丙酮酸檢測試劑盒(乳酸脫氫酶微板法)

1、北京雷根生物技術(shù)有限公司丙酮酸檢測試劑盒(乳酸脫氫酶微板法)簡介：丙酮酸(Pyruvic acid)又稱2-氧代丙酸，是參與整個生物體基本代謝的中間產(chǎn)物之一， 可通過乙酰CoA和三羧酸循環(huán)實現(xiàn)體內(nèi)糖、脂肪和氨基酸間的互相轉(zhuǎn)化，丙酮酸在三大營 養(yǎng)物質(zhì)的代謝聯(lián)系中起著重要的樞紐作用。丙酮酸是糖無氧代謝的產(chǎn)物，科研工作者常將丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循環(huán)衰竭的程度。丙酮酸檢測可采用酶催化法，該發(fā)是使用乳酸脫氫酶(LDH)催化丙 酮酸氧化，生成乳酸和 NAD +，通過分光光度法或熒光光度法測定 NADH的減少量，進而 計算出丙酮酸含量。通過分光光度比色法(酶標(biāo)儀)測定340nm 處吸光度

2、的下降速率，據(jù)此通過比色分析就可以計算出PA水平。該試劑盒可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清等樣品中內(nèi)源性的丙酮酸含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。組成：編號名稱TC0754120TStorage試劑(A):丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(25mmol/L)1ml4 C避光試劑(B):內(nèi)酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液1mlRT試劑(C):PA顯色液C1: PA Assay buffer30ml4 C避光C2: NADH3支-20 C避光臨用前，按C1:C2=10ml:1 支的比例混合，即為 PA顯色液。試劑(D): LDH solution0.2ml-20 C避光使用說明書1份操作步驟(僅供

3、參考)：1、準(zhǔn)備樣品： 血漿、血清、尿液及其他體液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-20 C凍存。 細胞或組織樣品：取恰當(dāng)細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當(dāng)勻漿，低速離心取上清，-20 C凍存，用于 PA的檢測。 高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋，如雞血清、血漿可稀釋510倍后檢測。2、 配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液：取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(25mmol/L) 稀釋液，使?jié)舛冗_到 0.5mmol/L ，即為3、配制PA-LDH顯色液(適用于自動分析儀)：。4 C避光保存24h有效。4、酶標(biāo)儀比色檢測：按照下

4、表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PA濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設(shè)置平行孔。加入物空白孔標(biāo)準(zhǔn)孔測定孔蒸餾水/訕20一一待測樣品(血清、血漿、體液等 ” M一一20丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(0.5mmol/L)/ 訕一20一PA顯色液/山196196196充分混勻，蒸餾水調(diào)零，于340nm 處讀取各管吸光度，分別為A空白1、A標(biāo)準(zhǔn)1、A測定1。LDH solutio n/ 訕4.44.44.4充分混勻，分光光度計檢測的340nm 吸光度，比色杯光徑 1.0cm，分別為A空白2、A標(biāo)準(zhǔn)2、A測定2。5、自動分析儀檢測：樣

5、品中的PA濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設(shè)置平行管。根據(jù)實驗室的自動分析儀性能，下列參數(shù)僅供參考：溫度37 CpH7.4波長340nm延遲時間30s檢測時間120s待測樣品/丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(0.5mmol/L)體積25訕PA顯色液275山計算：分光光度計比色計算公式：丙酮酸(mmol/L)=(AA測定-AA空白)/( AA標(biāo)準(zhǔn)-AA空白 X0.05 X D也可根據(jù)NADH毫摩爾吸光度計算：全血丙酮酸(mmol/L)=(AA 測定-A 空白)X(1.56/6.22) X(D/1.0)自動分析儀計算公式：血清、血漿、尿液、腦脊液丙酮酸(mmol/L)=(AAu/min)/( AAs/min) X0.5組織丙酮酸(mmol/g)=(AAu/min)/( AAs/min) X(0.5/ 待測樣品蛋白濃度(g/L)參考區(qū)間：空腹靜脈、動脈血<0.1mmol/L注意事項：1、本法適用于自動分析儀，分別監(jiān)測測定管和標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度升高速率，計算乳酸的濃度。如果采用自動分析儀，該 120T試劑盒可檢測約100次。2、如果沒有分光光度計，也可以使用酶標(biāo)