植物組織培養(yǎng)技術(shù)考試要點(diǎn)

1、名詞解釋 植物組織培養(yǎng)： 是指植物的任何器官、 組織或細(xì)胞， 在人工預(yù)知的控制條件下， 放在含 有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)等的培養(yǎng)基中，使其生長(zhǎng)、分化，形成完整植株的過(guò)程。培養(yǎng)基： 是離體植物（外植體）賴以生長(zhǎng)、分化的基礎(chǔ)，是根據(jù)植物的需求，人工配制 的含有各種營(yíng)養(yǎng)成分的營(yíng)養(yǎng)液。污染： 在組織培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。 褐變：在組培過(guò)程中， 由培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)， 致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色， 培養(yǎng)材料也隨之慢慢而死亡的現(xiàn)象。玻璃化： 當(dāng)植物材料進(jìn)行離體繁殖時(shí)， 有些培養(yǎng)物的嫩莖、 葉片往往會(huì)出現(xiàn)半透明狀和 水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。脫分化： 已有特定

2、結(jié)構(gòu)與功能的植物組織， 在一定的條件下， 細(xì)胞改變?cè)瓉?lái)的分化狀態(tài)， 失去原來(lái)的結(jié)構(gòu)和功能，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹稚芰Φ募?xì)胞，這個(gè)過(guò)程稱為脫分化。再分化： 在愈傷組織生長(zhǎng)到一定階段后即可通過(guò)更換培養(yǎng)基或改變培養(yǎng)條件， 誘導(dǎo)促使 其中的“芽點(diǎn)”或“原始胚狀體”逐漸發(fā)育成一個(gè)幼小的植物體，這一過(guò)程就叫做再分化。愈傷組織： 植物各種器官的外植體在離體的條件下， 細(xì)胞經(jīng)脫分化等一系列過(guò)程， 轉(zhuǎn)變 為分化細(xì)胞，繼而轉(zhuǎn)變形成一種能迅速增殖的無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞團(tuán)，稱為愈傷組織。馴化： 開(kāi)始繼代培養(yǎng)要加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)， 其后加入少量或不加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)就可以 生長(zhǎng)，這種現(xiàn)象稱為“馴化” 。種質(zhì) ：親代通過(guò)生殖細(xì)胞或

3、體細(xì)胞傳遞給子代的遺傳物質(zhì)。植物種質(zhì)保存 ：利用天然或人工創(chuàng)造的適宜環(huán)境， 使個(gè)體中含有的遺傳物質(zhì)保持其遺傳 完整性，有高的活力，能通過(guò)繁殖將其遺傳特性傳遞下去。常溫保存 ：在常溫（ 20± 5）OC 條件下，通過(guò)改變培養(yǎng)基中某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度，改變 培養(yǎng)的環(huán)境條件，可達(dá)到種質(zhì)保存的目的。低溫保存 ：低溫保存也稱為緩慢生長(zhǎng)保存， 是通過(guò)改變培養(yǎng)基和環(huán)境條件使培養(yǎng)基的生 長(zhǎng)降到最低限度，又不致死亡，以達(dá)到延長(zhǎng)保存時(shí)間的目的。超低溫保存 ：也稱為冷凍保存， 主要是指在液氮的超低溫下使細(xì)胞代謝和生長(zhǎng)處于基本 停止的狀態(tài)，在適宜的條件下細(xì)胞可迅速繁殖，再生出新的植株，并保持原來(lái)的遺傳特性。1

4、、簡(jiǎn)述植物組織培養(yǎng)技術(shù)的主要特點(diǎn)。（1）基礎(chǔ)理論 植物組培的基礎(chǔ)理論是植物細(xì)胞全能性的理論， 即每個(gè)細(xì)胞都擁有該物種的 所有遺傳信息， 并在條件適合的情況下能夠發(fā)揮該物種的各種功能和具有發(fā)育成為一個(gè)正常 和完整的獨(dú)立個(gè)體的能力。（2）技術(shù)特點(diǎn) 無(wú)菌培養(yǎng)和外植體培養(yǎng)（3）生產(chǎn)特點(diǎn) 不占用耕地，生產(chǎn)不受季節(jié)控制 周年連續(xù)生產(chǎn)，不受災(zāi)害天氣和病蟲 害限制 生長(zhǎng)環(huán)境可人工控制并人為創(chuàng)造2、植物組培的意義和作用主要有哪些？（1）培育新品種的有效手段（2）種質(zhì)資源保存的有效方法（3）去除病毒、真菌和細(xì)菌等病害和無(wú)性系的快速繁殖（4）促進(jìn)有機(jī)物的生產(chǎn)和生理學(xué)的研究3、簡(jiǎn)述通用實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)成和用途。 此區(qū)包括藥

5、品儲(chǔ)存室、洗滌室、培養(yǎng)基配制室和滅菌室等。（一）藥品儲(chǔ)存室 藥品儲(chǔ)存室主要存放組織培養(yǎng)常用的各種化學(xué)試劑， 如無(wú)機(jī)鹽、 有機(jī)物、 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、消毒劑及各種生化試劑等。（二）洗滌室 洗滌室用于清洗各種培養(yǎng)器皿、用具及培養(yǎng)材料等。（三）培養(yǎng)基配制室 培養(yǎng)基配制室用于培養(yǎng)基的配制、分裝、封口，以及培養(yǎng)基滅菌前暫 時(shí)存放。（四）滅菌室 滅菌室用于培養(yǎng)基、器皿、工具的滅菌消毒工作。4、接種室包括哪些設(shè)備和用具？接種室又稱無(wú)菌室， 是進(jìn)行菌種分離和接種的專用房間， 室內(nèi)安裝一空調(diào)， 使室溫可控，接 種室外面設(shè)緩沖間門不宜對(duì)開(kāi)，最好安裝滑動(dòng)門窗，接種室內(nèi)的地面和墻壁要求光滑潔凈， 室內(nèi)根據(jù)要求配置一定數(shù)量的

6、超凈工作臺(tái)、接種用的小推車以及接種工具和消毒用的乙醇、 酒精燈等，室內(nèi)和緩沖間裝紫外線燈和日光燈。5、培養(yǎng)設(shè)備是什么，主要包括哪些？ 培養(yǎng)設(shè)備是指專為培養(yǎng)物創(chuàng)造適宜的光、 溫、水、氣等條件的設(shè)備， 包括：空調(diào)器、 定時(shí)器、 恒溫器、增濕機(jī)或去濕機(jī)、培養(yǎng)架、搖床或旋轉(zhuǎn)床、光照培養(yǎng)箱、照度計(jì)及溫、濕度計(jì)。6、簡(jiǎn)述一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)組培實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備設(shè)施。（1）玻璃器皿和其他實(shí)驗(yàn)器皿的清洗和儲(chǔ)存（2）培養(yǎng)基的制備、滅菌和存放（ 3）植物材料的無(wú)菌操作（ 4）將接種材料培養(yǎng)在適宜的溫度、濕度和光照條件下（5）培養(yǎng)材料的細(xì)胞學(xué)及解剖學(xué)觀察、實(shí)體照相、切片觀察7、玻璃器皿的清洗的總體要求、標(biāo)準(zhǔn)和不同玻璃器皿的清洗方法

7、。（1）總體要求：有機(jī)物、油脂等污物去掉（2）標(biāo)準(zhǔn)：瓶壁透明發(fā)亮，內(nèi)外碧水膜均一，不形成水珠（ 3）不同器皿的清洗 新器皿 1%稀 HCl 浸泡 12h，再用肥皂水洗凈，清水沖洗， 最后用蒸餾水沖洗 1 遍， 晾干后備用 用過(guò)器皿 先將器皿中的殘?jiān)ィ?用清水洗凈， 再 用溫肥皂水或洗潔精洗凈，清水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗 1 次，晾干后備用 污染器 皿 在 121OC 高溫蒸汽滅菌 30min 后，倒去殘?jiān)?，用清水沖洗，蒸餾水，曬干，有菌斑用毛 刷刷凈，再用清水沖洗干凈， ，浸泡于濃的重鉻酸鉀洗滌液中，浸泡 2 小時(shí)，清水沖洗后用 蒸餾水洗，晾干8、組織培養(yǎng)工廠有哪些廠房和場(chǎng)地組成？各自

8、的功能和作用是什么？ 組培育苗工廠一般劃分為以下幾個(gè)生產(chǎn)車間： 培養(yǎng)瓶清洗車間、 培養(yǎng)基母液調(diào)配車間、 培養(yǎng) 基制備車間、無(wú)菌操作車間、培養(yǎng)車間、煉苗溫室和苗圃。（1）培養(yǎng)瓶清洗車間可承擔(dān)大量的培養(yǎng)器皿如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿等的洗滌與試管苗出瓶工作。（2）培養(yǎng)基母液調(diào)配車間已知的培養(yǎng)基組成成分不下 10 種，為了減少工作量， 提高工作效率，在配制培養(yǎng)基時(shí)，一般先配成比所需濃度高 10100 倍的母液，配制使用時(shí)可按比例 稀釋。（3）培養(yǎng)基制備車間完成培養(yǎng)基配制、分裝、包扎和高壓滅菌等工作。（4）無(wú)菌操作車間也稱接種車間，是組培工廠最核心和關(guān)鍵部分。（5）培養(yǎng)車間 將接種的材料在人為控制溫度、

9、濕度和光照等條件下進(jìn)行培養(yǎng)生長(zhǎng)的場(chǎng)所。（6）煉苗溫室和苗圃煉苗溫室 創(chuàng)造適宜溫度條件 苗圃 直接向社會(huì)提供各種良種壯苗，可根據(jù)市場(chǎng)信息、林業(yè)生產(chǎn)等需要靈活安排各種林業(yè)苗木、觀賞花卉等的育苗計(jì)劃。9、組織培養(yǎng)工廠有哪些主要設(shè)備？這些設(shè)備各有什么作用？（1）超凈工作臺(tái) 是一種提供局部無(wú)塵無(wú)菌工作環(huán)境的單向流型空氣凈化設(shè)備。（2）高壓蒸汽滅菌鍋?zhàn)罨镜臏缇b備，用于培養(yǎng)基的滅菌。（3）培養(yǎng)架 擺放大量培養(yǎng)物，以利于大量生產(chǎn)的需要。（4）照明光源 補(bǔ)充植物光合作用的需要。10、培養(yǎng)基的成分主要有哪些？主要包括 5大類：無(wú)機(jī)養(yǎng)分、 有機(jī)養(yǎng)分、 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、 糖（碳源） 以及介質(zhì)或載體 （紙 橋或瓊

10、脂等） ，此外還含有大量的水分，可提供植物所需的碳、氫、氧，配制培養(yǎng)基時(shí)一般 用離子交換水、蒸餾水或重蒸餾水。11、什么是外植體？如何進(jìn)行外植體的選擇？ 外植體是指第一次接種用的植物材料。（1）選擇合適的部位 木本植物、 較大的草本植物采取莖段， 本身矮小或缺乏顯著的莖的草 本植物采用葉片、葉柄、花葶或花瓣等作外植體，滿天星、勿忘我、情人草和菊花等都是帶 芽的材料作為外植體。（2）取材季節(jié)合理 多年生植物生長(zhǎng)期取材，特別是春芽 一年生植物幼嫩組織（3）考慮器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡幼嫩年齡的組織器官更適于組培（4）選擇合適大小的外植體 0.5 1cm（5）選擇健壯的植株（6）選擇優(yōu)良的種質(zhì)（7）

11、選擇合適的植物種類 雙子葉單子葉、草本木本12、外植體的接種主要有哪些技術(shù)步驟？（1）在接種前 4h 用甲醛熏蒸接種室，并打開(kāi)室內(nèi)紫外燈進(jìn)行滅菌。（2）在接種前 20min ，打開(kāi)超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外燈。（3）接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等。（4）上工作臺(tái)后，用乙醇棉球擦拭雙手，特別是指甲處，然后擦拭工作臺(tái)面。（5）先用乙醇棉球擦拭接種工具，再將鑷子和剪子從頭至尾過(guò)火一遍，然后反復(fù)過(guò)火尖端 處，對(duì)培養(yǎng)皿要過(guò)火烤干。（6）接種時(shí)，接種員雙手不能離開(kāi)工作臺(tái)，不能說(shuō)話、走動(dòng)和咳嗽等。（7）接種完畢后要清理干凈工作臺(tái)，可用紫外燈滅菌30min 。若連續(xù)接種，每 5 天

12、要大強(qiáng)度滅菌 1 次。13、簡(jiǎn)述培養(yǎng)基配制的主要技術(shù)步驟。 將已配種好的各種母液按順序排好， 根據(jù)母液倍數(shù)或濃度計(jì)算和吸收相應(yīng)量的各種母液和 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)；計(jì)算和稱取瓊脂和蔗糖。 由于瓊脂較難溶解， 所以先在燒杯或量杯中放入一定量的水， 加入瓊脂， 在電爐上加熱并 不斷攪拌，使之溶解。 按照大量元素、 微量元素、 鐵鹽、有機(jī)物和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的順序倒入已融化的瓊脂中， 繼續(xù)加溫，不斷攪拌，使之均勻溶解。若母液在貯藏過(guò)程中產(chǎn)生沉淀或結(jié)晶，或是變色，則 不能使用，應(yīng)重新配制。 加入蔗糖，待蔗糖溶解后，加水定容至所需體積。 調(diào)整培養(yǎng)基的 pH 。大多數(shù)的園林植物都要求在 pH5.65.8 的條件下

13、進(jìn)行組織培養(yǎng)。一般 用 1mol /L 的 HCl 或 1mol/L 的 NaOH 調(diào)節(jié)。 培養(yǎng)基的分裝：一般占培養(yǎng)容器的1/41/3 為宜。14、外植體為什么褐變？如何防止其褐變？（1）原因 由于外植體中的酚類化合物與多酚氧化酶作用被氧化形成褐色的醌類化合物， 醌 類化合物在酪氨酸酶的作用下， 與外植體組織中的蛋白質(zhì)發(fā)生聚合， 進(jìn)一步引起其他酶系統(tǒng) 失活，導(dǎo)致組織代謝紊亂，生長(zhǎng)受阻，最終逐漸死亡。（2）措施 正確選擇外植體 選擇適宜的培養(yǎng)基 創(chuàng)造合適的培養(yǎng)條件 連續(xù)轉(zhuǎn)移15、配制母液的原則。（1）相同類型試劑混合（2）容易形成沉淀的藥劑要分開(kāi)（3）母液濃度適宜（4）用量認(rèn)真計(jì)算核對(duì)（5）藥品

14、準(zhǔn)確稱量16、用于外植體滅菌的常用藥劑有哪些？各自特點(diǎn)如何？ 最常用的是次氯酸鈉，所需的滅菌時(shí)間稍長(zhǎng)， 但性質(zhì)比較溫和，對(duì)植物材料殺傷較輕， 比較 滅菌的材料經(jīng)常用它， 但滅菌的徹底程度不如氯化汞， 使用質(zhì)量濃度 2%，滅菌時(shí)間 530min 。 氯化汞相對(duì)滅菌效果最好， 但必須較嚴(yán)格地掌握滅菌時(shí)間， 并需多次無(wú)菌水沖洗才能洗脫表 面附著的殘液，否則植物材料易產(chǎn)生毒害或受到強(qiáng)烈抑制，使用質(zhì)量濃度0.11%，滅菌時(shí)間 530min 。乙醇 使用體積分?jǐn)?shù) 7075% ，滅菌時(shí)間 0.22min 。17、各種植物組織器官的滅菌方法。消毒程序外植體前處理消毒沖洗備注莖段自來(lái)水沖洗后， 70%乙醇中浸泡

15、數(shù)秒2%次氯酸鈉溶液中浸泡 1530min無(wú)菌水沖洗 34 次以莖段或頂芽為外植體葉片自來(lái)水沖洗后， 70%乙醇中浸泡數(shù)秒0.1%氯化汞溶液中 浸泡 1min ，再在 2% 次氯酸鈉溶液中浸 泡 1530min無(wú)菌水反復(fù)沖洗， 吸 干過(guò)多的水分以葉片或葉柄切段為外植體器官自來(lái)水沖洗后， 70%乙醇中浸泡數(shù)秒2%次氯酸鈉溶液中浸泡 2030min無(wú)菌水沖洗 34 次， 無(wú)菌濾紙吸干水分以芽眼或內(nèi)部器官為外植體果實(shí)70%乙醇中浸泡數(shù)秒2%次氯酸鈉溶液中浸泡 10min無(wú)菌水沖洗 34 次培養(yǎng)幼胚獲得植株 或取果肉為外植體種子70%乙醇中浸泡數(shù)分鐘，無(wú)菌水沖洗10% 次 氯 酸 鈣 浸 泡2030m

16、in ，再用 1%無(wú)菌水沖洗 34 次， 無(wú)菌濾紙吸干水分以萌芽的幼苗各部 位為外植體的溴水浸泡 5min18、組培中污染原因有哪些？如何預(yù)防？（1）微生物細(xì)菌感染 材料帶菌或培養(yǎng)基滅菌不徹底 操作人員不慎 工作人員使用了未經(jīng)充分滅菌的工具及呼吸時(shí)呼出的細(xì)菌， 或手接觸 材料或器皿邊緣，使微生物落入材料或器皿 器械環(huán)境 周圍環(huán)境不清潔或空氣不潔凈， 灰塵很多，或超凈工作臺(tái)的過(guò)濾裝置失效， 培養(yǎng)用器皿口徑過(guò)大，瓶口邊緣污染真菌（2）防止材料帶菌外植體滅菌 玻璃器皿的滅菌 金屬器械滅菌布質(zhì)制品滅菌 操作室培養(yǎng)室 操作人員嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)范操作19、玻璃化的原因及預(yù)防措施。（1）激素濃度 高濃度的

17、細(xì)胞分裂素有利于促進(jìn)芽的分化， 也會(huì)使玻璃化的發(fā)生比例提高 溫度 高溫或溫度變化幅度大會(huì)提高玻璃化的發(fā)生率 濕度 高濕條件使玻璃化發(fā)生頻率升高 瓊脂濃度 隨著瓊脂濃度的增加，玻璃化苗的比例減少 光照強(qiáng)度 增加光照強(qiáng)度使玻璃化發(fā)生比例降低 培養(yǎng)基成分 提高培養(yǎng)基的碳氮比，可以減少玻璃化的比例（2）調(diào)整培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)成分提高培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂的濃度降低細(xì)胞分裂素和赤霉素的濃度 增加自然光照，控制光照時(shí)間 控制溫度 改善培養(yǎng)容器的氣體交換狀況20、組培苗的特點(diǎn)，愈傷組織再生形成新植物體途徑。（1）組培苗生長(zhǎng)細(xì)弱，莖、葉表面角質(zhì)層不發(fā)達(dá)，氣孔的調(diào)節(jié)能力差。組培苗莖、葉雖呈綠色，但葉綠素的光合作用較差。根

18、的吸收能力極低，根系吸收的水分難以滿足小苗蒸騰作用的消耗，小苗體內(nèi)的水 分達(dá)不到平衡。 組織幼嫩，結(jié)構(gòu)較松散，細(xì)胞含水率高，機(jī)械組織很不發(fā)達(dá)，容易發(fā)生機(jī)械損傷， 對(duì)逆境的適應(yīng)和抵抗能力差。（ 2）愈傷組織不定芽植株先芽后根先根后芽 不同部分產(chǎn)生芽根愈傷組織胚狀體植株21、哪些組織適合進(jìn)行組培快速繁殖？（1）通過(guò)培養(yǎng)生產(chǎn)不帶病毒的種苗，使生產(chǎn)力得到大幅度的提高，例如馬鈴薯、香蕉和大 （2）有性繁殖時(shí)變異幅度大的品系，可以從這些群體中選擇優(yōu)良的個(gè)體，進(jìn)行無(wú)性繁殖， 生產(chǎn)出整齊劃一的大量種苗，例如某些果樹(shù)和蘭花等。（3）雌雄異株植物，通過(guò)組培快繁技術(shù)繁殖具有更高栽培價(jià)值的雌性植株或雄性植株。（4）需

19、要用較大量的目的產(chǎn)品作為種苗材料進(jìn)行種植的物種，如大蒜、甘蔗等。（5）組培快繁技術(shù)簡(jiǎn)單、繁殖系數(shù)高的植物，如雜種芹菜、胡蘿卜等。（6）在野生或傳統(tǒng)的栽培條件下個(gè)體繁殖效率低下的植物，如蘭花等。22、組織培養(yǎng)有哪些途徑可以實(shí)現(xiàn)繁殖植物種苗的目的？（1）短枝發(fā)生型：微型扦插特點(diǎn)：能一次成苗，遺傳穩(wěn)定，成活率高，但繁殖系數(shù)低（2）叢生芽發(fā)生型特點(diǎn)：不經(jīng)過(guò)愈傷階段，后代變異?。?）不定芽發(fā)生型特點(diǎn)：繁殖系數(shù)高，但變異大（4）胚狀體發(fā)生型特點(diǎn)：成苗量大，速度快，結(jié)構(gòu)完整，但對(duì)其發(fā)育過(guò)程了解不足，應(yīng)用不十分廣泛（5）原球莖發(fā)生型：蘭科植物特有23、組培快繁有哪些步驟？第一階段： 初代培養(yǎng) 第二階段：芽苗的

20、增殖 第三階段：誘導(dǎo)芽苗生根 第四階段： 煉苗 和移栽24、組培快繁方式的優(yōu)勢(shì)？（1）繁殖效率高，生長(zhǎng)速度快（2）組培快繁不受季節(jié)和環(huán)境條件限制（3）培養(yǎng)條件的可控性強(qiáng)（4）占用空間小，管理方便，有利于自動(dòng)化管理（5）不存在種子繁殖過(guò)程中的世代問(wèn)題25、影響莖段組培快繁效果的因素及具體措施。（1）外植體材料的選取 選取生長(zhǎng)健壯、 無(wú)病蟲和生長(zhǎng)迅速的幼嫩莖段， 優(yōu)先選用頂部材料。（ 2）培養(yǎng)基中植物激素及其濃度常用的細(xì)胞分裂素 6-BA 促進(jìn)腋芽增殖，質(zhì)量濃度0.55mg/L ，常用的生長(zhǎng)素 NAA 改善芽苗的生長(zhǎng)狀況， 質(zhì)量濃度 0.051.0mg/L ，赤霉素 GA3 質(zhì)量濃度為 1mg/L

21、 以下。（3）防止褐變和有害物質(zhì)的積累防止褐變措施： 在培養(yǎng)基中單獨(dú)添加或配合使用蕓香苷，20%硫代硫酸鈉溶液、檸檬、活性炭、維生素C 及聚乙烯吡咯烷酮 pH 為 5.5 是可以取得較好的培養(yǎng)效果 降低培養(yǎng)光照強(qiáng)度可以明顯減輕外植體的褐變程度 發(fā)現(xiàn)外植體近旁 培養(yǎng)基有褐變物質(zhì)積累時(shí)馬上轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上（ 4）培養(yǎng)方式和條件 液體振蕩培養(yǎng)增殖率高，縮短增殖周期，溫度一般控制在2628OC之間你，光照時(shí)間為 1216h/d ，光照度在 20003000lx 之間26、無(wú)病毒苗培育的意義？（1）無(wú)病毒苗培育可明顯提高作物的產(chǎn)量、品質(zhì)。（2）無(wú)病毒苗培育增產(chǎn)增收效益顯著。（3）無(wú)病毒苗培育促進(jìn)農(nóng)產(chǎn)品

22、出口，增加就業(yè)機(jī)會(huì)。（4）排除了使用藥劑，降低生產(chǎn)成本，減少污染，防止公害，對(duì)保護(hù)環(huán)境有積極意義。27、無(wú)病毒原因。（1）在一個(gè)植物體內(nèi)，病毒易于通過(guò)維管束系統(tǒng)而移動(dòng)，分生組織則不存在維管束系統(tǒng)。（2）病毒在細(xì)胞間移動(dòng)的另一個(gè)途徑是通過(guò)胞間連絲移動(dòng)，速度緩慢，難以趕上莖尖分裂 旺盛的分生細(xì)胞。（3）分裂旺盛的分生細(xì)胞代謝活性強(qiáng)，使病毒無(wú)法進(jìn)行復(fù)制。（4）植物體內(nèi)存在病毒鈍化系統(tǒng)，而莖尖分生組織內(nèi)鈍化系統(tǒng)活性最高，鈍化病毒，使病 毒難以復(fù)制。（5）莖尖分生組織的生長(zhǎng)素含量高，足以抑制病毒的增殖。28、無(wú)病毒苗培育的方法有哪些？（1）莖尖分生組織（2）愈傷組織培養(yǎng)脫毒（ 3）珠心胚培養(yǎng)脫毒（4）熱

23、處理脫毒（ 5）微體嫁接脫毒（ 6）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒29、莖尖培養(yǎng)脫毒的方法和過(guò)程。（1）培育脫毒母株， 獲得外植體 選擇品種 選擇品質(zhì)好， 產(chǎn)量高， 抗、耐病毒苗的品種 確保品種純度 嚴(yán)格鑒定獲取快繁外植體母株的品種純度，可避免無(wú)效勞動(dòng)，提高工作效率 獲得外植體 選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的母株，既不受季節(jié)影響，又易消毒。（2）選擇培養(yǎng)基 常用的培養(yǎng)基有 MS、N6、B5、Nitsch 培養(yǎng)基等，誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基 以添加 2，4-D 效果最好， 其濃度為 13mg/L ，分化培養(yǎng)基中可根據(jù)其分化方向添加13mg/L的 BA ，再加少許的 IAA （ 0.20.5mg/L ），生根培養(yǎng)基

24、可單獨(dú)添加生長(zhǎng)素（ 0.51mg/L ）。（3）剝離和接種 將處理好的植物部分，如包含莖尖的莖段或芽等滅菌，置超凈工作臺(tái) 40 倍顯微鏡下， 剝?nèi)ネ馊~和較大的葉原基， 暴露出生長(zhǎng)點(diǎn)分生組織， 剝離帶 12 個(gè)葉原基的分 生組織，接種到試管內(nèi)的芽分生培養(yǎng)基上。（4）繼代培養(yǎng)生根和快繁 將已接種外植體的試管置于（ 23±2）OC，光照度為 3000lx ，光 周期為 1316h/d 的培養(yǎng)室中培養(yǎng) 23 周成苗，待苗長(zhǎng)至 12cm 高，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 生長(zhǎng) 710d 生根，轉(zhuǎn)入快繁培養(yǎng)基繼續(xù)繁殖。30、無(wú)病毒植物鑒定方法有哪些？（植物病毒鑒定檢測(cè)有幾種方法？）（1）目測(cè)癥狀法（2

25、）指示植物法 （ 3）血清學(xué)鑒定法（4）電子顯微鏡鑒定法（5）酶聯(lián)免疫吸附法（ 6）免疫吸附電鏡法31、花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)有何區(qū)別和相同點(diǎn)？（1）相同點(diǎn)：二者培養(yǎng)目的相同，都是為誘導(dǎo)花粉細(xì)胞發(fā)育成為單倍體細(xì)胞，形成單倍體 植株。（2）區(qū)別：花藥培養(yǎng)為器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)為細(xì)胞培養(yǎng)。32、什么是單倍體育種及單倍體育種優(yōu)勢(shì)？ 以單倍體為材料的育種程序稱為單倍體育種。（1）縮短育種年限 （ 2）單倍體育種的程序較簡(jiǎn)便33、花藥培養(yǎng)的大致過(guò)程如何？（1）取材 （2）培養(yǎng)基的配制 （ 3）消毒 （4）接種 （5）培養(yǎng)34、花粉植株發(fā)育有哪些途徑？花粉細(xì)胞第一次有絲分裂 均等分裂兩個(gè)等大子細(xì)胞，均勻誘導(dǎo)單倍

26、體 不均等分裂形成大營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞、小生殖細(xì)胞 a 小細(xì)胞退化，大細(xì)胞均勻誘導(dǎo)單倍體 b 大細(xì)胞退化，小細(xì)胞均勻誘導(dǎo)單倍體 c 大小細(xì)胞均誘導(dǎo)單倍體35、常用的單倍體植株二倍化有哪些途徑？（1）自發(fā)加倍（自然加倍）（ 2）人工加倍（ 3）從愈傷組織再生加倍植株36、單細(xì)胞分離方法有哪些？（1）機(jī)械法 （ 2）酶解法37、機(jī)械法、酶解法分離單細(xì)胞的具體過(guò)程如何？（ 1）機(jī)械法 稱取 10g 新鮮葉片，進(jìn)行表面消毒后放于研缽中。加入 40ml 研磨介質(zhì)：20mol/L 蔗糖 +10mol/LMgCl 2+20mol/LTris-HCl 緩沖液，pH7.8， 輕輕研磨成勻漿。用兩層細(xì)紗布過(guò)濾，取濾液。 用

27、低速離心法將濾液中細(xì)微的碎屑除掉，得到沉淀在底層的游離細(xì)胞。（2）酶解法 果膠酶的制備： 0.5果膠酶 +0.5葡聚糖硫酸鉀 +0.8甘露醇，配成 20ml ， 調(diào)節(jié) pH 為 5.8，用孔徑為 0.20.4m 的濾膜過(guò)濾滅菌。取剛長(zhǎng)成的嫩葉用 70乙醇漂洗數(shù)秒， 用飽和漂白粉上清液浸泡 15min ，無(wú)菌水沖洗 45 次。吸干表面的水分，用消過(guò)毒的鑷子撕去葉的下表皮。用消過(guò)毒的解剖刀將葉片切成 3cm 見(jiàn)方的小塊， 取 2g 切好的葉片放入裝有果膠酶液的三 角瓶中。用真空泵抽氣 12min ，使酶液滲入細(xì)胞間隙。 將三角瓶置于低速轉(zhuǎn)床上， 轉(zhuǎn)速為 120r/min ，溫度 2528OC，30

28、min 后，吸取酶液、 碎片。 再放入上述果膠酶液 20ml，保溫振蕩 30min ，吸出酶液，此酶液主要含有海綿組織細(xì)胞。 再次放入上述果膠酶液 20ml ，保溫振蕩 30min，用紗布或尼龍網(wǎng)過(guò)濾除去被消化的葉脈 和表皮。在 100g 條件下離心 2min ，吸去上清液，底層即得均一的柵欄組織單細(xì)胞。38、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法類型有哪兩種？（1）分批培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)39、優(yōu)良懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系的要求。（1）愈傷化的細(xì)胞分散性良好（2）細(xì)胞均一性好，細(xì)胞有用成分含量高（3）增殖速度迅速40、單細(xì)胞培養(yǎng)有哪些方法？各種方法的概念、用途、優(yōu)缺點(diǎn)如何？ 看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法和平板培養(yǎng)法（1）看護(hù)培養(yǎng)法 概念：是指把單個(gè)細(xì)胞置于一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織上培養(yǎng)， 促使單個(gè)細(xì)胞持續(xù)分裂和增殖 的培養(yǎng)方法。用途：誘導(dǎo)單細(xì)胞體系 優(yōu)點(diǎn)：最大的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行，且效果較好，易于成功。 缺點(diǎn)：不能在顯微鏡下直接觀察