實驗四類風(fēng)濕因子檢測

1、實驗四實驗四類風(fēng)濕因子的檢測類風(fēng)濕因子的檢測類風(fēng)濕因子的檢測類風(fēng)濕因子的檢測 類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（RF）是一種抗人或動物）是一種抗人或動物IgG分分子子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以片段抗原決定簇的抗體，是以變性變性IgG為靶為靶抗原的自身抗體?？乖淖陨砜贵w。RF最初由最初由Rose等（等（1984年）年）在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清中發(fā)現(xiàn)。）患者血清中發(fā)現(xiàn)。RA患者體內(nèi)有產(chǎn)生患者體內(nèi)有產(chǎn)生RF的的B細胞克隆，在變性細胞克隆，在變性IgG或或EB病毒的直接作用下可大量合成病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要為主要為19S的的IgM，也有，也有7S的的IgG和和I

2、gA，它與天然，它與天然IgG結(jié)合的能力較差，最易與人和動物的變性結(jié)合的能力較差，最易與人和動物的變性IgG或或免疫復(fù)合物中的免疫復(fù)合物中的IgG結(jié)合。結(jié)合。 RF與體內(nèi)變性的與體內(nèi)變性的IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物后結(jié)合形成免疫復(fù)合物后可活化補體，或被吞噬細胞吞噬。由吞噬細胞釋可活化補體，或被吞噬細胞吞噬。由吞噬細胞釋放的溶酶體酶、活化肽、膠原酶、前列腺素放的溶酶體酶、活化肽、膠原酶、前列腺素E2等等物質(zhì)，在細胞因子和炎性粘附分子的參與下，致物質(zhì)，在細胞因子和炎性粘附分子的參與下，致組織炎性損傷，可使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。組織炎性損傷，可使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 類風(fēng)濕關(guān)

3、節(jié)炎類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎( RA)( RA)： 其病因及發(fā)病機制仍其病因及發(fā)病機制仍不完全明了不完全明了, , 推測可能為推測可能為外源性感染外源性感染作用于作用于遺傳易感個體遺傳易感個體, , 導(dǎo)致機體導(dǎo)致機體免疫系統(tǒng)紊亂免疫系統(tǒng)紊亂, , 進進而引起關(guān)節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞而引起關(guān)節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的的自身免疫性疾病自身免疫性疾病。 RF在在RA患者中的陽性檢出率很高，可達患者中的陽性檢出率很高，可達79.6%，是是RA患者血清中常見的自身抗體。高滴度患者血清中常見的自身抗體。高滴度RF陽性陽性支持對早期支持對早期RA的診斷，在的診斷，在RA患者，患者，RF的滴度與患的滴度與患

4、者的臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，即隨癥狀加重而效價升高。者的臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，即隨癥狀加重而效價升高。但但RF不是僅在不是僅在RA患者中出現(xiàn)，在患者中出現(xiàn)，在SLE、進行性全、進行性全身性硬化癥等自身免疫性疾病患者和部分老年人中身性硬化癥等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的陽性率可達的陽性率可達28.9%50%。因而。因而RF對對RA患者患者并不具有嚴格特異性，并不具有嚴格特異性，RF陽性不能作為診斷陽性不能作為診斷RA的的惟一標準。盡管在多種疾病中可有惟一標準。盡管在多種疾病中可有RF陽性，但滴均陽性，但滴均較低（較低（40IU/ml），隨著），隨著RF滴度增加，滴度增加，RF對對RA的診斷特異性

5、增高。的診斷特異性增高。 類風(fēng)濕因子的病理作用（一）類風(fēng)濕因子的病理作用（一） 類風(fēng)濕性血管炎，在外周血液循環(huán)中，類類風(fēng)濕性血管炎，在外周血液循環(huán)中，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎特異性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎特異性RFRF與自身與自身IgGIgG分子結(jié)合分子結(jié)合形成穩(wěn)定的免疫復(fù)合物，部分被單核形成穩(wěn)定的免疫復(fù)合物，部分被單核- -吞噬吞噬細胞系統(tǒng)清除，部分沉積于血管壁，激活細胞系統(tǒng)清除，部分沉積于血管壁，激活補體導(dǎo)致血管炎。補體導(dǎo)致血管炎。類風(fēng)濕因子的病理作用類風(fēng)濕因子的病理作用（二）（二） 關(guān)節(jié)型損傷由于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)滑液中缺少正關(guān)節(jié)型損傷由于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)滑液中缺少正常的常的IgGIgG分子，分子，IgGIgG-RF-RF

6、自身結(jié)合形成多聚體自身結(jié)合形成多聚體復(fù)合物，復(fù)合物，IgGIgG-RF-RF多聚體沉積于關(guān)節(jié)表面激多聚體沉積于關(guān)節(jié)表面激活補體引起關(guān)節(jié)性損傷?；钛a體引起關(guān)節(jié)性損傷。 常見的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA類風(fēng)濕因子易于檢測，而IgG類風(fēng)濕因子難于測出。IgA類風(fēng)濕因子及IgM類風(fēng)濕因子對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷有較好的參考價值。 IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效價80IU/ml并伴有嚴重關(guān)節(jié)功能障礙時，通常提示患者預(yù)后不良。 IgGIgG型型RFRF：在：在RARA患者血清或滑膜液中患者血清或滑膜液中IgGIgG型型RFRF的出現(xiàn)的出現(xiàn)與患者的滑膜炎、血管炎

7、和關(guān)節(jié)的癥狀密切相關(guān)，與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)的癥狀密切相關(guān)，此類此類RFRF常伴隨高滴度的常伴隨高滴度的IgMIgM型型RFRF在同一在同一RARA患者血清患者血清或滑膜液中出現(xiàn)。在正常人及非或滑膜液中出現(xiàn)。在正常人及非RARA患者中很難檢測患者中很難檢測出出IgGIgG型型RFRFIgGIgG型型RFRF在關(guān)節(jié)軟骨表面的沉積可激活在關(guān)節(jié)軟骨表面的沉積可激活補體引起關(guān)節(jié)的炎性損傷，因此滑膜液中檢測出補體引起關(guān)節(jié)的炎性損傷，因此滑膜液中檢測出IgGIgG型型RFRF比血清中檢出比血清中檢出IgMIgM型型RFRF更具病理意義。更具病理意義。 RFRF檢測方法一般有檢測方法一般有膠乳凝集試驗

8、膠乳凝集試驗、雙抗原夾心、雙抗原夾心ELISAELISA法、速率散射比濁法法、速率散射比濁法 。 一般醫(yī)院主要采用膠乳凝集法和酶聯(lián)免疫吸附法測一般醫(yī)院主要采用膠乳凝集法和酶聯(lián)免疫吸附法測定類風(fēng)濕因子。定類風(fēng)濕因子。類風(fēng)濕因子的檢測類風(fēng)濕因子的檢測 類風(fēng)濕因子的主要類型：類風(fēng)濕因子的主要類型： IgMIgM型型 特點：高凝集、易于沉淀特點：高凝集、易于沉淀 測定方法為：測定方法為：1 1、乳膠凝集法、乳膠凝集法2 2、酶聯(lián)免疫吸附法、酶聯(lián)免疫吸附法3 3 、乳膠免疫比濁法、乳膠免疫比濁法膠乳凝集試驗檢測膠乳凝集試驗檢測RF正向間接凝集試驗正向間接凝集試驗測測RFRF原理（膠乳凝集試驗）原理（膠乳

9、凝集試驗）類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（RFRF）是一組）是一組抗變性抗變性IgGIgG的自身抗體的自身抗體，它能與人或動物的變性它能與人或動物的變性IgGIgG結(jié)合，而不與正常人結(jié)合，而不與正常人IgGIgG發(fā)生凝集反應(yīng)。發(fā)生凝集反應(yīng)。將處理過的人將處理過的人IgGIgG與膠乳顆粒共價交聯(lián)，使其吸附與膠乳顆粒共價交聯(lián)，使其吸附于膠乳顆粒載體上，稱為于膠乳顆粒載體上，稱為致敏膠乳顆粒致敏膠乳顆粒。當待檢。當待檢血清中有血清中有RFRF時，則與致敏膠乳顆粒上的變性時，則與致敏膠乳顆粒上的變性IgGIgG發(fā)發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。生反應(yīng)，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。（正向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖（正向）間接凝集反應(yīng)原

10、理示意圖 （變性（變性IgG）主要的試劑和器材主要的試劑和器材 類風(fēng)濕膠乳診斷試劑類風(fēng)濕膠乳診斷試劑 RFRF陰性對照陰性對照 RFRF陽性對照陽性對照 反應(yīng)板反應(yīng)板 攪拌棒攪拌棒操作步驟操作步驟（1）在）在3塊載玻片上分別加一滴塊載玻片上分別加一滴RF陽性血清、陽性血清、RF陰性血清及待檢血清。陰性血清及待檢血清。（2）加）加20ul IgG致敏的膠乳于各血清樣品中，致敏的膠乳于各血清樣品中，輕微晃動載玻片混勻。輕微晃動載玻片混勻。（3）1 min 后觀察凝集反應(yīng)發(fā)生情況后觀察凝集反應(yīng)發(fā)生情況結(jié)果觀察和判斷結(jié)果觀察和判斷 在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆

11、粒出現(xiàn)，且液體澄清者為出現(xiàn)，且液體澄清者為RFRF陽性。陽性。 若需做半定量測定，可將血清作倍比稀釋，若需做半定量測定，可將血清作倍比稀釋，重復(fù)上述測定，以出現(xiàn)凝集的血清最高稀重復(fù)上述測定，以出現(xiàn)凝集的血清最高稀釋度為釋度為RFRF的效價（滴度）。的效價（滴度）。 注意事項注意事項（1）器材要潔凈、血清要新鮮、以確保結(jié)果）器材要潔凈、血清要新鮮、以確保結(jié)果可靠可靠（2）注意陰性、陽性對照的設(shè)立）注意陰性、陽性對照的設(shè)立（3）注意血清及致敏膠乳加樣量的比例）注意血清及致敏膠乳加樣量的比例直接凝集試驗（玻片法）直接凝集試驗（玻片法）-測測ABOABO血型血型原理原理 天然的顆粒性抗原（如細胞、細菌

12、等）與相應(yīng)抗天然的顆粒性抗原（如細胞、細菌等）與相應(yīng)抗體在適宜條件下反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物，體在適宜條件下反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物，稱為直接凝集反應(yīng)。稱為直接凝集反應(yīng)。 玻片法屬于玻片法屬于定性定性試驗。試驗。主要的試劑和器材主要的試劑和器材 抗抗A A血型定型試劑血型定型試劑 抗抗B B血型定型試劑血型定型試劑 攪拌棒攪拌棒 玻片玻片步驟步驟 取玻片取玻片1 1塊，左上角和右上角分別標上塊，左上角和右上角分別標上“A”A”和和“B”B” 用采血針采指尖血（用采血針采指尖血（左手無名指尺側(cè)左手無名指尺側(cè)），將血滴在），將血滴在玻片的兩端。玻片的兩端。 在兩血滴上分別滴上抗在兩血滴上分別滴

13、上抗A A標準血清和抗標準血清和抗B B標準血清，標準血清，用攪拌棒攪勻。用攪拌棒攪勻。 手持玻片，前后旋轉(zhuǎn)搖動，促使血清與紅細胞充分手持玻片，前后旋轉(zhuǎn)搖動，促使血清與紅細胞充分混合，用肉眼觀察有無凝集?；旌?，用肉眼觀察有無凝集。結(jié)果觀察和判斷結(jié)果觀察和判斷 有凝集時紅細胞相互聚集成團，出現(xiàn)大小不等的有凝集時紅細胞相互聚集成團，出現(xiàn)大小不等的顆粒。顆粒。注意事項注意事項 玻片應(yīng)潔凈、干燥、中性，以防止和減少玻片應(yīng)潔凈、干燥、中性，以防止和減少非特異性凝集。非特異性凝集。 室溫低于室溫低于1010時，易出現(xiàn)冷凝集而造成的時，易出現(xiàn)冷凝集而造成的結(jié)果。結(jié)果。臨床意義臨床意義 在美國風(fēng)濕病協(xié)會所規(guī)定的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷標在美國風(fēng)濕病協(xié)會所規(guī)定的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷標準中，本試驗是診斷標準之一。本試驗對類風(fēng)濕性準中，本試驗是診斷標準之一。本試驗對類風(fēng)濕性疾病的陽性率約疾病的陽性率約8090。 類風(fēng)濕因子并非類風(fēng)濕病所特有，部分正常人及肝類風(fēng)濕因子并非類風(fēng)濕病所特有，部分正常人及肝炎病人也可呈陽性反應(yīng)，炎病人也可呈陽性反應(yīng)，75歲以上的老年人陽性率歲以上的老年人陽性率較高。據(jù)報導(dǎo)，在類風(fēng)濕病活動期內(nèi)，（多