分子生物學(xué)專論ppt課件

1、專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)方向：動物基因功能組與分子免疫方向：動物基因功能組與分子免疫學(xué)學(xué)姓名：王姓名：王 文文 文文學(xué)號：學(xué)號：20191030542019103054;囊型包蟲病CE是世界上最為廣泛高度傳播的人畜共患病之一，在中國西北地域傳播也非常盛行。據(jù)估計，目前大約6百萬人有感染這種疾病的風(fēng)險，其中超越1百萬人亟需藥物治療。此外，還有超越85萬馴養(yǎng)的動物58羊曾經(jīng)感染上了CE，這將導(dǎo)致大量的公共安康問題。因此，控制CE勢在必行。在過去的幾十年里，基于免疫控制CE的研討遭到了更多的關(guān)注。;主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility c

2、omplex，MHC)MHC是由一個有組織的嚴(yán)密連鎖的基因簇編碼的分子構(gòu)成，該分子可結(jié)合處置包括原性肽寄生蟲在內(nèi)的肽抗原并提交給T淋巴細(xì)胞，從而觸發(fā)抗原特異性免疫應(yīng)對。由于免疫活動參與各種疾病的臨床過程，MHC基因表達(dá)的信息已參與人類疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎Kerlan-坎東等。 2019年，強(qiáng)直性脊柱炎王等人，2021，過敏性血管炎王等人，2019，以及羊病如淋巴性間質(zhì)性肺炎伍德爾等人，2019。雖然我們此前曾報道，哈薩克羊的MHC基因與CE抗性或敏感性有關(guān)Li等人，2019，然而，沒有系統(tǒng)的研討報道MHC基因在處于不同階段感染CE羊的表達(dá)。本研討旨在討論MHC-DQB1基因在感染受細(xì)粒棘球絳蟲

3、的中國美利奴羊的外周血淋巴細(xì)胞PBLmRNA的表達(dá)的動態(tài)變化。本研討針對囊型包蟲病的有效控制方案將具有根本意義。;1.資料14周歲的中國美利奴羊，預(yù)留，與其他種類分開豢養(yǎng)。要求它們體內(nèi)抗體對包蟲囊液HCF抗原均為陰性?？贵w由商業(yè)綿羊棘球蚴病ELISA試劑盒檢測。2.方法每只羊經(jīng)口感染10個來自于狗腸細(xì)粒棘球蚴帶有卵細(xì)胞的妊娠節(jié)片。于0天，7，21，30和60天分別感染后從羊的頸靜脈搜集血液樣本中的鈉肝素溶液，實(shí)驗終止時按照肉類例行檢查和電鏡觀測，對CE進(jìn)展診斷，將實(shí)驗過程中得到的血液樣品分為A內(nèi)部器官有包蟲囊腫和B自我治愈組以進(jìn)展下一步實(shí)驗。;綿羊外周血分別和體外培育；總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄；

4、經(jīng)過PCR擴(kuò)增cDNA；實(shí)時RT-PCR；統(tǒng)計分析;聚蔗糖泛影葡胺分層液密度梯度法 離心 分別抗凝靜脈血 獲得 PLB淋巴細(xì)胞 洗滌兩次磷酸鹽緩沖鹽水PBS；pH值7.4臺酚藍(lán)溶液 RPMI1640培育基計數(shù)稀釋 轉(zhuǎn)移 平底24孔板并放在10%二氧化碳的培育箱中。;規(guī)范的Trizol提取程序；用紫外/可見分光光度計測定RNA濃度并保管在-80度條件下；加RNA酶抑制劑反響進(jìn)展逆轉(zhuǎn)錄并進(jìn)展PCR擴(kuò)增cDNA；用于DQB1PCR擴(kuò)增的寡核苷酸引物用Primer Premier5.0找出，而G3PDH作為內(nèi)部控制引物運(yùn)用蒙塔涅等人所描畫的。將PCR產(chǎn)物克隆和測序，以檢測能否存在的靶基因。;從上述制備的DQB1轉(zhuǎn)錄程度采用實(shí)時熒光定量PCR測定DNA在基因轉(zhuǎn)錄程度從上面的預(yù)備的DNA來確定運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR；尋覓和G3PDH相對應(yīng)的歸一表達(dá)程度的內(nèi)部控制物。;1.結(jié)果A組0-21天感染表現(xiàn)逐漸添加直到第30天開場出現(xiàn)迅速銳化；在B組中，在實(shí)驗過程中，DQB1 mRNA的表達(dá)閱歷了從開場的急劇添加感染0天，感染后7天，以后表現(xiàn)出明顯的減少感染，直到第30天，閱歷了從第30天到第60天的高度感染。相比較而