新鮮血漿不穩(wěn)定， 可能發(fā)生自我凝集或形成顆粒產(chǎn)生 渾濁或產(chǎn)生沉淀而導(dǎo)致判度錯(cuò)誤； 不可使用人血漿， 其含有抑制物質(zhì) 回干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果

42、。觸酶陰性為鏈球菌科，根據(jù)菌落溶血進(jìn)行下一步鑒定：a溶血：草綠色鏈球菌；肺炎鏈球菌；腸球菌B溶血：A A 群鏈球菌；B B 群鏈球菌，部分 D D 群鏈球菌 腸球菌也有不溶血菌落，不能根據(jù)溶血判斷腸球菌。 鏈球菌主要實(shí)驗(yàn)： 膽汁七葉苷，七葉苷，菊糖，CAMCAM，P P 桿菌肽，高鹽，奧樸托辛，膽鹽 溶解。腸球菌為致病菌， 且腸球菌與非腸球菌耐藥機(jī)制不同， 應(yīng)進(jìn)行鑒 別，腸球菌分為糞腸球菌和屎腸球菌； 非腸球菌分為牛鏈球菌和馬鏈 球菌。腸球菌對(duì)青霉素耐藥，非腸球菌對(duì)青霉素敏感。腸球菌的藥敏 注意咼耐氨基糖甙的細(xì)菌，如咼耐氨基糖甙則意味氨基糖甙與B內(nèi)酰胺類藥物合用無(wú)協(xié)同作用。肺炎鏈球菌與草綠色鏈

43、球菌鑒別：肺炎鏈球菌奧樸托辛、菊糖、膽鹽 溶解實(shí)驗(yàn)皆為陽(yáng)性。但這 3 3 個(gè)實(shí)驗(yàn)都非特異，需聯(lián)合應(yīng)用方為最佳。 肺炎鏈球菌的青霉素藥敏實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意，當(dāng)青霉素（K-BK-B 法）的抑菌圈 直徑大于或等于 19m19mm m寸為敏感，當(dāng)小于 19mm19mm 寸不能確定是否中敏或 耐藥，應(yīng)做 MICMIC 稀釋確證。2 2、革蘭陰性桿菌 包括腸桿菌科、非發(fā)酵菌和弧菌科。第一步實(shí)驗(yàn)為氧化酶實(shí)驗(yàn)。氧化酶陰性為腸桿菌科；陽(yáng)性為非發(fā)酵菌和弧菌科。 腸桿菌科包括大腸桿菌、變形桿菌、普羅菲登斯菌及摩根菌屬、克雷 伯菌屬、腸桿菌屬、多源菌屬、沙雷菌屬、耶爾森菌屬。非發(fā)酵菌包 括銅綠假單孢菌、黃單孢菌、不動(dòng)桿菌等。

44、氧化酶實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：需用銅綠假單孢菌做陽(yáng)性對(duì)照。6060 秒內(nèi)判讀結(jié)果有效，而以 1010 秒內(nèi)最佳。不要用含微量鐵的取菌環(huán)或針，可用棉棒替代。革蘭陰性桿菌的鑒定以 APIAPI 系列為國(guó)標(biāo)，其他生化管僅為常規(guī)鑒定。標(biāo)準(zhǔn)化的微生物采集方法（一）基本原則1 1 、發(fā)現(xiàn)感染應(yīng)及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查，二、三級(jí)醫(yī)院 微生物標(biāo)本送檢率不應(yīng)低于 70%70%。2 2、 盡量在抗菌藥物使用之前采集標(biāo)本。3 3、 標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，減少或避免機(jī)體正常菌群及其它雜 菌污染。4 4、 標(biāo)本采集后應(yīng)立即送至細(xì)菌室。床旁接種可提高病原菌檢出率。5 5、 以棉拭子采集的標(biāo)本如咽拭子、肛拭或傷口拭子，宜插

45、入運(yùn)送培 養(yǎng)基送檢。6 6、送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源和檢驗(yàn)?zāi)康模辜?xì)菌室能正確選用相應(yīng)的培養(yǎng)基和適宜的培養(yǎng)環(huán)境 （二）血液與骨髓的送檢方法1 1、通常采血部位為肘靜脈。疑似細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí)，以肘動(dòng)脈或股 動(dòng)脈采血為宜，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采取血標(biāo)本。2 2、采血部位的局部皮膚應(yīng)嚴(yán)格消毒。 將采集的血液注入血培養(yǎng)瓶前， 應(yīng)更換針頭或過(guò)火消毒針頭。3 3、每次采血量成人 5 510ml10ml，嬰幼兒 1 12ml2ml,培養(yǎng)基與血液之比以 1010：1 1 為宜，以稀釋血液中的抗生素。4 4、懷疑菌血癥因盡早采血,體溫上升階段采血可提高陽(yáng)性率,但要 防止因等待而延誤時(shí)機(jī)。 對(duì)已用抗菌藥物而不能停

46、藥者, 可在下次用 藥前采血。5 5、對(duì)疑為細(xì)菌性骨髓炎或傷寒病人,在病灶或髂前（后）上棘處嚴(yán) 格消毒后抽取骨髓 1ml1ml 作細(xì)菌培養(yǎng)。（三）尿液的送檢方法1 1 、中段尿：女性采樣前應(yīng)先用肥皂水或 0.1%0.1%高錳酸鉀溶液沖洗外陰 部及尿道口；男性須翻轉(zhuǎn)包皮沖洗,用 0.1%0.1%新潔爾滅消毒尿道口, 滅菌紗布擦干后,收集標(biāo)本。2 2、導(dǎo)尿管導(dǎo)尿采樣可減少污染。對(duì)留置導(dǎo)尿者,可用碘酒消毒尿道 口處的導(dǎo)尿管壁, 用聯(lián)空針筒的細(xì)針斜穿管壁抽吸尿液；或拔去閉式 引流的集尿袋, 棄取導(dǎo)尿管前段尿液, 留無(wú)污染的膀胱內(nèi)尿液數(shù)毫升 送檢。不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本。3 3、送檢標(biāo)本以晨起第

47、一次尿?yàn)橐恕? 4、室溫下尿標(biāo)本擔(dān)擱稍久可導(dǎo)致尿內(nèi)細(xì)菌濃度明顯增加而影響病原 菌與污染菌的區(qū)分。不能立即送檢者，可暫存 4 4C冰箱。（四） 痰標(biāo)本的送檢方法1 1、咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳痰，從呼吸道深部咳出新鮮痰液于 無(wú)菌容器送檢。痰量極少者可用 4545C1010 ?；c溶液霧化吸入導(dǎo)痰。2 2、 對(duì)咳嗽乏力或昏迷病人， 可用吸痰管經(jīng)鼻腔或口抵達(dá)氣管腔內(nèi) 吸 引痰液。用纖維支氣管鏡可直接在病灶部位采集高濃度的感染病原 菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。3 3、 雙側(cè)肺部感染伴人工氣道如氣管切開或氣管插管患者，可用吸痰 管經(jīng)人工氣道估插至葉支氣管水平吸引痰液。4 4、 痰標(biāo)本不能及時(shí)

48、送檢者，可暫存 4 4C冰箱。室溫下?lián)鷶R數(shù)小時(shí)定 植于口咽部的非致病菌呈過(guò)度生長(zhǎng)而肺炎鏈球菌、 葡萄球菌和流感嗜 血桿菌檢出率明顯降低（五） 手術(shù)創(chuàng)口、燒傷創(chuàng)面于膿液1 1、無(wú)菌生理鹽水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的膿液和 分秘物，置運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。2 2、對(duì)未潰瘍的膿腫宜用碘酒、 酒精消毒皮膚后， 以無(wú)菌注射器抽取 膿液送檢；也可于切開膿腫時(shí)用無(wú)菌棉拭子采樣。3 3、采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。（六） 糞便的送檢方法1 1、排便后，挑取有膿血、黏液部分的糞便 2 23g3g （液狀糞便則取絮狀物），盛于蠟紙袋內(nèi)送檢。2 2、對(duì)不易獲取糞便者或嬰幼兒，可用肛拭采集。將拭子

49、前端用無(wú)菌 甘油水濕潤(rùn)。然后插入肛門約 4 45cm5cm （幼兒約23cm3cm）處，輕輕旋 轉(zhuǎn)擦取直腸表面黏液后退出，置運(yùn)送普及內(nèi)送檢。（七）咽拭、口腔拭子的送檢1 1、病人清水漱口后，由檢查者將其舌外拉時(shí)懸幽垂盡可能向外牽 引，棉拭子越過(guò)舌根到咽后壁或懸幽垂的后側(cè)，反復(fù)擦拭數(shù)次，插入 運(yùn)送培養(yǎng)基。棉拭子應(yīng)避免觸及舌、口腔黏膜和唾液。對(duì)化膿性扁桃體炎或口腔念珠菌病，用棉拭 臨床標(biāo)本的處理1 1、血標(biāo)本1.11.1 常見細(xì)菌 革蘭陽(yáng)性菌：肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、 表皮葡萄球菌、溶血 性 鏈球菌、糞腸球菌、類白喉棒狀桿菌、產(chǎn)單核李斯特菌等。革蘭陰性菌：腦膜炎奈瑟菌、卡他布蘭漢菌、傷寒沙門菌

50、、流感嗜血 桿菌、大腸艾希菌、變形桿菌、產(chǎn)汽腸桿菌、銅綠假單孢菌、肺炎克 雷伯菌等。1.21.2 臨床意義 血液培養(yǎng)應(yīng)用于傷寒、 副傷寒、 化膿性細(xì)菌和其他革蘭陰性桿菌引起 的敗血癥的診斷。目前引起敗血癥的細(xì)菌多為金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌。 疥、癰和膿腫繼發(fā)的敗血癥主要是金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌引 尿道、膽、胃腸黏膜損傷引起的敗血癥以大腸埃希菌多見，其次為變 形桿菌、產(chǎn)汽腸桿菌、葡萄球菌。 急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎以金黃色葡萄球菌、 溶血性鏈球菌、 腦膜炎奈瑟 菌常見；亞急性心內(nèi)膜炎以草綠色鏈球菌多見，偶見腸球菌；化膿性 心包炎以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌多見。 血液病、肝硬化引

51、起的敗血癥金黃色葡萄球菌和銅綠假單孢菌為主。 彌漫性血管內(nèi)凝血以革蘭陰性桿菌為主。 燒傷后敗血癥以銅綠假單孢菌為主。3 3、痰標(biāo)本常見細(xì)菌： 肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、結(jié)核分 枝桿菌；腦膜炎奈瑟菌、 卡他布蘭漢菌、 肺炎克雷伯菌、 大腸艾希菌、 銅綠假單孢菌、沙雷菌、流感嗜血桿菌。痰標(biāo)本：須接種 2 2 個(gè)血平板, ,一個(gè)放普通孵箱，另一個(gè)放 COCO 孵箱. .痰標(biāo) 本接種于血平板、麥康凱平板、巧克力平板。巧克力平板是用來(lái)篩選 流感嗜血桿菌。肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌的檢出率是衡量一個(gè)細(xì)菌 室水平的重要依據(jù)， 因此對(duì)于包括以上兩種菌在內(nèi)的苛養(yǎng)菌的鑒定應(yīng) 引起重視。痰標(biāo)本接種時(shí)，

52、第一區(qū)劃完線后，接種環(huán)必須過(guò)火消毒， 否則將達(dá)不到分區(qū)的效果。痰標(biāo)本建議接種 2 2 個(gè)血平板、一個(gè)巧克力平板、 一個(gè)麥康凱平板。 痰 標(biāo)本于咽標(biāo)本的處理基本相同。4 4、尿標(biāo)本常見細(xì)菌：大腸艾希菌、葡萄球菌、變形桿菌 注意事項(xiàng)：尿標(biāo)本不能離心，離心將使污染菌也集中于沉淀部分，導(dǎo) 致錯(cuò)誤結(jié)果。一般而言，菌落大于105/ml105/ml 代表真正感染， 103/ml103/ml 以 下表示污染，104104105/ml105/ml 為懷疑污染，如病人的排尿速度太快或接 受藥物治療或尿的 pHpH 小于 5.05.0，比重小于 1.001.003 3時(shí)，細(xì)菌的數(shù)目可 能降低。因此病人若已服用抗生素

53、， 104/ml104/ml 菌落即需進(jìn)行鑒定和抗 生素藥敏試驗(yàn)。加強(qiáng)微生物實(shí)驗(yàn)室與臨床科室的聯(lián)系、密切合作，確保標(biāo)本的質(zhì)量： 微生物學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)本大多數(shù)都是由臨床科室有關(guān)人員或患者 留取的，而留取的標(biāo)本的質(zhì)量是否符合要求就是一個(gè)非常重要的問(wèn) 題，因此要與臨床合作，確保標(biāo)本的質(zhì)量，主要有以下幾個(gè)方面：1、血液（骨髓）標(biāo)本的留取1）應(yīng)在給患者使用抗菌藥物之前留取標(biāo)本。2）應(yīng)在患者發(fā)熱初起或發(fā)熱高峰時(shí)留取。3）應(yīng)盡量留取兩次標(biāo)本。4）留取標(biāo)本時(shí)應(yīng)盡量避免污染，如有可能污染時(shí)應(yīng)注明。5）如考慮有厭氧菌感染時(shí)應(yīng)同時(shí)作需氧菌及厭氧菌培養(yǎng)。6）如已給予患者抗菌藥物治療則應(yīng)使用樹脂培養(yǎng)瓶并在給藥之前留取。7）兒童患者則應(yīng)使用兒童培養(yǎng)瓶。8）如考慮有 L L 型菌感染的可能則應(yīng)使用 L L 型培養(yǎng)瓶。2、下呼吸道分泌物標(biāo)本的留取1）清晨留取。2）留取前用清水漱口三次。3）囑患者用力咳出。4）如患者做纖維支氣管鏡檢查則可同時(shí)抽取分泌物。5）昏迷患者可作氣管穿刺吸取。3、 尿液標(biāo)本的留取1）留取清晨第一次尿液。2）留取中段尿，女性患者則應(yīng)清洗會(huì)陰部后留取中段尿。3）必要時(shí)可導(dǎo)尿留取標(biāo)本。4）不應(yīng)從留置導(dǎo)尿管