20156340050-董霞

1、濰坊醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)報(bào)告科目：食品理化檢驗(yàn)班級(jí)： 2015 級(jí)組別： 12 姓名：董霞學(xué)號(hào)： 20156340050 試驗(yàn)項(xiàng)目：克倫特羅檢測(cè)（ elisa檢測(cè)法）日期： 2018.05.03一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、通過(guò)本次試驗(yàn)同學(xué)們能夠掌握elisa法檢測(cè)瘦肉精的原理2、掌握快速檢測(cè)的基本程序及操作，具有獨(dú)立進(jìn)行快速檢測(cè)的基本技能。二、實(shí)驗(yàn)原理：間接競(jìng)爭(zhēng) elisa方法1、在酶標(biāo)板孔條上預(yù)包被克倫特羅抗原，2、 加入抗克倫特羅抗體， 樣本殘留的克倫特羅和微孔條上預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)抗克倫特羅抗體，3、加入酶標(biāo)二抗后，用 tmb 底物（標(biāo)記物為辣根過(guò)氧化物酶）顯色。4、樣本吸光值與其殘留物克倫特羅呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)

2、準(zhǔn)曲線比較再乘以其相對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中克倫特羅的含量。三、實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備：克倫特羅 elisa檢測(cè)試劑盒（深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司）、微孔板酶標(biāo)儀450/630nm、電子稱（ 0.01g）、漩渦混合振蕩器、離心機(jī)（15ml管和 1.5ml ep 管）、恒溫培養(yǎng)箱四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、樣品前處理組織用剪刀剪碎，研缽內(nèi)研成勻漿，取2g肉/ 肝臟勻漿放入 15ml離心管中 加入 6ml去離子水，充分震蕩 2min，室溫 4000r/min 以上離心 10分鐘，（注若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85水浴 10min后再離心。） 取 20ul 上層液進(jìn)行分析，樣本稀釋4 倍。2、

3、分析微孔板編號(hào) ， 如 1-12 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品， 13/14 號(hào)樣品等 ( 每樣品或標(biāo)準(zhǔn)品均做平行對(duì)照即各2 孔) 加標(biāo)準(zhǔn)品 / 樣品： 微孔中加入 20ul 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品 +50ul克倫特羅酶標(biāo)物 +80ul 克倫特羅抗試劑，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25避光 30min 洗板： 孔內(nèi)液體甩干，用去離子水液300ul/ 孔，充分洗滌 5 次，每次間隔 30s，用吸水紙拍干（若有未拍干的氣泡用槍頭戳破）顯色： 每孔加入 50ul 底物a+50ul底物b，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25避光 15-20min（藍(lán)色）測(cè)定： 加入 50ul 終止液（黃色），輕輕振蕩混勻。酶標(biāo)儀450nm/630nm

4、 雙波長(zhǎng)檢測(cè) od 值（可在加入終止液前目測(cè)含量）。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及計(jì)算：表 1 瘦肉精濃度與吸光度濃度（ppb）0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 ?樣品 1 ?樣品 2 吸光度 1 2.387 1.815 1.326 0.708 0.281 0.134 2.091 1.317 吸光度2 2.491 1.564 0.840 0.691 0.321 0.123 2.033 1.234 平均值2.439 1.690 1.083 0.700 0.301 0.129 2.062 1.276 吸光度值百分比（%） 69.2944.4 28.70 12.34 5.29 84.54 52.32 說(shuō)明

5、： 在 0.1ppb 和 8.1ppb 偏差太大，所以刪除樣品 1：把吸光度值百分比y=84.54%，x=exp(26.943-84.54)/14.59)，得?1=0.019ppb, 則樣品一的濃度為： 4*0.019=0.076ppb, 也就是 0.076ug/kg 樣品 2：把吸光度值百分比y=52.32%，x=exp(26.943-52.32)/14.59),得?2=0.176ppb，則樣品二的濃度為： 4*0.176=0.704ppb, 也就是 0.704ug/kg 六、討論結(jié)果分析：根據(jù)國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)gb/t 5009.192-2003 ，樣品一中的豬肉 , 瘦肉精含量為 0.076ug/kg ，樣品二中的 5 豬肝, 瘦肉精含量為 0.704ug/kg ，動(dòng)物性食品中克倫特羅酶聯(lián)免疫法的檢出限為0.5ug/kg. 線性范圍為 0.004ng0.054ng. 所以樣品一豬肉的瘦肉精含量沒(méi)有超標(biāo)，但豬肝瘦肉精含量超標(biāo)。存在的問(wèn)題分析：y = -14.59ln(x) + 26.943r2 = 0.9999010203040500.1110吸光度值標(biāo)準(zhǔn)值瘦肉精濃度檢測(cè)計(jì)算吸光度值百分比對(duì)數(shù) (吸光度值百分比)1、實(shí)驗(yàn)室溫度低于25 攝氏度，結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)誤差2、做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)第一組和第五組數(shù)據(jù)偏差太大的原因可能是在搖勻時(shí)有濺出或混亂，導(dǎo)致測(cè)量的吸光度