放散試驗(yàn)PPT課件

1、第1頁/共21頁第2頁/共21頁放散試驗(yàn) 方法 放散試驗(yàn)的方法很多， ABO 血型IgM 抗體以熱放散法為常用。 Rh 血型IgG 抗體以乙醚放散法為常用。第3頁/共21頁加熱放散法 試劑 操作 注意事項(xiàng)第4頁/共21頁第5頁/共21頁加熱放散法試劑 抗 A和抗B分型血清。 2%A 型和B型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。 受檢紅細(xì)胞。第6頁/共21頁加熱放散法操作 1.將受檢紅細(xì)胞以大量生理鹽水洗滌3 次，末次洗滌后，將鹽水除盡，取壓實(shí)紅細(xì)胞l份，分別與2 份抗A 和抗B 分型血清混合。置4lh，每隔10min 將試管振搖1次，使充分混合。第7頁/共21頁加熱放散法操作 2. 離心去除上清液，以 4冷鹽

2、水洗滌紅細(xì)胞3 -4 次，傾去洗滌液，留取壓實(shí)紅細(xì)胞，加1/2容積的生理鹽水 (如放散液不立刻進(jìn)行檢查，應(yīng)以AB型血清代理生理鹽水)，置56 水浴中10 min , 每隔15 s 振搖l 次，使吸附在紅細(xì)胞上的抗體充分放散。第8頁/共21頁加熱放散法操作 3.立刻以3000r/min離心，離心時(shí)套管內(nèi)放溫水，使溫度盡量保持在56，分離得的上清液即為放散液。 4.將放散液用2% A 型和B 型試劑紅細(xì)胞鑒定抗體，即可檢出受檢紅細(xì)胞的血型。 第9頁/共21頁加熱放散法操作 如實(shí)驗(yàn)的目的鑒定A亞型，則可用已知A亞型紅細(xì)胞同時(shí)作放散實(shí)驗(yàn)，按放散液抗體的強(qiáng)度A1A2A3AxAm，判定受檢紅細(xì)胞亞型的型別

3、，B亞型的放散液鑒定方法相似。第10頁/共21頁加熱放散法注意事項(xiàng) 1.為了使放散液內(nèi)含有最多的抗體，吸收血清量應(yīng)加大。 2. 放散時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格注意溫度和時(shí)間。溫度過高紅細(xì)胞易溶解;溫度過低，抗體從紅細(xì)胞上放散不完全。 3. 直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性的紅細(xì)胞，如新生兒溶血病患兒或自身免疫性溶血性貧血患者，經(jīng)洗滌后即可作抗體放散試驗(yàn)。 4. 放散液中抗體易變性，故應(yīng)立刻進(jìn)行鑒定。若需保存，應(yīng)將抗體放散于選定的AB型血清或牛白蛋白液中。第11頁/共21頁第12頁/共21頁乙醚放散法 試劑 操作 特點(diǎn)第13頁/共21頁乙醚放散法試劑受檢者血清相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞(抗凝血)乙醚（分析試劑）AB血清第14頁/共

4、21頁乙醚放散法操作取具有相應(yīng)抗抗原的抗凝血，離心后吸去血漿，加大量生理鹽水，洗滌1次，離心，取壓實(shí)紅細(xì)胞備用。取受檢者血清5ml，加壓實(shí)紅細(xì)胞1 ml，混勻后放在適當(dāng)溫度中1小時(shí)，在此期間要搖勻1-2次。離心。離心后取出，將上清液吸出另放1管，鑒定上清液中的抗體。第15頁/共21頁乙醚放散法操作將紅細(xì)胞用鹽水洗滌3次，離心壓實(shí)紅細(xì)胞。取1體積壓實(shí)紅細(xì)胞，加1體積AB型血清或生理鹽水和2體積乙醚，顛倒搖勻10min，然后以3000r/min離心5 min.離心后即分成3層，最上層是乙醚，中層是細(xì)胞基質(zhì)，下層是具有抗體的放散液，其色深紅。第16頁/共21頁第17頁/共21頁乙醚放散法操作用清潔的吸管吸出放散液，若有混濁，可再離心1次。將放散液放置37水浴中30 min，除盡乙醚，然后鑒定抗體。第18頁/共21頁乙醚放散法特點(diǎn) 本試驗(yàn)適用于鑒定 Rh 抗體。最大優(yōu)點(diǎn)用于檢查獲得性溶血性貧血，此種患者的紅細(xì)胞為直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性