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1、 sonichedgehog信號(hào)通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的進(jìn)程中作用機(jī)制研究 孫志濤【摘 要】:目的:研究sonic hedgehog信號(hào)通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的進(jìn)程中作用機(jī)制。方法:隨機(jī)選擇2019年1月-2019年12月至我院行結(jié)直腸癌手術(shù)的患者40例。取所有患者術(shù)中病灶部位組織和距離腫瘤10cm以上的正常粘膜組織行免疫組化檢查,比較患者正常結(jié)直腸組織和結(jié)直腸癌組織中shh的表達(dá)情況以及陽性表達(dá)率。結(jié)果:正常組織中shh表達(dá)以(-)、+為主,癌組織中表達(dá)以+、+表達(dá)為主。正常組織中shh表達(dá)陽性率為2.5%,明顯低于癌組織中82.50%,且
2、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p【關(guān)鍵詞】:shh、結(jié)直腸癌;傳導(dǎo)通路結(jié)直腸癌是臨床常見的惡性腫瘤,但是其病因病機(jī)尚未完全明確。配體音刺猬因子(sonic hedgehog,shh)是哺乳動(dòng)物hedgehog(hh)信號(hào)通路的主要成員之一,其介導(dǎo)的做種靶基因在脊椎動(dòng)物的胚胎發(fā)育過程中起到重要的作用1。而研究發(fā)現(xiàn),hh信號(hào)通路發(fā)生異?;罨吓c腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。為了觀察shh信號(hào)通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中的作用機(jī)制,我院進(jìn)行了本次研究,以便為結(jié)直腸癌的治療尋找新的靶點(diǎn)。1 資料與方法1.1 患者選擇隨機(jī)選擇2019年1月-2019年12月至我院行結(jié)直腸癌手術(shù)的患者40例進(jìn)行臨床研究。所有患者均由術(shù)后病理
3、檢查確定診斷。其中男性患者27例,女性患者13例,年齡41-76歲,平均年齡(57.33±6.33)歲,病變部位升結(jié)腸7例,橫結(jié)腸6例,降結(jié)腸8例,乙狀結(jié)腸11例,直腸8例。所有患者術(shù)前均未給予放化療以及免疫治療。1.2 方法1.2.1 研究方法取所有患者術(shù)中病灶部位組織和距離腫瘤10cm以上的正常粘膜組織。將取得組織修剪成 1.5 cm×2.0cm ×0.3cm大小的組織塊置于10% 中性甲醛溶液中固定8-24 h ,常規(guī)制備蠟塊,放置于- 20,冰箱干燥保存,行免疫組化方法檢測(cè)。免疫免疫組化實(shí)驗(yàn)中所需試劑兔抗人shh單克隆抗體、sp試劑盒、dab顯色試劑盒均購
4、自北京中杉金橋公司。sabc免疫組化試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。采集到的患者病理組織常規(guī)制成蠟塊,組織切片,在68下烤片12h,常規(guī)行二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水,放置于98的edta緩沖液中煮沸3min,自然冷卻20min,冷水沖洗高壓鍋至室溫,pbs沖洗3次,每次2min,以修復(fù)抗原。阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶,滴加一抗,室溫放置3h,使用pbs沖洗3次,每次2min,滴加二抗,37孵育30min,pbs沖洗3次,每次2min,給予dab反應(yīng)染色,常規(guī)脫水,透明、干燥、封片。(實(shí)驗(yàn)過程太陳舊)1.2.2 分析指標(biāo)比較患者正常結(jié)直腸組織和結(jié)直腸癌組織中shh的表達(dá)情況以及陽性表達(dá)率。shh
5、在細(xì)胞質(zhì)上出現(xiàn)棕黃色染色為陽性細(xì)胞,使用半定量積分法進(jìn)行評(píng)估2,細(xì)胞無染色為(-),淡黃色為+,淺棕黃色為+,棕黃色為+,深棕黃色或者棕褐色為+,其中(-)、+為陰性,+、+、+為陽性。1.3 數(shù)據(jù)處理用spss19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件處理研究中所有相關(guān)數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料采用(n,%)表示,采用2檢驗(yàn),以 p 2 結(jié)果正常組織中shh表達(dá)以(-)、+為主,癌組織中表達(dá)以+、+表達(dá)為主。正常組織中shh表達(dá)陽性率為2.5%,明顯低于癌組織中82.50%,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),詳見表1、表2。3 討論hh信號(hào)通路與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)系仍然處于研究中。monzo3等研究發(fā)現(xiàn)
6、shh在57例結(jié)直腸癌患者中腫瘤組織的表達(dá)水平明顯高于正常組織。但是chatel等在7中結(jié)直腸癌細(xì)胞系中沒有1個(gè)細(xì)胞系表達(dá)出完整的hh信號(hào)通路成員,因此對(duì)于shh在結(jié)直腸癌中的作用和作用機(jī)制仍然有所爭議。hedgehog(hh)信號(hào)分子是由信號(hào)細(xì)胞所分泌,通常作用范圍在20個(gè)細(xì)胞之內(nèi),其生產(chǎn)在時(shí)間和空間上均被嚴(yán)格限制,能夠在n端不同的氨基酸殘基微單發(fā)生膽固醇化和軟脂?;揎?,進(jìn)而達(dá)到制約其擴(kuò)散的目的,同時(shí)能夠增強(qiáng)與質(zhì)膜的親和性4。當(dāng)hh結(jié)合靶細(xì)胞膜上受體ptc之后,能夠釋放smo受體以阻斷pthc蛋白的功能,進(jìn)而在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展的過程中起到作用。從本次研究來看,正常組織中shh表達(dá)以(-)、+為主,癌組織中表達(dá)以+、+表達(dá)為主。正常組織中shh表達(dá)陽性率為2.5%,明顯低于癌組織中82.50%,說明sonichedgehog信號(hào)通路在結(jié)直腸癌病灶中呈現(xiàn)高表達(dá),提示與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。參考文獻(xiàn)付祥勝.結(jié)直腸癌中hedgehog信號(hào)通路的配體依賴性活性改變及其表觀修飾機(jī)制研究d.南方醫(yī)科大學(xué),2009.翁子毅,子樹明,楊明,等.hedgehog信號(hào)通路活化在結(jié)直腸病變的意義j.上海醫(yī)學(xué),2011(05):3+55-57.王華,李奇奇,朱子清,等.結(jié)直腸癌中hedgehog信號(hào)通路的研
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