細菌內(nèi)毒素檢查操作規(guī)程

1、細菌內(nèi)毒素檢查操作規(guī)程*制藥有限賁任公司u的：建立一個規(guī)范的細菌內(nèi)毒素檢杳操作規(guī)程。范i韋i：木規(guī)程適用于細菌內(nèi)毒素檢 查。職責(zé)：牛物檢測人員対木規(guī)程實施負責(zé)。內(nèi)容：1準(zhǔn)備工作1.1設(shè)備用具的洗滌及除熱原111設(shè)備與用貝刻度吸管（1、2、5. 10ml）. 10mm3 75mm試管、試管架、不銹鋼盒（或鋁飯盒）、不銹鋼筒 （或鋁筒）、洗耳球、電熱干燥箱、恒溫水浴箱、定時鐘、電冰箱、旋渦混合器。1.1.2 洗滌及除熱原所用的玻璃器皿，先用自來水沖洗，再浸泡在洗液屮過夜，収出后用自來水沖洗至ph 中性，再用注射用水沖洗三次。將刻度吸管放入金屬筒內(nèi)，試管、小瓶等放入金屬盒內(nèi)， 于250°c

2、十烤至少60分鐘，也可采川其其它確證不十?dāng)_細菌內(nèi)毒素檢査的適宜方法。若使 用塑料器械，如微孔板和微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒索并冃對試驗無干 擾的器械。1.2試劑與標(biāo)準(zhǔn)品1.2. 1內(nèi)毒素檢查用水（即無熱原水）,為內(nèi)毒素含量不超過0015eu/ml的滅菌 注射用水。1.2.2 75%酒精棉。文件名稱細雷i內(nèi)毒素檢査操作規(guī)程編號編制者審核者批準(zhǔn)者編制日期審核日期批準(zhǔn)日期編制依據(jù)版本號頒發(fā)部門制作備份分發(fā)部門實施日期第1頁共4頁細菌內(nèi)毒素檢杳操作規(guī)程1.2.3細菌內(nèi)毒索丁作標(biāo)準(zhǔn)品，系以細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價，川于試 驗屮的賞試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗及各種陽性對照。由中國藥

3、品生物制品檢定所標(biāo)定和 供應(yīng)。1.2.4供試品溶液的制備：某些供試詁需進行復(fù)溶，稀釋或在水性溶液屮浸提制成供試詁溶液。-般要求供試詁溶 液的ph值在6. 0-8. 0的范圍內(nèi)。對于過酸、過堿或本身有緩沖能力的供試品，需調(diào)節(jié)被 測溶液(或具稀釋液)的pll值，町使川酸、堿溶液或蜜試劑生產(chǎn)廠家的推薦的適宜的緩 沖液調(diào)節(jié)ph值。酸或堿溶液須用細菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器屮配制。緩 沖液必須經(jīng)過驗證不含內(nèi)毒索和干擾因子。內(nèi)毒索限值的確定：藥品、生物制品的細菌內(nèi)犧索限值(l) 一般按以下公式確定：ifk/m式中：l為供試品的細菌內(nèi)毒素限值,以eu/ml、eu/mg或eu/u (活性單位)表示;

4、k為人每公斤體重每小時最大可接受的內(nèi)毒素劑量，以eu/(kg2h)表示，注射劑 k=5eu/(kg2h),放射性藥品注射劑 k二2.5eu/( kg2h),鞘內(nèi)用注射劑 k=0. 2eu/( kg2 h)；m為人用每公斤體重每小時的最大供試品劑量,以ml/(kg2 h) > mg/( kg2 h)或u( kg2 h) 表示，人均體重按60kg計算,注射時間若不足1小時,按1小時計算。按人用劑量計算限值時，如遇特殊情況，可根據(jù)生產(chǎn)和臨床用藥實際情況做必耍調(diào)整， 但需說明理由。確定最大有效稀釋借數(shù)(mvd)最大有效稀釋借數(shù)是指在試驗中供試品溶液被允許稀釋 的最大倍數(shù)，在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度

5、下進行內(nèi)毒素限値的檢測。用以下公式來確定 mvd：fvd=c21/ x式中l(wèi)為供試品的細菌內(nèi)莓素限值；c為供試品溶液的濃度，當(dāng)l以eu/ml表示時，則c等于l.oml/ml,當(dāng)i,第2頁共4 頁細菌內(nèi)毒索檢杳操作規(guī)程以eu/mg或eu/u表示時，c的單位需為mg/ml或u/mlo如供試品為注射用無菌粉末或 原料藥，則mvd取1,可計算供試品的最小有效稀解濃度c=x/l；x為在凝膠法屮蛍試劑的標(biāo)示靈敏度(eu/ml),或是在光度測定法屮所使用的標(biāo)準(zhǔn)曲 線上最低的內(nèi)毒素濃度。1.2.6蚩試劑，應(yīng)具有國家主管部門的批準(zhǔn)文號。為凍t品，規(guī)格有0.1ml/支和0. 5ml/支兩種。在使川新一批的蜜試劑前

6、，必須進行蜜試劑靈敏度復(fù)核實驗。藥典小己有規(guī)定的品種或有其他內(nèi)毒索檢驗標(biāo)準(zhǔn)的品種，可直接進行內(nèi)毒索檢查，如在 檢驗屮出現(xiàn)干擾的情況需再進行干擾實驗的驗證；其他未建立內(nèi)毒索檢杳的品種需先進行 干擾實驗，確定不干擾濃度后再進行內(nèi)毒素檢查。細菌內(nèi)毒素檢查過程中的陰性對照、陽性對照和供試品陽性對照必須同時進行，否則實 驗結(jié)果無效。2.供試品測定按卜表制備溶液a、b、c和d。使用稀釋倍數(shù)為mvd并且已經(jīng)排除干擾的供試胡溶液來 制備溶液a和b。溶液的制備編號內(nèi)毒素濃度/配制內(nèi)毒素的溶液平行管?a無/供試品溶液2b2a /供試品溶液2c2a /檢査用水2d尢/檢查用水2注：a為供試品溶液；b為供試品陽性對照

7、：c為陽性對照；d為陰性對照。根據(jù)蛍試 劑靈敏度的標(biāo)示量(入)，將細菌內(nèi)壽索國家標(biāo)準(zhǔn)品或用細菌內(nèi)壽索檢查用水溶解，在旋 渦混合器上混勻15分鐘，然后按上表制備供試品陽性對照與陽性對照，每稀釋一步均應(yīng) 在旋渦混介器上混勻30秒鐘。取卷試劑復(fù)溶后的0. 1訥/支規(guī)格的卷試劑原安瓶8支，其 中4支屮2支分別加入0. 1ml 2x的內(nèi)毒索標(biāo)準(zhǔn)溶液與2支0. iml2 x的供試品溶液，另 外4支中2支管加入0.1ml.第3頁共4頁細菌內(nèi)毒素檢查操作規(guī)程細菌內(nèi)毒索檢杳用水與2支0.1ml的供試品溶液。將試管屮溶液輕輕混勻后，封閉管 口，垂直放入37°c±1°c的恒溫器中,保溫60分鐘±2分鐘。將試管從恒溫器屮輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180。，若管內(nèi)形成凝膠，并.11凝膠不變形、不 從管壁滑脫者為陽性；未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁滑脫者為陰性。保 溫和拿取試管過程應(yīng)避免受到振動造成假陰性結(jié)果。結(jié)果判斷若陰性對照溶液d的平行管均為陰性，供試站陽性對照溶液b的平行管均為陽性，陽性 對照溶液c的平等管均為陽性，試驗有效。若溶液a的兩個平行管均為陰性，判供試品符 合規(guī)定；若溶液a的兩個平行管均為陽性判為供試品不符介規(guī)定。若溶液a的兩個平行管