藥學(xué)畢業(yè)論文氨金黃敏顆粒微生物限度檢查方法的驗(yàn)證

1、xx大學(xué)畢業(yè)論文氨金黃敏顆粒微生物限度檢查方法的驗(yàn)證姓 名：2014年6月25日氨金黃敏顆粒微生物限度檢查方法的驗(yàn)證【摘要】目的驗(yàn)證氨金黃敏顆粒的微生物限度檢查方法是否適用于 該供試品的檢查。方法細(xì)菌計(jì)數(shù)采用低速離心一培養(yǎng)基稀釋法，霉菌及酵母菌 計(jì)數(shù)按常規(guī)檢杳法，控制菌按常規(guī)檢查法。結(jié)果 稀釋劑對照組的菌回收率大于 70%,試驗(yàn)組的菌回收率人于70%；陰性對照組未檢出陰性對照菌，試驗(yàn)組檢出 陽性試驗(yàn)菌。結(jié)論 可以用該微生物限度檢查法進(jìn)行氨金黃敏顆粒的檢查?！娟P(guān)鍵詞】 氨金黃敏顆粒 微生物限度檢查法 驗(yàn)證氨金黃敏顆粒的微生物限度檢查法本公司以前采用常規(guī)法，為了保證 檢驗(yàn)方法的科學(xué)性，現(xiàn)對本公司生

2、產(chǎn)的氨金黃敏顆粒的微生物限度檢查方法進(jìn)行 方法學(xué)驗(yàn)證，驗(yàn)證此方法是否適用于該供試品的檢查。1材料與儀器1試驗(yàn)樣品 約品名稱：氨金黃敏顆粒，批號：090901、090902、 090903,來源：公司自產(chǎn)。1.2驗(yàn)證用儀器1.2.1電熱恒溫干燥箱、電冰箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、離 心機(jī)、蒸汽滅菌鍋、集菌儀等。1.2.2玻璃器皿 錐形瓶、培養(yǎng)皿、量筒、試管、吸管等。1.3驗(yàn)證用菌種 金黃色葡萄球菌；大腸埃希菌；枯草芽砲桿菌；白 色念珠菌；黑曲霉。1.4驗(yàn)證用培養(yǎng)基及稀釋劑 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基; 膽鹽乳糖培養(yǎng)基；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；改良馬丁培養(yǎng)基；曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。2驗(yàn)證條件無

3、菌室環(huán)境潔凈度為10000級,局部潔凈度為100級，凈化消毒30min 以上，供試品及滅菌的器具等經(jīng)傳遞窗紫外殺菌燈照射30min置無菌室內(nèi)，試驗(yàn) 人員手消毒后穿無菌服進(jìn)入操作間。3方法與結(jié)果3菌液制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽他桿菌的 新鮮斜而培養(yǎng)物接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基屮，于35°c培養(yǎng)1824小時(shí)，分別取各 菌種培養(yǎng)液1ml加入().9%無菌氯化鈉溶液9ml中，10倍依次稀釋，金黃色葡萄 球菌稀釋至10-5,大腸埃希菌稀釋至10-7,枯草芽抱桿菌稀釋至10-5,約為50 100cfu/ml,備用。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基111,于2328°

4、c培養(yǎng) 2348小時(shí)，取培養(yǎng)液1ml加入0.9%無菌氯化鈉溶液9ml中，10倍依次稀釋至 10-5,約為 50100cfu/ml，備用。取黑曲霉的新鱗斜面培養(yǎng)物，用（）.9%無菌氯化鈉溶液5ml將砲了洗 下，吸取此溶液lml置一個(gè)無菌的比色管中，加0.9%無菌氯化鈉溶液適量與標(biāo) 準(zhǔn)比濁管進(jìn)行比濁，取比濁后的菌懸液1ml加入0.9%無菌氯化鈉溶液9ml屮， 10倍依次稀釋至104 約為50100cfu/ml,備用。3.2供試液制備 取供試品10g,加ph7.0無菌氯化鈉蛋白月東緩沖液至100ml,用勻漿儀 分散混勻，作為1 ： 10的供試液。3.3細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)3.3.1試驗(yàn)組

5、細(xì)菌計(jì)數(shù)釆用低速離心一培養(yǎng)基稀釋法，取1 ： 10供 試液10ml, 500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取全部上清液，用ph7.0無菌氯化鈉蛋口淼 緩沖液補(bǔ)足至原量,混勻,再從中取lml分別加入5個(gè)平皿中（每皿0.2ml）, 加入齊陽性細(xì)菌試驗(yàn)菌lml,立即傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，置32°c恒溫培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)48h,測定細(xì)菌數(shù)。霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)采用常規(guī)法，取1 ： 10供試液lml, 加入各霉菌及酵母菌試驗(yàn)菌lml,立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置25°c恒溫培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h,測定霉菌及酵母菌數(shù)。3.3.2菌液組 取稀釋好的各菌液1ml,分別加入平皿屮，加入相應(yīng)培 養(yǎng)基，置規(guī)定條件培

6、養(yǎng)，測定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。3.3.3供試品對照組按試驗(yàn)組方法，測定供試品本底菌數(shù)。3.3.4稀釋劑對照組 取稀釋劑替代供試液，方法同試驗(yàn)組。試驗(yàn)組菌冋收率（） =（試驗(yàn)組平均菌落數(shù)供試品對照組平均菌落 數(shù)）/菌液組平均菌落數(shù)）x100%稀釋劑對照組菌回收率（）二（稀釋劑對照組平均菌落數(shù)/菌液組平均菌落數(shù)） xloo%3.4控制菌檢查方法的驗(yàn)證3.4.1試驗(yàn)組 取1 ： 10的供試液10ml,置無菌條件下離心（500轉(zhuǎn)/ 分）5分鐘，取上清液置無菌試管中，ph7.0無菌氯化鈉蛋白月東緩沖液補(bǔ)足至原 量，混勻，加至膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml中，再加陽性對照菌人腸埃希菌菌液lml, 搖勻，置3537&#

7、176;c恒溫培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)1824小時(shí)。大腸埃希菌濃度同細(xì)菌、霉 菌及酵母菌數(shù)驗(yàn)證。3.4.2陰性對照組 方法同試驗(yàn)組，加入lml陰性菌（即金黃色葡萄球 菌，濃度同細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)驗(yàn)證），置3537°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824 小時(shí)。3.5結(jié)果分析3.5.1細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證結(jié)論 在三次試驗(yàn)中，稀釋劑對照 組的菌回收率均大于70%,試驗(yàn)組的菌回收率均大于70%,故可照供試液制備 方法和計(jì)數(shù)法測定氨金黃皺顆粒的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)。3.5.2控制菌驗(yàn)證結(jié)論 在三次試驗(yàn)中，陰性對照組未檢出陰性對照 菌，試驗(yàn)組檢出陽性試驗(yàn)菌，故可用此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行氨金黃 敏顆粒的控制菌檢查。4討論4.1許多藥品木身的特性（如抑菌性）會(huì)對檢驗(yàn)結(jié)果帶來影響，需要 對供試品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，以消除其本身帶來的干擾。4.2藥品的微生物檢查是保證藥品使用安全的重要檢查項(xiàng)口，必須對 每個(gè)品種的檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證。4.3試驗(yàn)過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)范，