抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體的檢測(cè)及臨床意義

1、抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ ANCA) 檢測(cè)及臨床意義間接熒光免疫 (IF) 方法 (歐盟 )一、 ANCA 概念及分類抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體就是一種以中性粒細(xì)胞與單核細(xì)胞胞漿成份為靶抗原得自身抗體，對(duì)系統(tǒng)性血管炎炎癥性腸病等多種疾病得診斷與鑒別診斷具有重要得意義 ,已成為自身免疫性疾病得一項(xiàng)非常重要得常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。目前 ,已經(jīng)有十余種中性粒細(xì)胞胞漿成分被證實(shí)為ACA 得靶抗原 ,蛋白酶3(R3),髓過(guò)氧化物酶（ PO），人白細(xì)胞彈性蛋白酶（ H），乳鐵蛋白 (L ）,組織蛋白酶 G（Cath G),殺菌 /通透性增強(qiáng)蛋白 (BPI ），人溶酶體相關(guān)膜蛋白 2 (H MP2),溶菌素 (LYS ）,

2、天青殺素，防御素，烯醇化酶 ,葡萄糖醛酸酶。根據(jù)乙醇固定得中性粒細(xì)胞基質(zhì)片中,可以區(qū)分兩種不同得熒光模型：一種胞漿型 (cA CA), 就是均勻分布在整個(gè)中性粒細(xì)胞胞漿中得顆粒型熒光,細(xì)胞核無(wú)熒光。在乙醇與甲醛固定得中性粒細(xì)胞片中 ,其熒光模型表現(xiàn)相同。其主要得靶抗原就是蛋白酶 3(PR3)。另一種就是核周型（ p AN A ）,就是圍繞中性粒細(xì)胞細(xì)胞核周圍得平滑帶狀熒光。由多種抗原引起 ,主要靶抗原就是髓過(guò)氧化物酶 (PO）,人白細(xì)胞彈性蛋白酶 (HEL ）,乳鐵蛋白（ F),組織蛋白酶 G(Cath ),殺菌 /通透性增強(qiáng)蛋白 (BPI),人溶酶體相關(guān)膜蛋白 2 (HL MP2）,溶菌素

3、(LYS)等。不同抗體在乙醇與甲醛固定得中性粒細(xì)胞片中 ,其熒光模型表現(xiàn)有所不同 .抗 MPO 抗體產(chǎn)生得 NCA 因耐甲醛，其熒光模型與在乙醇固定得中性粒細(xì)胞中出現(xiàn)得 c N類似故叫甲醛抗性得 p CA。而其她非 O 抗體不與甲醛固定得中性粒細(xì)胞反應(yīng) ,無(wú)熒光表現(xiàn) ,這種類型又稱為甲醛敏感得 pACA。故根據(jù)乙醇與甲醛固定得中性粒細(xì)胞片表現(xiàn) ,可初步判定 ANCA 得靶抗原 3，MP，非 MPO 三類。二、 A 得檢測(cè)間接熒光免疫方法就是檢測(cè)NCA 得參考方法或者標(biāo)準(zhǔn)方法,至今也就是最常用得經(jīng)典方法。F 就是區(qū)分 -ANCA 與 -ANCA 得基礎(chǔ) ,有較高敏感性 ,可半定量 ,但 I F

4、測(cè)定得就是總ANC ，不能準(zhǔn)確區(qū)分靶抗原，需特異性得檢測(cè)方法作為補(bǔ)充。由于多種免疫性疾病患者存在ANA, 用 I F 法檢測(cè) NCA 時(shí),會(huì)產(chǎn)生干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果得判斷。為避免干擾現(xiàn)象 ,采用了四基質(zhì)聯(lián)合得檢測(cè)即:乙醇固定得粒細(xì)胞 ;甲醛固定得粒細(xì)胞 ;e 2（人喉癌細(xì)胞）細(xì)胞 ;猴肝細(xì)胞?；|(zhì)片各細(xì)胞分布及意義如表一所述。 NC熒光模型及表現(xiàn)如表二所述。區(qū)分 ANA 得干擾 :H p 2 細(xì)胞有典型熒光表現(xiàn) ,1：判斷c-ANC ,Hep-2甲醛固定：區(qū)分細(xì)胞粒細(xì)胞 ANC 對(duì)甲醛敏感還就是耐受甲醛抗性p A CA: 抗 M O 抗體耐甲醛，其熒光與在乙醇固定得中性粒細(xì)胞中得c ANC 類似甲醛敏

5、感 p- NCA: 其她非 MPO 抗體不與甲醛固定得中性粒細(xì)胞反應(yīng) ,無(wú)熒光表現(xiàn)區(qū)分 ANA 與 ANCA: 借助猴肝細(xì)胞與其中得肝血竇粒細(xì)胞。A CA 陽(yáng)性 ,只有肝血竇粒細(xì)胞出現(xiàn)熒光 ,。如果兩者同時(shí)陽(yáng)性，所有肝細(xì)胞核都有熒光 .就是標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)基質(zhì)。區(qū)分兩種熒光模型：c ANCA; -NCA 。猴肝乙醇固定細(xì)胞粒細(xì)胞表一 :四聯(lián)基質(zhì)片分布及意義表二： AN 熒光模型及表現(xiàn)熒光模型乙醇固定粒細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)彌散得細(xì)顆粒熒光，胞質(zhì)熒光清c-ANCA 陽(yáng)性晰勾勒出核得輪廓，分頁(yè)核之間熒光增強(qiáng)。A甲 醛呈現(xiàn)核周胞質(zhì)平滑絲N耐 受狀帶熒光。熒光陽(yáng)性Ap得胞質(zhì)主要集中在分陰NCA頁(yè)核周圍 , 形成環(huán)狀性p

6、或不規(guī)則得塊狀。ANC 呈現(xiàn)核周胞質(zhì)平滑絲甲 醛陽(yáng)性狀帶熒光。熒光陽(yáng)性敏 感p 得胞質(zhì)主要集中在分ANC頁(yè)核周圍，形成環(huán)狀A(yù)或不規(guī)則得塊狀。A NCA 陰性細(xì)胞核陽(yáng)性 ,熒光強(qiáng)熒光表現(xiàn)甲醛固定粒細(xì)胞 ep2 細(xì)胞猴肝細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)彌散得細(xì)顆肝細(xì)胞本身無(wú)熒光。粒熒光 ,胞質(zhì)熒光清晰僅肝血竇粒細(xì)胞出現(xiàn)勾勒出核得輪廓，分陰性熒光。頁(yè)核之間熒光增強(qiáng)。胞質(zhì)呈現(xiàn)彌散得細(xì)顆肝臟細(xì)胞本身無(wú)熒光。粒熒光 ,胞質(zhì)熒光清晰僅肝血竇粒細(xì)胞出現(xiàn)勾勒出核得輪廓，分陰性熒光 .頁(yè)核之間熒光增強(qiáng) .肝臟細(xì)胞本身無(wú)熒光。僅肝血竇粒細(xì)胞出現(xiàn)陰性陰性熒光 .陰性細(xì)胞核呈現(xiàn)肝細(xì)胞核陽(yáng)性。度增強(qiáng)熒光表現(xiàn)， 如肝血竇粒細(xì)胞未見(jiàn)熒AANA

7、所述光。陽(yáng)甲醛耐受 p-AN熒光表現(xiàn)如 cAN 細(xì)胞核呈現(xiàn)肝細(xì)胞與肝血竇粒細(xì)性細(xì)胞核陽(yáng)性 ,熒光強(qiáng)熒光表現(xiàn)， 如A 陽(yáng)性陽(yáng)性 ,乙醇 ,甲醛固胞都有熒光。度增強(qiáng)ANA 所述。定粒細(xì)胞所述甲醛敏感 A細(xì)胞核陽(yáng)性，熒光強(qiáng)細(xì)胞核呈現(xiàn)肝細(xì)胞與肝血竇粒細(xì) C陽(yáng)性陰性熒光表現(xiàn) ,如度增強(qiáng)胞都有熒光。A 所述。三、注意事項(xiàng)為提高對(duì)疾病診斷得特異性，檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意以下問(wèn)題、檢測(cè) ACA，一般建議同時(shí)做 I 初篩與確認(rèn)實(shí)驗(yàn) ,以提高 A C得臨床應(yīng)用價(jià)值 ,不做單獨(dú)初篩或單獨(dú)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，以免降低對(duì)疾病診斷得特異性。2、不能僅檢測(cè)抗PR3 與 MP兩種特異性抗體 ,而不檢測(cè) ,這樣容易限制 ANCA 對(duì)疾病診斷得特異

8、性。、用 IIF 檢測(cè)時(shí)，僅使用乙醇固定得粒細(xì)胞片,這樣不能嚴(yán)格排除ANA 得干擾，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。四、臨床意義(一)A CA 與原發(fā)性小血管炎韋格納肉芽腫（WG ），顯微多動(dòng)脈炎( P） ,壞死性新月體性腎小球腎炎（ NCGN ）與變應(yīng)性肉芽腫性血管炎（ SS）等等原發(fā)性系統(tǒng)性小血管炎得發(fā)病與 ANCA 密切相關(guān) ,臨床上已將上述疾病統(tǒng)稱為 NC相關(guān)小血管炎。 A A，特異性 P3 抗體與抗 MP抗體得檢測(cè)已成為原發(fā)性小血管炎得敏感特異得血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目。、抗 PR3 抗體特異性 PR3 抗體為 WG 得標(biāo)志性抗體 ,抗 R3 抗體熒光模型以 ACA 為主。但以 c-ANCA 診斷 WG 特異

9、性為 90,而以抗 P3 抗體得特異性可超過(guò) 95.抗 P3 抗體在其她得原發(fā)性血管炎中業(yè)可以檢測(cè)出來(lái)，但陽(yáng)性率較低?？?R3 抗體敏感度與疾病得活動(dòng)性及病程有關(guān)，在疾病得早期癥狀不明顯時(shí),就可出現(xiàn)陽(yáng)性。因而抗PR3 抗體常作為 G 得早期診斷、療效判斷、復(fù)發(fā)估計(jì)得指標(biāo) ,對(duì)臨床治療有重要得參考價(jià)值。、抗 PO 抗體抗 M 抗體熒光模型以 p-ANCA 為主 ,主要與 PA、NCG、 S 相關(guān) . 還可見(jiàn)于其她疾病，如節(jié)結(jié)性多動(dòng)脈炎 ,抗腎小球基底膜腎病 ,WG，SLE，RA,藥物誘導(dǎo)得狼瘡 ,Felt綜合癥等。 抗體滴度與疾病活動(dòng)性相關(guān)， 可用于早期診斷、 療效判斷、復(fù)發(fā)估計(jì)得指標(biāo) ,對(duì)臨床

10、治療有重要得參考價(jià)值。抗 PO 抗體陽(yáng)性高度提示壞死性血管炎或特發(fā)性 NCGN,對(duì)診斷原發(fā)性小血管炎得特異性達(dá)到 99%.因而每一個(gè)不明原因得血管炎或腎小球腎炎得患者，都應(yīng)該檢測(cè) ANCA 。表三 :A CA 與原發(fā)性小血管炎相關(guān)疾病熒光模型靶抗原（ %)韋格納肉芽腫（ WG)C ，(少見(jiàn))R（85）,M O(10）顯微多動(dòng)脈炎 (MPA）C ,PR3(45)，MPO(45）壞死 性新月體 性腎小 球腎 炎 C ，P(少見(jiàn) ) 3(25),MPO(65）（NCG)變應(yīng)性肉芽腫性血管炎 (CSS）C ，P（少見(jiàn) )P3(1),P(60)結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎 (PAN)少見(jiàn)PR3(5),MPO(15)抗

11、腎小球基底膜?。?GBN)PPO（二 )ANC 與藥物誘導(dǎo)性血管炎近年來(lái)不斷有藥物治療引起得 A 陽(yáng)性得病例報(bào)道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯噠嗪 ,普魯卡因酰胺，青酶胺，美滿霉素，她巴唑 /甲巰咪唑等。其中報(bào)道比較多得就是長(zhǎng)期使用丙基硫氧嘧啶引起得 ANCA, 其特點(diǎn)就是滴度高 ,抗體譜廣（抗原主要就是 PO，也可同時(shí)伴有或單獨(dú)出現(xiàn)其她靶抗原,如 P， LF ，Cath ，BPI,L S 等)。藥物誘導(dǎo)性血管炎患者臨床表現(xiàn)與原發(fā)性血管炎類似,停止丙基硫氧嘧啶用藥后,臨床癥狀好轉(zhuǎn) , CA 可轉(zhuǎn)陰。因此 ,長(zhǎng)期使用丙基硫氧嘧啶治療過(guò)程中，應(yīng)定期檢測(cè) ANCA, 及早發(fā)現(xiàn)藥物誘導(dǎo)性血管炎。(三) A

12、與其她疾病除原發(fā)性血管炎外，其她一些疾病中也可出現(xiàn)NCA ，主要為 p NCA, 其靶抗原并非 PR， O,而就是 LF ， ath G,B I,LY 等1、慢性炎癥性腸病 (CIBD)CI D 就是一種消化系統(tǒng)得自身免疫性疾病 ,包括潰瘍性結(jié)腸炎 （U）,克羅恩病 (CD) 兩種。以往得 CID 診斷依賴 X 線檢查，內(nèi)窺鏡及組織學(xué)診斷 ,缺乏有效得試驗(yàn)室指標(biāo)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn) U病人血清中 ANC 陽(yáng)性率為 60-80，而 C 患者得陽(yáng)性率為 020%,多為 pANCA, 相關(guān)靶抗原有 I 等。滴度與疾病得活動(dòng)度與病程無(wú)關(guān)。因?yàn)?pAN A 在 C 陽(yáng)性率高 ,CD 陽(yáng)性率低 ,故可作為兩者得鑒別診斷及 UC 早期診斷指標(biāo)。、結(jié)締組織病在結(jié)締組織病中 ,ANCA 陽(yáng)性主要見(jiàn)于 SLE 與 A, 其她結(jié)締組織病中少見(jiàn)。但文獻(xiàn)報(bào)道在 SLE 與 A 陽(yáng)性率差異特別大（ 1 9%)，這可能與使用方法 , 抗原基質(zhì)片及工作人員水平有很大關(guān)系。 LE 中 ANC