犬貓皮膚病中最常見病原菌---白色念珠菌

1、1 前言白色念珠菌是犬貓皮膚病中最常見病原菌之一, 其治療方法目前主要是采用抗菌素進(jìn)行。但這些抗菌素除了少數(shù)幾種外, 大多數(shù)很快就有抗藥性菌株產(chǎn)生, 給臨床治療造成極大的困擾, 中國(guó)是中草藥的故鄉(xiāng), 采用中草藥防治人畜皮膚疾病有著悠久的歷史, 中草藥和藥用植物資源十分豐富。所以我們?cè)O(shè)想利用中草藥防治寵物的皮膚病, 也為寵物疾病防治開辟另一個(gè)用藥途徑提供依據(jù)而且用中草藥治療有著其他化學(xué)藥物不可替代的優(yōu)點(diǎn), 某些中草藥可以從根本上治愈皮膚病, 而且中草藥還有資源豐富、價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)。所以本試驗(yàn)研究旨在嘗試開發(fā)另一獸醫(yī)藥物領(lǐng)域, 充分利用藥用植物資源, 篩選數(shù)種高效無害、無毒副作用、無耐藥性的藥用植

2、物, 用于治療犬貓皮膚疾病, 由于受時(shí)間和環(huán)境條件限制 , 本試驗(yàn)只能在實(shí)習(xí)的寵物醫(yī)院所在地和附近地區(qū)野生的幾種藥用植物對(duì)在寵物醫(yī)院門診和住院的病畜身上分離并培養(yǎng)得到的的白色念珠菌進(jìn)行抑菌效能試驗(yàn)和皮膚病治療試驗(yàn)。2 試驗(yàn)材料2.1 試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物采用萊陽寵物醫(yī)院門診和住院的病畜, 有斗牛犬、波斯貓和一些患皮膚病的門診寵物病例。2.2 菌株本試驗(yàn)所使用的菌株：白色念珠菌( Candida albicans, 編號(hào)為 a-7504 ) 。這些菌株均由萊陽寵物醫(yī)院病畜身上分離而來。經(jīng)萊陽農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室鑒定確認(rèn)。2.3 培養(yǎng)基本試驗(yàn)所需要的瓊脂平皿培養(yǎng)基為市售沙保弱(沙泊氏)的真菌

3、培養(yǎng)基Sabourauds dextrose agar (SDA ,其主要成分為瓊脂 ( 寒天 ) 、胨、葡萄糖、酵母、硫酸鎂、磷酸鉀等。2.4 藥用植物供試品的制備供試的10 種藥用植物均為不同地方購買的鮮品和干品。丁香因?yàn)楹瑩]發(fā)油較多 , 故采用揮發(fā)油提取和煎劑制備兩個(gè)步驟, 供試時(shí)采用揮發(fā)油、煎劑、揮發(fā)油和煎劑合并液三種形式。羊蹄、蘆套和鳳仙因?yàn)榕R床上習(xí)慣用鮮品, 所以這里也采取鮮品和煎劑兩種形式, 其他各藥均用三次煎劑的合并液濃縮為每毫升含生藥 1 克用高壓滅菌12015 分鐘備用。2.5 白色念珠菌鏡檢刮取病畜搔癢部位的皮膚皮屑, 在低倍顯微鏡下鏡檢, 當(dāng)看到白色念珠茵茵落呈黃白色奶

4、油狀的念珠茵茵落時(shí), 可確定為白色念珠菌引起的皮膚病。表1 10 種藥用植物科屬和學(xué)名植物(生藥 )別名科屬植物學(xué)名稱丁香紫丁香桃金科EugeniaCaryophyllata Thunb 羊蹄土大黃寥科Rrmex japonicus Houtt 蘆薈真蘆薈百合科 Alosvera L var.chinerIsis(Haw) Berg 鳳仙指甲花鳳仙科Impatiensbalsamina L 艾葉艾蓬菊科Artemisia argyi levl.et.vant 地膚子帚草黎科Kochia scoparia(L.)Schrad棍子黃校子茜草科Gardenia jasminodes Eillis蓓草

5、五爪龍桑科Humulus scandens(lour)Merr 魚腥草豬耳朵三白草科HouttuyIlia cozdata Tjumb千里光九里明豆科Lespedezacuneata(Dum.couns)G.Don 3 試驗(yàn)方法3.1 藥敏試驗(yàn)方法3.1.1 菌懸液的配置先將上述菌種根據(jù)該菌株的習(xí)性采用試管斜面培養(yǎng)基進(jìn)行27一星期的培養(yǎng),經(jīng)檢確認(rèn)后用滅菌生理鹽水調(diào)制成100CCFU (Colong forming runit/ml, 菌落形成單位 )供試。 3.1.2 平皿打孔藥用植物對(duì)不同菌株的藥敏試驗(yàn)采用常規(guī)體外藥敏試驗(yàn)即平皿打孔法，先將供試菌液均勻涂布在 SDA培養(yǎng)基表面，再用瓊 脂打孔

6、器(直徑6mm在平板上打孔、封底。3.1.3加樣采用微量加樣器分別吸 取供試藥用植物液加入各孔, 每孔均為50 微升。 3.1.4 植物的藥敏試驗(yàn)按常規(guī)藥敏紙片法測(cè)定，即取直徑6mmX菌濾紙分別浸入各種試驗(yàn)藥液中 40分鐘后取出備用 , 供試時(shí)放入己備好的抑菌平皿中。3.1.5 細(xì)菌培養(yǎng)根據(jù)白色念珠菌的習(xí)性把PH值調(diào)至5.6,在27c的條件下恒溫培養(yǎng)7天。3.1.6判定 按藥用植 物抑菌圈的標(biāo)準(zhǔn)量取抑菌圈直徑，即菌圈直徑在10mmz下者為耐藥，用" +”表 示,1015mm為中敏，用"+" 表示,16mm以上者為高敏，用“ +”表示。3.2治療用藥液的配制方法3.

7、2.1 外浴藥液置備與用法將丁香、羊蹄、地膚子、千里光按 1:1.2:1.2:1.5 的比例 , 配成外浴液的基礎(chǔ)液, 配制方法為取上述4種中草藥不同的劑型進(jìn)行配制。具體配制過程為取丁香的揮發(fā)油與煎劑合并液, 加上羊蹄鮮品與煎劑的合并液、地膚子煎劑和千里光煎劑，再加入鹽1020克備用。外浴時(shí), 取外浴基礎(chǔ)液兌等量的溫開水即成50%的濃度的外浴液, 將病畜泡入配制好的外浴液浴盆中, 外浴液用量要求能淹沒患畜的脖子, 讓其浸泡, 頭部可適當(dāng)滔些浴液淋澆沖洗, 每天不少于兩次，一次約半小時(shí), 連續(xù) 5 天。 3.2.2內(nèi)服藥液置備與用法將魚腥草、梳子、艾葉、千里光按1:1.2:0.5:0.8 的比例

8、 , 煮半個(gè)小時(shí)到一個(gè)小時(shí), 煎成 1:1 的濃度備用。內(nèi)服時(shí), 把己配制好的內(nèi)服藥液按 2ml/kg 體重的用量?jī)?nèi)服, 一天服 l 次 , 連續(xù) 5-7 天。 3.3 病菌觀察與療效判定白色念珠菌是一種對(duì)皮膚危害很大的病原菌, 它會(huì)使皮膚產(chǎn)生紅腫、紅點(diǎn)、發(fā)癢 , 使粘膜發(fā)紅, 水腫 , 有白色凝乳塊或片狀膜樣附著, 易剝落有瘙癢感，產(chǎn)生糜爛或淺潰瘍。白色念珠菌引起的皮膚病的臨床癥狀, 可以看到病畜的被毛不整潔 , 粗亂且無光澤, 精神煩燥, 食欲不振, 不時(shí)搔動(dòng), 用牙爪扒抓和嘴舌舔咬身體皮毛 , 或在墻壁柱子、樹樁等硬物上摩擦, 身體皮毛脫落, 皮膚毛屑和分泌物較多。用刀片刮取患畜搔癢部位

9、的皮膚, 將皮屑置于低倍顯微鏡下觀察致病的白色念珠菌 , 若是白色念珠菌為患, 在顯微鏡的視野中可以看到黃白色奶油狀的念珠菌菌落。療效判定可從顯微鏡鏡檢和臨床癥狀表現(xiàn)進(jìn)行綜合判定。4 結(jié)果與分析4.1藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析4.1.1 白色念珠菌的培養(yǎng)與鑒定將采取的白色念珠菌標(biāo)本直接接種在沙保弱(沙伯氏)培養(yǎng)劑上ph 值調(diào)節(jié)到5.6，培養(yǎng)溫度為27度，恒溫培養(yǎng)7 天。念珠菌的菌落呈黃白色奶油狀, 之后將標(biāo)本接種到血液瓊脂培養(yǎng)劑上鑒定。根據(jù)菌落得形態(tài)在corn meal 培養(yǎng)劑上觀察厚膜袍子形成或接種在血液瓊脂培養(yǎng)劑上觀察真菌的發(fā)芽情況確定它為白色念珠菌。4.1.2 幾種中草藥對(duì)白色念珠菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)

10、果從上述藥敏試驗(yàn)結(jié)果可見, 試驗(yàn)菌株對(duì)各種藥用植物提取物都有不同程度的敏感, 其感受性如表2 所示 , 從表中可見丁香對(duì)白色念珠菌抑菌效果最好,抑菌圈達(dá)2Omm次為千里光、羊蹄、魚腥草,抑菌圈達(dá) 10mmz上，而鳳仙、艾葉、地膚、產(chǎn)薈和蓿綠效果較差,抑菌圈在10mm以下。項(xiàng)目丁香羊蹄蘆薈鳳仙艾葉地膚梳子蓓草魚腥草千里光不同劑型的抑菌強(qiáng)度揮發(fā)油15鮮品15610煎劑 11124888851010合并液 20注釋: 合并液即為揮發(fā)油與煎劑各占50% 的合并液表3 10 種藥用植物對(duì)白色念珠菌(CandidaAlbiearls) 的抑菌強(qiáng)度比較項(xiàng)目丁香羊蹄蘆蕓鳳仙艾葉地膚梳子蓓草魚腥草千里光不同劑型

11、的抑菌強(qiáng)度揮發(fā)油+鮮品+煎劑+合并液+這些藥用植物對(duì)白色念珠菌病原菌有不同程度的抑菌作用, 其中丁香、羊蹄、梳子不但對(duì)白色念珠菌有抑制作用, 而且抑菌作用較強(qiáng)。試驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了藥用植物提取方法的不同, 抑菌效果也不相同，以丁香和蘆薈為例, 丁香含揮發(fā)油成分較多, 雖然單純用丁香揮發(fā)油或單純用煎劑均有抑菌作用，抑菌效果不如揮發(fā)油和煎劑合并提取液。蘆薈含蒽醌類衍化物, 生用抑菌效果較好, 高溫提取后抑菌作用減弱或幾乎無抑菌效果。丁香對(duì)白色念珠菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果為高敏 , 用 "+" 表示 , 其次為千里光、羊蹄和魚腥草, 對(duì)白色念珠菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果均為中敏, 用 "+&

12、quot; 表示。 4.2 中草藥對(duì)白色念珠菌皮膚病治療試驗(yàn)結(jié)果白色念珠菌是一種對(duì)皮膚危害很大的病原菌, 它會(huì)使皮膚產(chǎn)生紅腫、紅點(diǎn)、發(fā)癢使粘膜發(fā)紅, 水腫 , 有白色凝乳塊或片狀膜樣附著, 易剝落有瘙癢感，產(chǎn)生糜爛或淺潰瘍。臨床上的常規(guī)治療為采用制酶菌素, 氟康唑 , 伊曲康唑內(nèi)服和外用兼治 , 或注射害獲滅, 但以上治療極易復(fù)發(fā)。所以本試驗(yàn)采用中西藥結(jié)合治療, 療效勝于單純用西藥, 現(xiàn)例舉臨床上兩個(gè)典型病例以說明中草藥對(duì)白色念珠菌引起的皮膚病的療效。4.2.1 病例 1 5 月 2日 , 臨床收治斗牛犬l 頭 , 畜主主訴 , 該犬從十幾天前開始, 顏面和脖子上沉色并腫脹, 經(jīng)常用后腿去抓癢

13、, 而且食欲比以前大大減少, 臨床就診時(shí)對(duì)該斗牛進(jìn)行觀察, 患畜體重約20 公斤 , 體況營(yíng)養(yǎng)狀況尚好 , 精神沉郁, 個(gè)體消瘦 , 被毛粗亂無光、皮膚沒彈性。食欲不振, 從顏面及背上可見 , 皮膚粘膜發(fā)紅, 水腫 , 有白色凝塊狀, 也有一些部位有塊狀膜樣附著, 該犬不時(shí)的用后腿去抓, 有一些部位毛已經(jīng)抓破感染, 出現(xiàn)糜爛和淺潰瘍, 并散出腥臭味 , 刮取該犬身上患處的皮膚屑在顯微鏡下可看到皮膚屑上有明顯的黃色奶油狀菌落 , 由此確定該犬患的皮膚病是黃白色念珠菌引起的皮膚病, 針對(duì)該癥狀, 對(duì)該犬進(jìn)行內(nèi)服與外浴兼用的治療，并輔以維生素C和維生素E。即制備丁香、羊蹄、地膚子、千里光外浴液, 再

14、加入鹽15 克 , 兌上等量的溫開水成為50%的濃度的外浴液, 將病畜泡入盛有外浴液的浴盆中, 讓其浸泡 , 畜主配合用手和刷子對(duì)患畜頭部和全身進(jìn)行沖洗, 每天兩次、一次約半小時(shí), 連續(xù) 5 天 , 并且口服魚腥草、梳子、艾葉、千里光煎劑, 按 2ml/kg 體重的用量?jī)?nèi)服, 一天服 1 次 , 每次40ml, 連續(xù) 7 天。第 6 天該畜主將患畜帶來復(fù)診, 該犬精神己明顯好轉(zhuǎn), 表現(xiàn)靈活,反映敏銳。被毛較為平順整潔, 皮膚紅點(diǎn)大面積減少, 皮膚上的糜爛與淺潰瘍已明顯好轉(zhuǎn), 刮取病犬身上的結(jié)痂皮膚屑鏡檢, 顯微鏡視野下看不到白色念珠菌的黃白色奶油狀菌落。10 天后復(fù)診己經(jīng)痊愈。4.2.2 病例

15、 2 5 月 25 日 , 臨床收治波斯貓 1 頭 , 畜主主訴, 該貓近幾天背上、脖子上出現(xiàn)紅點(diǎn), 腫脹 , 經(jīng)常用爪子去身上亂抓, 而且食欲不振, 經(jīng)常嚎叫 , 叫聲凄涼。臨床就診時(shí)對(duì)該貓進(jìn)行觀察, 該貓精神沉郁, 消瘦被毛亂, 從背上可見皮膚粘膜發(fā)紅, 水腫 , 有白色凝乳塊有一些部位有塊狀膜樣附著, 該貓不時(shí)用爪子去抓, 有一些部位因抓破皮, 可見感染糜爛 , 刮取該貓身上患處的皮膚屑在顯微鏡下可以看到皮膚屑上有明顯的黃白色奶油狀菌落。由此可確定該貓所患皮膚病是由念珠菌引起的皮膚病。針對(duì)該貓所有的癥狀進(jìn)行內(nèi)服與外浴雙重的治療，并配以維生素C與維生素E輔助治療。將病貓泡入盛有外浴液浴盆中

16、，每天兩次、一次約半小時(shí), 連續(xù) 5 天 , 并且口服魚腥草、板子、艾葉、千里光煎劑, 按 2ml/kg 體重的用量?jī)?nèi)服, 一天服 1 次 ,每次 lOml, 連續(xù) 7 天。一個(gè)星期以后該畜主帶它回來復(fù)診。畜主稱該貓食欲已大大增加, 不會(huì)再用爪子去身上亂抓, 也不會(huì)再嚎叫, 復(fù)診時(shí)可以看到該貓精神己明顯好轉(zhuǎn), 表現(xiàn)靈活, 眼睛明亮, 被毛已轉(zhuǎn)為平順、整潔。膚上的紅色點(diǎn)己消失，皮膚上的糜爛與淺潰瘍已明顯好轉(zhuǎn), 刮取病貓身上的皮膚屑去做鏡檢, 沒看到白色念珠菌的黃白色奶油狀菌落，說明己經(jīng)痊愈。5 討論與體會(huì)5.1 小動(dòng)物的皮膚病常規(guī)西藥用藥利弊分析當(dāng)今小動(dòng)物的皮膚病有許多種, 發(fā)病也由多種原因引起

17、 , 臨床上常見的有由螨蟲引起的皮膚病、真菌引起的皮膚病，還有一種是由螨蟲與真菌混合感染引起的皮膚病。除此之外, 不良的生活習(xí)慣也能誘發(fā)皮膚病,眾所周知狗的汗腺極不發(fā)達(dá)，然而如果狗吃的食物過咸, 體內(nèi)的 Nacl 不能及時(shí)排出體外, 也能導(dǎo)致皮膚病發(fā)生。此外, 缺少曬太陽, 引起維生素缺乏也可能引起皮膚病 , 所以在臨床上都得隨證求因, 采取不同的治則和方藥進(jìn)行治療。目前臨床上對(duì)于各種病因感染引起的皮膚病用的最多的是使用德國(guó)拜耳公司生產(chǎn)的害獲滅 , 常規(guī)用法是采用0.51ml/ kg 體重左右治療效果較好, 大多病例經(jīng)一兩天治療可望痊愈, 或可以同時(shí)使用土霉素效果更佳。由于不良生活習(xí)慣引起的皮

18、膚病 , 則讓其改變不良的生活習(xí)慣, 在改變不良生活習(xí)慣的同時(shí)給予補(bǔ)充維生素E。皮膚病雖不像烈性傳染病犬瘟熱、細(xì)小病毒危害那么大，卻不容忽視，它不但會(huì)影響病畜的外貌, 引起病畜的脫毛, 皮膚無光澤, 出現(xiàn)紅腫, 奇癢難忍, 引起皮膚潰爛 , 甚至產(chǎn)生繼發(fā)性感染, 繼而引起敗血癥等一系列嚴(yán)重的后果, 如果是由于感染病原菌引起的皮膚病, 不及時(shí)治療還會(huì)引起一系列的人畜共患病, 對(duì)于感染的皮膚病, 雖然用害獲滅和土霉素可以治療, 但是容易復(fù)發(fā), 而且其價(jià)格也比較昂貴 , 成本較貴, 一瓶 150ml 的害獲滅市價(jià)300 元左右。 5.2 中草藥防治小動(dòng)物的皮膚病的優(yōu)勢(shì)和缺陷分析中草藥對(duì)白色念珠菌的抑

19、菌作用和治療效果可從上述試驗(yàn)結(jié)果體現(xiàn)出來。這些藥用植物的藥用資源十分豐富, 便宜易得, 針對(duì)近年來犬貓皮膚病泛濫, 抗菌素易產(chǎn)生耐藥性的狀況, 本試驗(yàn)似乎能為寵物皮膚病防治開辟另一個(gè)用藥途徑提供了依據(jù)。然而中草藥的缺陷在于用量較大, 劑型較簡(jiǎn)單和不規(guī)范, 并且也受地方限制, 而且是也受傳統(tǒng)觀念的約束, 多數(shù)畜主嫌麻煩,不愿意去采集或煎藥, 許多人不認(rèn)識(shí)中草藥, 所以也限制了中草藥的應(yīng)用和推廣。 5.3 中草藥防治小動(dòng)物的皮膚病的作用原理從上述的抑菌作用和治療效果可體現(xiàn)出中草藥對(duì)致病性皮膚真菌和細(xì)菌有很好的療效。外浴的作用原理是對(duì)這些細(xì)菌有直接的抑制和殺菌作用, 而內(nèi)服的作用原理是這些中草藥也是

20、一些免疫調(diào)節(jié)劑, 它能使機(jī)體免疫功能低下者恢復(fù)正常, 并能增強(qiáng)正常機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫功能。其作用機(jī)理是許多中草藥本身就是一種免疫活性物質(zhì)。能提高兔疫原性能, 如所含的多糖與皂甙是重要的免疫活性成分, 都具有增強(qiáng)機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能, 并能促進(jìn)抗體的形成, 促進(jìn)抗原抗體反應(yīng)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率等功能。據(jù)報(bào)道, 魚腥草能促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng), 增強(qiáng)細(xì)胞吞噬力；還能提高T淋巴細(xì)胞功能,使細(xì)胞內(nèi)CAMP含量增加，溶血素和溶血空斑值升高，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。5.4 中西藥結(jié)合防治小動(dòng)物的皮膚病的發(fā)展趨勢(shì)近年來隨著人民生活水平的提高，寵物業(yè)也迅速發(fā)展，然而小動(dòng)物中也不斷出現(xiàn)一些新的疾病，給臨床治療造

21、成了新的困難，由于西藥的毒副作用、抗藥性和藥物殘留等弊端，以小動(dòng)物皮膚病為例，在藥物預(yù)防過程中，中藥已經(jīng)顯示其優(yōu)勢(shì)，從以上試驗(yàn)結(jié)果中可見中草藥的抑菌效果和免疫作用，雖然中草藥還存在著劑型過于簡(jiǎn)單粗糙、用量較大、使用麻煩等不足之處，但從我國(guó)經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益上看，中藥已經(jīng)顯示出其不凡的應(yīng)用價(jià)值，特別值得慶幸的是我國(guó)的中草藥資源豐富，幾乎到處都是，所以更應(yīng)該進(jìn)行深入的研究，充分利用豐富的自然資源，充分挖掘其不凡的藥用潛力，研制更多的高檔次的中草藥精品，使其在動(dòng)物疾病防治中發(fā)揮更大的作用，從上述的試驗(yàn)研究可以看到，中西藥結(jié)合防治小動(dòng)物疾病是將來發(fā)展的趨勢(shì)。參考文獻(xiàn)李十中, 五淀佐 , 李曉巖 . 2001.中藥研究與