《PCR技術(shù)簡史》ppt課件

1、PCR技術(shù)簡史 1985年，美國年，美國PE-Cetus公司公司的的Mullis等人發(fā)明等人發(fā)明PCR 根本原理是在試管中模擬細(xì)根本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)的DNA復(fù)制復(fù)制 1993年，年，Mullis等因此項技等因此項技術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎引物引物引物引物7272延伸延伸PCR的反響體系的反響體系4種dNTP混合物各200umol/L引物 各10100pmol模板DNA 0.12ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 201234522557294時間min溫度PCR的根本原理適溫延伸

2、3高溫變性1低溫退火2反復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性構(gòu)成2條單鏈子鏈延伸DNA加倍PCR的根本原理PCR反響條件PCR過程PCR的特點1234522557294時間min溫度適溫延伸3高溫變性1低溫退火2反復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性子鏈延伸DNA加倍DNA變性構(gòu)成2條單鏈模板DNA95PCR的根本原理PCR反響條件PCR過程PCR的特點9550引物1引物2DNA引物PCR的根本原理PCR反響條件PCR過程PCR的特點50引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的根本原

3、理PCR反響條件PCR過程PCR的特點72第1輪終了95第2輪開場PCR的根本原理PCR反響條件PCR過程PCR的特點955072TaqTaqTaqTaqPCR的根本原理PCR反響條件PCR過程PCR的特點72第2輪終了PCR的根本原理PCR反響條件PCR過程PCR的特點模板DNA第1輪擴(kuò)增第2輪擴(kuò)增第3輪擴(kuò)增第4輪擴(kuò)增第5輪擴(kuò)增第6輪擴(kuò)增PCR的特點的特點靈敏度高靈敏度高簡便、快速簡便、快速對標(biāo)本的純度要求低，血液、體腔液、洗嗽液、對標(biāo)本的純度要求低，血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織的粗提毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織的粗提DNA。PCR的類型和運(yùn)用55A正常人A病 人正常人 (-)

4、病 人 (+)病原微生物基因A 現(xiàn) 嫌1 嫌2 嫌38SNP技術(shù)技術(shù)SNP (Single Nucleotide Polymorphism)，單核，單核苷酸多態(tài)性，是指苷酸多態(tài)性，是指DNA序列中單個核苷酸序列中單個核苷酸 突變突變引起的多態(tài)性。引起的多態(tài)性。9RAPD技術(shù)技術(shù)RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA稱為隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性稱為隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA，RAPD是經(jīng)過利用隨機(jī)合成的是經(jīng)過利用隨機(jī)合成的10堿基寡聚核苷酸堿基寡聚核苷酸作為引物作為引物,對基因組進(jìn)展對基因組進(jìn)展PCR擴(kuò)增，這些擴(kuò)擴(kuò)增，這些擴(kuò)增產(chǎn)物增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性片段的多態(tài)性,反映了基因組相反映了基因組相應(yīng)區(qū)域的應(yīng)區(qū)域的DNA多態(tài)性。多態(tài)性。 10RACE 技術(shù)技術(shù) RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends